一、白细胞介素-1对β淀粉样蛋白胞毒及基因表达的调节作用（论文文献综述）
王小燕[1]（2021）在《基于小胶质细胞极化、树突棘稳定探讨加减薯蓣丸改善APP/PS1小鼠学习记忆能力的作用机制》文中进行了进一步梳理目的本文理论部分通过总结中医古今医家对痴呆的认识,探讨从健脾补肾、化痰祛瘀论治阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）的理论可行性;实验部分通过对AD模型小鼠的行为学、海马病理形态的观察,探讨加减薯蓣丸（Modified Shuyu Pills,MSP）对改善AD模型小鼠的学习记忆能力治疗作用,并从小胶质细胞表型转化Nlrp3/ASC/Caspase-1通路和树突棘稳定BDNF/Rac1/Cofilin通路等方面,探讨加减薯蓣丸改善APP/PS1小鼠学习记忆的作用机制。方法1理论部分:通过查阅古代医籍和检索现代数据库,梳理古今医家对痴呆病机的认识,从脾肾亏虚、痰瘀互结方面探讨治疗AD的可行性,并结合团队的前期研究基础和现代药理学结果,为进一步探讨加减薯蓣丸治疗AD的作用机制提供理论依据。2实验部分:将APP/PS1小鼠随机分为3组,分别为模型组,多奈哌齐组、加减薯蓣丸组,每组10只,C57BL/6J小鼠设为正常组。加减薯蓣丸组给药剂量为每日14 g/kg,盐酸多奈哌齐组给药剂量为每日1 mg/kg,每日灌胃量为0.2ml/10g,连续35 d灌胃。正常组和模型组给予同等体积的生理盐水。灌胃结束后用Morris水迷宫观察各组小鼠的学习记忆能力;旷场实验观察小鼠焦虑抑郁情况。行为学检测后,取固定脑组织,采用Nissl染色法观察各小鼠海马神经元病理改变;免疫组化法观察各组小鼠海马Aβ1-42沉积情况、SYN、PSD-95蛋白表达情况;高尔基染色观察各组小鼠树突棘变化情况;免疫荧光法检测Iba1、i NOS共表达和Iba1、CD36共表达情况。行为学检测过后,取新鲜脑组织,用Western blot检测Nlrp3、ASC、Caspase-1、IL-1β、BDNF、Trk B、Rac1、p-LIMK1、LIMK1、p-Cofilin、Cofilin蛋白表达情况;用qPCR检测Nlrp3、IL-1β、TNFα、IL-18、IL-4、IL-10、BDNF、LIMK mRNA相对表达量。结果1 Morris水迷宫空间探索实验结果:与正常组比较,模型组小鼠的逃避潜伏期显着延长（P<0.01）;与模型组比较,多奈哌齐组、加减薯蓣丸组小鼠的逃避潜伏期缩短（P<0.05）;多奈哌齐组与加减薯蓣丸相比,不具有统计学差异。定航实验结果,与正常组比较,模型组小鼠的穿越平台次数显着减少,目标象限运动距离百分比和目标象限停留时间缩短（P<0.01）;与模型组比较,多奈哌齐组、加减薯蓣丸组小鼠穿越平台次数和目标象限运动距离百分比和目标象限停留时间增加（P<0.05）;多奈哌齐组与加减薯蓣丸组相比,不具有统计学差异。2旷场实验结果:与正常组比较,模型组小鼠总的运动距离、中央区运动距离百分比和中央区停留时间百分比明显降低（P<0.01）;与模型组比较,多奈哌齐组、加减薯蓣丸组小鼠的总运动距离、中央区运动距离百分比和中央区停留时间百分比增加（P<0.05）;与多奈哌齐组比较,加减薯蓣丸组小鼠总运动距离增加（P<0.05）,中央区运动距离百分比、中央区停留时间百分比,差异没有统计学意义。3 Nissl染色结果:海马CA1区Nissl染色显示,正常组小鼠海马神经元尼氏体丰富,细胞膜完整,着色明显。与正常组比较,模型组小鼠海马神经元细胞数量明显减少,细胞膜破裂,着色较浅,尼氏体数量减少。与模型组比较,多奈哌齐组、加减薯蓣丸组小鼠海马神经元数量增加,尼氏体增多,着色加深。4免疫组化结果:海马区Aβ1-42免疫组化显示,与正常组比较,模型组小鼠海马CA1区Aβ1-42沉积升高（P<0.01）;与模型组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马CA1区Aβ1-42降低（P<0.05）;与多奈哌齐组相比,加减薯蓣丸组小鼠海马CA1区Aβ1-42降低（P<0.05）。与正常组比较,模型组小鼠海马CA1区SYN、PSD-95蛋白表达明显降低（P<0.01）;与模型组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马CA1区SYN、PSD-95蛋白表达明显升高（P<0.01）,与多奈哌齐组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马CA1区SYN、PSD-95蛋白表达明显升高（P<0.05）。5高尔基染色结果:海马高尔基病理染色能够评估树突棘形态,结果显示,与正常组比较,模型组小鼠海马区树突棘密度明显减少（P<0.01）;与模型组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马区树突棘密度增加（P<0.05）;与多奈哌齐组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马区树突棘密度增加（P<0.05）。6免疫荧光结果:与正常组比较,模型组小鼠海马区Iba1/i NOS的共表达增多,Iba1/CD36共表达减少;与模型组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马Iba1/i NOS共表达减少,Iba1/CD36共表达增多;与多奈哌齐组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马Iba1/i NOS共表达减少,Iba1/CD36共表达增多。7 WB结果:与正常组比较,模型组小鼠海马Nlrp3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白的表达显着增加,BDNF、Arg-1、Trk B、Rac1蛋白表达显着降低（P<0.01）,p-LIMK/LIMK、P-Cofilin/Cofilin比值显着降低（P<0.01）;与模型组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马Nlrp3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白表达降低,BDNF、Arg-1、Trk B、Rac1蛋白表达升高（P<0.05）,p-LIMK/LIMK、P-Cofilin/Cofilin比值升高（P<0.05）;与多奈哌齐组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马Nlrp3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白表达降低,BDNF、Arg-1、Trk B、Rac1蛋白表达升高（P<0.05）,p-LIMK/LIMK、P-Cofilin/Cofilin比值升高（P<0.05）。8 qPCR结果:与正常组比较,模型组小鼠海马Nlrp3、IL-1β、TNFα、IL-18 mRNA的相对表达量升高,IL-4、IL-10、BDNF、LIMK mRNA的相对表达量降低（P<0.05）。与模型组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马Nlrp3、IL-1β、TNFα、IL-18 mRNA相对表达量降低,IL-4、IL-10、BDNF、LIMK mRNA的相对表达量升高（P<0.05）;与多奈哌齐组比较,加减薯蓣丸组小鼠海马Nlrp3、IL-1β、TNFα、IL-18 mRNA相对表达量降低,IL-4、IL-10、BDNF、LIMK mRNA的相对表达量升高（P<0.05）。结论1脾肾亏虚,痰瘀互结是AD的基本病机,健脾补肾、化痰祛瘀是AD有效的治疗方法;2加减薯蓣丸能够改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力和抑郁情况;3加减薯蓣丸能够抑制Nlrp3/ASC/Caspase-1通路促进小胶质细胞向M2表型转化,增加神经营养和修复功能;4加减薯蓣丸能够通过BDNF/Rac1/LIMK/Cofilin通路促进树突棘稳定,改善学习记忆障碍。
都屹泓,孙焱,杨若愚,王丽岩,蔡明[2]（2021）在《轻度认知障碍神经炎症机制的作用靶点》文中研究表明背景:临床上,轻度认知障碍是正常衰老认知下降与阿尔茨海默症早期之间的过渡状态,被认为是预防或改变阿尔茨海默症退行性变的最佳阶段。近年来,越来越多的研究表明,神经炎症是轻度认知障碍的核心发病机制和主要早期病理特征之一。目的:综述国内外神经炎症导致轻度认知障碍的机制研究进展。方法:英文检索词为"neuroinflammation,mild cognitive impairment,proinflammatory cytokines,microglia,astroglia,NLRP3,NF-κB,TNF-α,CD40",中文检索词为"神经炎症,轻度认知障碍,促炎细胞因子,小胶质细胞,星形胶质细胞,NLRP3炎症小体,核因子κB,肿瘤坏死因子α,白细胞分化抗原40",检索2000至2020年Pub Med、CNKI、万方数据库中收录的轻度认知障碍神经炎症机制研究的相关文献,进行总结分析。结果与结论:（1）由一系列复杂的因素,例如糖尿病、肥胖症和脑创伤等引起的慢性系统性炎症,以及脑内β-淀粉样蛋白沉积、能量代谢障碍和衰老引起的神经元、脑内细胞死亡等,共同导致脑内神经炎症的产生并且激活胶质细胞,被激活的胶质细胞持续释放肿瘤坏死因子α、NLRP3、核因子κB、CD40等炎症因子,造成脑内神经元、突触等受到损伤,最终导致认知功能受损;（2）因此调节神经炎症有望成为轻度认知障碍有效的治疗策略。
刘婷[3]（2021）在《音乐干预对APP/PS1小鼠空间认知能力的影响及机制研究》文中研究表明阿尔茨海默症（Alzheimers Disease,AD）是一种神经退行性疾病,临床上以进行性认知功能障碍和神经精神症状为主要表现。目前,全球有4000多万AD患者,中国AD患者超过1000万,到2050年,全球AD患者将超过1.15亿。鉴于日益增长的患病率及药物作用的局限性,寻找非药物干预手段具有重要意义。音乐疗法已被广泛用于临床神经精神疾病,包括AD的治疗,并且有研究发现聆听音乐具有减缓AD认知功能下降的潜在作用。但至今为止,音乐干预的确切机制尚不清楚。本实验室在前期工作中,发现莫扎特音乐及其莫扎特音乐节奏具有改善认知功能的效果。本工作中,我们主要关注音乐对AD小鼠认知功能的影响并探讨其可能的生物学机制。我们将3月龄的APP/PS1AD小鼠随机分为莫扎特组（聆听莫扎特音乐）、节奏组（聆听莫扎特音乐的节奏）、空白组（无音乐干预）,并用C57小鼠作为正常对照。分别检测3月龄、6月龄、9月龄和12月龄时小鼠空间认知能力,并观察不同条件下AD相关的神经病理变化,及大脑神经炎症改变,探讨音乐干预AD的可能机制。本论文的主要工作如下:1.利用水迷宫测试,观察了音乐干预对小鼠空间认知能力的改变。结果发现,在12月龄时,节奏组小鼠在水迷宫中的逃逸潜伏期与空白组小鼠出现显着性差异,提示莫扎特节奏干预能够在一定程度上减缓AD小鼠认知功能的下降。2.针对AD的主要神经病理特征,我们利用免疫荧光染色技术检测了不同阶段小鼠海马Aβ42、Tau蛋白的表达水平以及海马神经元数量,酶联免疫吸附法（ELISA）检测了血清中Aβ40和p-Tau181蛋白的表达水平。结果发现,与C57小鼠相比,随着年龄增加,AD小鼠出现相应的神经病理变化。与空白组相比,音乐干预能够降低海马和血清中Aβ40和p-Tau181蛋白的表达,并且能够减少神经元的丢失,莫扎特节奏组具有更明显的效果。3.为了了解音乐干预是否通过降低大脑免疫炎性反应改善AD的进程,我们检测了不同阶段小鼠血清中促炎因子（IL-1、IL-6、TNF-α）的含量以及海马中小胶质细胞的数量。结果发现,AD小鼠促炎因子（IL-1、IL-6、TNF-α）的含量会随着月龄的增加而增加,而小胶质细胞的数量会随着月龄的增加而减少。提示音乐干预能够降低AD小鼠中促炎因子的产生,减缓小胶质细胞的丢失,且伴随干预时间的延长,作用越明显。4.进一步,我们对各组小鼠肠道形态进行了观察。结果发现,各组均没发现明显的肠道病理形态变化,C57小鼠与空白组AD小鼠小肠绒毛发育无明显差异,而音乐干预组小鼠肠道发育（Vh、Cd及Vh/Cd值）有升高的趋势,提示音乐干预有可能影响肠绒毛的发育。总之,本文的研究表明,音乐干预能够在一定程度上减缓APP/PS1小鼠的空间认知能力障碍,并能减少Aβ和Tau蛋白的表达,减缓神经元丢失;音乐干预可能通过降低促炎因子的产生,减缓小胶质细胞的丢失,降低神经炎症反应发挥作用;音乐干预有可能影响肠绒毛的发育状态,从而改善了肠道环境。本研究结果可为音乐干预AD提供理论支持,具有潜在的临床价值。
高琳琳[4]（2021）在《六味地黄丸含药血清通过Caspase-1/GSDMD-N通路对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤的影响》文中指出目的:通过对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型的研究,以Caspase-1/GSDMD-N为切入点,探讨六味地黄丸含药血清对SH-SY5Y细胞焦亡的影响。材料与方法:1.将30只健康的SD大鼠,适应性喂养2～3天后,随机平均分为2组,即正常对照组和六味地黄丸组。每组各15只,分笼饲养。根据人与大鼠体表面积有效剂量换算,六味地黄丸组用含六味地黄丸生药量1.18 g/kg的六味地黄丸粉水溶液灌胃,正常对照组用同等体积量的双蒸水灌胃。1天2次,持续灌胃5天。最后一次灌胃2h后,2组同时经腹主动脉进行采血,分离出血清,作为正常鼠血清与含药鼠血清以备用。2.将SH-SY5Y细胞分为3组:正常对照组、模型组、六味地黄丸含药血清组。正常对照组与模型组给予含有10%正常鼠血清的DMEM高糖培养基培养,六味地黄丸含药血清组给予含有10%六味地黄丸含药鼠血清的DMEM高糖培养基培养,模型组及六味地黄丸含药血清组分别加入终浓度为20umol/L Aβ1-42寡聚体,继续培养48h。3.采用台盼蓝染色法（Trypan Blue）观察各组细胞形态并计算活细胞率;采用透射电镜（Transmission Electron Microscope,TEM）观察各组SH-SY5Y细胞的形态及结构变化;采用酶联免疫吸附法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA）检测细胞上清液中的白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素18（IL-18）的含量;采用蛋白质印迹法（Western Blot,WB）检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸酶-1（Caspase-1）和消皮素D-N端片段（Gasdermin-D-N,GSDMD-N）的蛋白表达。结果:1.台盼蓝染色法观察各组细胞形态并计算活细胞率:镜下观察,正常对照组细胞形态较好,结构清晰,胞体饱满,有突触,透光度好,成透明状;模型组细胞外形不规则,胞膜不完整,细胞碎裂,见大量碎片流出,细胞成圆形,无突触,死细胞较多,被染成蓝色;含药血清组细胞形态相对较好,结构比较清晰,胞体相对饱满,仅有少量碎片,有突触,少数被染成蓝色。与正常对照组相比,模型组细胞存活率显着降低（P<0.01）,与模型组相比,含药血清组细胞存活率显着增高（P<0.01）。2.透射电镜观察各组SH-SY5Y细胞的形态结构情况:正常对照组的细胞核膜光滑,形态完整、规则,结构清晰;与正常对照组相比,模型组的细胞出现核皱缩,线粒体肿胀,染色质边集现象;与模型组相比,含药血清组的细胞核膜光滑,线粒体肿胀减轻。3.酶联免疫吸附法检测各组细胞上清液中IL-1β和IL-18的含量比较结果:与正常对照组相比,模型组上清液IL-1β和IL-18的含量显着增多（P<0.01）;与模型组相比,含药血清组上清液IL-1β和IL-18的含量显着减少（P<0.01）。4.蛋白质印迹法检测各组细胞Caspase-1、GSDMD-N蛋白表达的结果:与正常对照组相比,模型组Caspase-1和GSDMD-N的蛋白表达显着增高（P<0.01）;与模型组相比,含药血清组Caspase-1和GSDMD-N的蛋白表达显着降低（P<0.01）。结论:1.六味地黄丸含药血清可以明显改善Aβ1-42诱导SH-SY5Y细胞的损伤状态,对损伤的SH-SY5Y细胞具有保护作用。2.六味地黄丸含药血清可以通过调节Caspase-1/GSDMD-N通路抑制细胞焦亡,进而抑制细胞免疫炎性反应,起到防治AD的作用。
曹海信,王小梅[5]（2021）在《有氧运动可保护β-淀粉样蛋白1-42诱导老年痴呆模型大鼠的大脑》文中认为背景:实验证明,有氧运动能够改善脑损伤后大脑供血状态,在临床中配合有氧运动治疗阿尔茨海默症收效甚益,但对其机制的研究仍处于空白阶段。目的:基于AMPK/eNOS/NF-κB信号通路探讨有氧运动对β-淀粉样蛋白1-42致痴呆大鼠大脑的保护作用机制。方法:将80只SPF级SD雄性大鼠随机分为4组（n=20）:假手术组、模型组、有氧运动组和抑制剂组,除假手术组外其余大鼠采用β-淀粉样蛋白1-42诱导构建阿尔茨海默病模型;假手术组切开硬脑膜后注射2μL生理盐水。造模结束后第3天,抑制剂组腹腔注射50 mg/L AMPK CompoundC2mL;其余组注射等量生理盐水。注射后有氧运动组和抑制剂组进行12周有氧运动训练,假手术组和模型组不进行任何治疗。运动结束后,通过水迷宫实验和跳台实验检测各组大鼠的空间学习记忆能力的变化;依次采用激光散斑成像、苏木精-伊红染色、ELISA法和免疫荧光法检测各组大鼠大脑皮质血流变化、脑梗死体积、脑组织内神经元的损伤、脑组织中白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α表达水平及核转录因子κB的核移位;Western blot检测p-AMPK、p-eNOS和核转录因子κB蛋白的表达水平。结果与结论:①与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长,经过原平台所在象限的次数明显更低,大鼠大脑皮质血流灌注量明显减少,脑组织内细胞凋亡率及白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α表达水平升高,脑组织细胞内核转录因子κB核移位荧光强度明显增强,且脑组织中p-AMPK、p-e NOS明显降低,核转录因子κB蛋白表达明显升高（均P <0.05）;与模型组相比,有氧运动组逃避潜伏期出现明显下降,经过原平台所在象限的次数明显增多,大鼠大脑皮质血流灌注量明显增加,脑组织内细胞凋亡率及白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α表达水平降低,脑组织细胞内核转录因子κB核移位荧光强度明显减弱,且脑组织中p-AMPK、p-eNOS明显升高,核转录因子κB蛋白表达明显下降（均P <0.05）;与有氧运动组相比,抑制剂组上述指标明显被逆转（P <0.05）;②结果说明,有氧运动可能通过激活AMPK/eNOS/NF-κB信号,抑制核转录因子κB的活化,从而减轻炎症反应,发挥对β-淀粉样蛋白1-42诱导的老年性痴呆大脑保护作用。
谢文佳,夏天娇,周卿云,刘羽佳,顾小萍[6]（2021）在《小胶质细胞介导神经元损伤在神经退行性疾病中的作用》文中研究表明背景:小胶质细胞是中枢神经系统驻留免疫细胞,具有感知、管家和防御功能。神经退行性疾病状态下,小胶质细胞功能紊乱导致或加重神经元损伤。目的:探讨神经退行性疾病中小胶质细胞介导的神经元损伤机制。方法:由第一作者以"microglia,neurodegenerative diseases,neuronal injury"为英文检索词,"小胶质细胞,神经退行性疾病,神经元损伤"为中文检索词,检索PubMed、中国知网、万方、维普等中英文数据库2001年1月至2020年1月发表的相关文献。结果与结论:神经退行性疾病中,小胶质细胞受到毒性物质干扰而感知过度导致激活增多,伴随管家功能亢进和强烈的神经炎症,造成神经元损伤;或因特定基因突变而出现感知和管家功能减弱,使毒性物质累积加重防御功能的失调,诱导神经元凋亡或坏死。探索神经退行性疾病中小胶质细胞介导的神经元损伤机制,可为神经退行性疾病的治疗提供多个靶点。
彭红梅[7]（2020）在《黄连解毒汤含药脑脊液对Aβ1-42致BV2细胞凋亡及炎症反应的机制研究》文中认为目的:探讨黄连解毒汤含药脑脊液对寡聚体Aβ1-42诱导的BV2细胞凋亡与炎症反应的影响及其作用机制。方法:利用寡聚体Aβ1-42诱导BV2细胞,复制细胞损伤模型。将处于对数期的BV2细胞随机分为空白对照组,Aβ模型组,石杉碱甲含药脑脊液组、黄连解毒汤含药脑脊液低、中、高剂量组,分别加入10%空白脑脊液,10%空白脑脊液,10%石杉碱甲含药脑脊液,5%、10%、20%黄连解毒汤含药脑脊液;除空白组外,其余各组加入终浓度为10μM寡聚体Aβ1-42,复制小胶质细胞凋亡模型。采用流式细胞术检测各组BV2细胞凋亡情况;Elisa法检测BV2细胞上清液中IL-10、IL-6、IFN‐γ表达水平;Western blot法检测BV2细胞Arg-1与i NOS蛋白表达水平。结果:1.与空白对照组比较,Aβ模型组BV2细胞凋亡率明显增加（*P<0.05）,细胞上清液中IL-10显着降低（*P<0.01）,IL-6、IFN‐γ水平明显升高（*P<0.05）。2.黄连解毒汤含药脑脊液能够降低寡聚体Aβ1-42诱导BV2细胞凋亡。3.黄连解毒汤含药脑脊液能够升高BV2细胞上清液中抗炎因子IL-10（*P<0.05）,降低促炎因子IL-6、IFN‐γ水平（*P<0.05）。4.黄连解毒汤含药脑脊液能够上调BV2细胞中Arg-1蛋白表达水平,下调i NOS于Cleaved Caspase-3蛋白表达水平（*P<0.05）。结论:1.寡聚体Aβ1-42能够诱导BV2细胞凋亡,抑制BV2细胞M2型激活,促进BV2细胞促炎M1型激活,释放IL-6、IFN‐γ等促炎因子。2.黄连解毒汤含药脑脊液能够改善寡聚体Aβ1-42诱导的小胶质细胞炎性因子释放,其作用机制可能与黄连解毒汤含药脑脊液能够保护小胶质细胞,减少小胶质细胞凋亡,从而减少IFN‐γ合成,促进抗炎因子IL-10释放,促进BV2细胞M2型激活,减少促炎M1型激活,降低IL-6表达水平有关。
田赛[8]（2020）在《肾素-血管紧张素系统参与2型糖尿病认知功能障碍的机制研究》文中研究说明第一部分外周血ACE水平、活性及I/D基因多态性与2型糖尿病轻度认知功能障碍的相关性研究背景:血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme,ACE）是肾素-血管紧张素系统（reninangiotensin system,RAS）的关键酶,与2型糖尿病（Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM）及阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）的发生发展均密切相关。T2DM可并发不同程度的认知功能障碍,包括轻度认知功能障碍（Mild Cognitive Impairment,MCI）和痴呆。MCI是一种介于正常衰老与痴呆之间的过渡阶段。目的:本研究旨在探讨外周血ACE水平、活性及ACE I/D基因多态性与2型糖尿病轻度认知障碍的相关性。方法:本研究共招募210例T2DM患者,根据蒙特利尔认知评估（Montreal cognitive assessment,Mo CA）得分,将T2DM患者分为MCI组116例,非MCI组94例。收集患者的社会人口学资料、临床资料;使用多维度神经学量表评估受试者认知功能;采用酶联免疫吸附法测定血清ACE含量,并使用紫外分光光度法测定血清ACE活性;使用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性法检测ACE I/D基因多态性。结果:1、MCI组与非MCI对照组相比,患者空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）、糖化血红蛋白（glycosylated hemoglobin,Hb A1c）、血清ACE水平及ACE活性明显升高（p<0.05）,空腹C肽（fasting C-peptide,FCP）水平明显降低（p<0.05）,Mo CA得分及各项认知功能得分明显降低（p<0.05）。2、在T2DM-MCI人群中,ACE活性分别与Mo CA、逻辑记忆功能测验（logical memory test,LMT）之间呈显着负相关（r=-0.242,p=0.009;r=-0.286,p=0.002）。3、在T2DM-MCI人群中,多元线性回归结果显示,在校正了年龄、教育水平、FBG、糖尿病病程、高血压病程、血脂水平等因素后,ACE活性是LMT得分的一个危险因素（β=-0.186,p=0.035）。4、MCI组与非MCI组之间的ACE I/D基因型、等位基因频率分布均无明显统计学差异。但在T2DM-MCI人群中,DD基因型对应的血清ACE水平、ACE活性均明显高于ID、II基因型（p<0.05）。结论:在T2DM人群中,MCI患者的血清ACE水平及活性均高于认知功能正常者,其中增加的血清ACE活性与T2DM患者认知功能障碍相关,尤其是记忆功能障碍。此外,需要进一步研究证实ACE的D等位基因可能是T2DM记忆功能障碍的一个候选基因。第二部分RAS在KK-Ay小鼠认知功能障碍中的作用背景:慢性高血糖是2型糖尿病（Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM）的主要临床表现之一,慢性高血糖可激活体内肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）,脑内RAS激活可进一步导致认知功能障碍的发生发展,但其具体的分子机制尚未明确。脑淀粉样蛋白假说是T2DM认知功能障碍的几大发病假说之一,β淀粉样蛋白（amyloid beta,Aβ）由β淀粉样前体蛋白（β-amyloid precursor protein,APP）经过β和γ分泌酶剪切生成。我们前期的研究结果发现,T2DM认知功能障碍的患者外周血血管紧张素转换酶（angiotensin converting enzyme,ACE）水平及活性均升高,其中血清ACE活性与T2DM患者认知功能障碍相关,尤其是记忆功能障碍。目的:在临床研究的基础上,我们进一步通过动物实验来研究RAS参与T2DM认知障碍的发病机制,观察T2DM认知功能障碍小鼠脑内RAS系统ACE-AngⅡ-AT1R轴蛋白水平,脑内APP、Aβ代谢水平;以及卡托普利、氯沙坦、PD123319对2型糖尿病认知功能障碍小鼠中的干预效应。方法:选取8周龄KK-Ay小鼠予以专用饲料喂养作为实验组,8周龄C57BL/6小鼠作为对照组,在8周龄、20周龄时处死两组小鼠。选取20周龄KK-Ay小鼠继续喂养,随机分组,每天分别予以卡托普利（5 mg/kg/d）、氯沙坦（10 mg/kg/d）、PD123319（10 mg/kg/d）灌胃8周,对照组给予等体积生理盐水灌胃20周龄KK-Ay小鼠8周,各组小鼠喂养至28周龄时处死。每周监测小鼠体重、空腹血糖。处死前眼球内眦静脉取血,检测空腹血胰岛素水平,计算出胰岛素抵抗指数（homeostatic model assessment of insulin resistance,HOMA-IR）水平;采用Morris水迷宫实验和明暗箱被动回避实验,检测小鼠的学习、记忆功能。处死后,取脑组织切片,进行HE染色和尼氏染色,观察小鼠脑组织中海马部位的神经元形态学和尼氏小体的改变;Western blot检测小鼠海马组织ACE、AT1R、AT2R、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）、p-JNK、p-APP Thr 668、APP蛋白的表达水平;同时检测小鼠海马组织匀浆ACE活性、AngⅡ、Aβ40、Aβ42水平;免疫荧光染色检测小鼠脑组织中海马部位的p-JNK、p-APP Thr 668蛋白的表达情况。结果:1、20周龄KK-Ay小鼠的空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR水平明显高于20周龄C57BL/6小鼠（P<0.05）,且20周龄KK-Ay小鼠空腹血糖均≥11.1mmol/L,符合T2DM诊断标准;分别予以卡托普利、氯沙坦、PD123319干预20周龄KK-Ay小鼠后,各组空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR水平与生理盐水对照组相比无明显统计学差异（P>0.05）。2、Morris水迷宫实验结果显示,20周龄KK-Ay小鼠与20周龄C57BL/6小鼠相比,其寻找平台潜伏期明显延长,穿梭目标平台的正确次数明显减少（P<0.05）;明暗箱避暗实验结果表明,避暗潜伏期（即错误进入暗区的潜伏期）明显缩短,错误次数明显增加（P<0.05）。与生理盐水对照组相比,卡托普利组、氯沙坦组小鼠的水迷宫寻找平台潜伏期明显缩短,穿梭目标平台的正确次数明显增加（P<0.05）;明暗箱避暗潜伏期明显延长,错误次数明显减少（P<0.05）。而PD123319干预组与生理盐水对照组相比,上述指标无明显统计学差异（P>0.05）。3、HE染色和尼氏染色结果显示,20周龄KK-Ay小鼠与20周龄C57BL/6小鼠相比,大脑海马部位的神经细胞出现排列松散、结构破坏的现象,尼氏小体数量减少,尤以CA1最为明显。与生理盐水对照组相比,卡托普利组、氯沙坦组小鼠的大脑海马CA1细胞排列松散、结构破坏的现象均有所改善,且尼氏小体数目增加。而PD123319干预组与生理盐水对照组相比,上述现象无明显改变。4、免疫荧光染色结果显示,20周龄KK-Ay小鼠与20周龄C57BL/6相比,海马CA1区p-JNK与p-APP Thr 668表达较强;卡托普利、氯沙坦分别干预KK-Ay小鼠后,p-JNK与p-APP Thr 668表达减弱。而PD123319干预组与生理盐水对照组相比,上述观察指标无明显改变。5、20周龄KK-Ay小鼠与20周龄C57BL/6相比,海马组织ACE活性、AngⅡ、ACE、AT1R蛋白水平明显升高（P<0.05）,AT2R蛋白水平无明显改变,p-JNK水平明显升高（P<0.05）、总JNK蛋白水平无明显变化,p-APP Thr 668水平明显升高（P<0.05）、总APP蛋白水平无明显变化,Aβ40、Aβ42水平明显升高（P<0.05）。与生理盐水对照组相比,卡托普利组小鼠的海马组织ACE活性、AngⅡ、ACE蛋白水平下降,伴随p-JNK、p-APP Thr 668、Aβ40、Aβ42水平降低（P<0.05）;氯沙坦干预组小鼠的海马组织AT1R蛋白水平下降,伴随p-JNK、p-APP Thr 668、Aβ40、Aβ42水平降低（P<0.05）;PD123319组小鼠的海马组织AT2R蛋白水平下降（P<0.05）,而p-JNK、p-APP Thr 668、Aβ40、Aβ42水平无明显改变（P>0.05）。结论:2型糖尿病小鼠的学习、记忆功能下降可能与慢性高血糖引起的脑内ACE-AngⅡ-AT1R轴激活,p-JNK、p-APP Thr 668蛋白水平升高,Aβ40和Aβ42生成增多有关;分别予以卡托普利或氯沙坦干预T2DM认知功能障碍小鼠后,脑内ACE-AngⅡ-AT1R轴蛋白水平受到抑制,脑内p-JNK、p-APP Thr 668蛋白水平降低,以及Aβ40和Aβ42的生成减少,从而改善了T2DM认知功能障碍小鼠的学习、记忆功能。第三部分RAS在高糖诱导HT22细胞损伤中的机制研究背景:脑淀粉样蛋白假说是2型糖尿病（Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM）认知功能障碍的几大发病假说之一。脑内肾素-血管紧张素系统（renin-angiotensin system,RAS）激活后可参与β淀粉样蛋白（amyloid beta,Aβ）代谢。Aβ由β淀粉样前体蛋白（β-amyloid precursor protein,APP）经过β和γ分泌酶剪切生成。γ分泌酶剪切由β分泌酶剪切APP后形成的羧基末端片段时,需要c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）对APP苏氨酸668（Thr 668）位点进行活化。我们前期动物实验结果发现,T2DM认知障碍小鼠脑内ACE-AngⅡ-AT1R轴激活,伴随着脑内p-JNK、p-APP Thr 668水平升高,Aβ40和Aβ42生成增多;分别予以卡托普利、氯沙坦干预后,脑内p-JNK、p-APP Thr 668水平降低,Aβ40和Aβ42生成减少,小鼠学习记忆功能损伤有所缓解。但在细胞水平,RAS在高糖诱导小鼠海马神经元细胞（HT22细胞系）损伤中的分子机制尚未明确。目的:探讨RAS在高糖诱导HT22细胞损伤中的分子机制。方法:选用HT22细胞作为细胞模型,予以高糖干预作为高糖毒性模型,采用CCK8试剂盒,检测不同葡萄糖浓度和不同孵育时间对HT22细胞活力的影响。在高糖诱导HT22细胞稳定生长一定时间后,分别予以卡托普利（1μmol/L）、氯沙坦（1μmol/L）、PD123319（1μmol/L）、SP600125（5μmol/L）干预。实时荧光定量PCR检测细胞ACE、AT1R、AT2R的m RNA表达水平;Western blot检测细胞ACE、AT1R、AT2R、p-JNK、JNK、p-APP Thr 668、APP蛋白表达水平;ELISA检测细胞AngⅡ、Aβ40、Aβ42水平。结果:1、高糖干预HT22细胞呈浓度和时间依赖性影响细胞活力,本研究中选取75m M的葡萄糖干预HT22细胞48h作为高糖毒性模型。2、与对照组（25m M葡萄糖）相比,高糖（75m M葡萄糖）干预HT22细胞可使细胞ACE、AT1R的m RNA和蛋白表达水平升高,细胞上清中AngⅡ水平升高,细胞p-JNK、p-APP Thr 668蛋白水平升高,Aβ40和Aβ42水平升高（P<0.05）。3、与对照组（75m M葡萄糖）相比,卡托普利干预高糖处理的HT22细胞后,细胞上清中AngⅡ水平下降,细胞ACE m RNA和蛋白表达水平降低,伴随p-JNK、p-APP Thr 668、Aβ40、Aβ42水平降低（P<0.05）;氯沙坦干预高糖处理的HT22细胞后,细胞AT1R m RNA和蛋白表达水平降低,伴随p-JNK、p-APP Thr 668、Aβ40、Aβ42水平降低（P<0.05）;PD123319干预高糖处理的HT22细胞后,细胞AT2R m RNA和蛋白表达水平降低（P<0.05）,而p-JNK、p-APP Thr 668、Aβ40、Aβ42水平无明显改变（P>0.05）。4、与对照组（75 m M葡萄糖+DMSO）相比,SP600125干预高糖处理的HT22细胞后,p-JNK蛋白水平降低,伴随p-APP Thr 668、Aβ40、Aβ42水平降低（P<0.05）,而ACE、AT1R、AT2R的m RNA和蛋白表达水平无明显改变（P>0.05）。结论:高糖毒性可引起神经元细胞ACE-AngⅡ-AT1R轴表达上调,p-JNK、p-APP Thr 668蛋白水平升高,Aβ40、Aβ42生成增多,从而导致认知功能损伤;分别予以卡托普利、氯沙坦干预高糖诱导的HT22细胞后,ACE-AngⅡ-AT1R轴受抑制后可通过下调p-JNK水平,降低p-APP Thr 668蛋白水平,减少Aβ40和Aβ42生成,从而发挥神经保护作用。
关勇[9]（2020）在《补肾健脑汤对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护机制研究》文中研究表明目的:本研究以MAPKs信号转导通路为主要线索,通过制备大鼠含药血清、培养大鼠肾上腺髓质嗜络细胞瘤细胞（PC12细胞）,观察并验证补肾健脑汤对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有保护作用,以MAPKs信号转导通路和炎症反应为切入点,从分子生物角度揭示补肾健脑汤对神经细胞损伤的预防保护作用机制,为补肾健脑汤能够缓解阿尔茨海默病的病程提供有效的科学依据,为临床药物的开发奠定基础。材料与方法:第一部分,制备大鼠含药血清:将健康SD大鼠随机分为8组:空白组,模型组、高剂量组,中剂量组,低剂量组,中药高剂量+p38抑制剂组,中药高剂量+ERK抑制剂组,中药高剂量+JNK抑制剂组,每组5只大鼠。8组大鼠同时在相同环境下饲养,定时早晚喂食,饮水不限,于饲养第二天上午开始灌胃给药。按照成人临床每日剂量乘以大鼠用药系数0.018,计算得中药高剂量组（包含抑制剂组）给药浓度为14.4g（Kg/天）:中剂量组给药浓度7.2g（Kg/天）:低剂量组给药浓度为3.6g（Kg/天）,连续5天给药。空白组及模型组不予特殊处理,常规喂养5天。中药各剂量组除含药浓度不同,其余均相同。于末次给药1h后,进行腹腔麻醉,在腹主动脉抽血,3000转离心10min分离得到血清,56℃灭活30min,无菌过滤,即为含药血清。放入4℃冰箱中保存待用。第二部分,细胞实验:用37℃水浴中迅速融化冻存的PC12细胞,离心,弃去废液,放入含10%FBS的DMEM培养基重悬,在培养瓶中接种,放置于5%CO2、37℃培养箱中培养24h,23d换液一次。细胞完全融合后,弃去废液,在倒置显微镜下观察并计数,按照105cells/ml的密度在新的培养瓶接种,最后放入CO2恒温培养箱中培养。根据实验要求,将PC12细胞分为以下五组（1）空白组:（用事先准备好的空白组大鼠血清培养24h）,（2）模型组:（同时加入模型组大鼠血清和终浓度为20μmol/L的Aβ25-35共培养24h）（3）中药低剂量组:（分别用终浓度为20μmol/L的Aβ25-35和含有低剂量的补肾健脑汤的含药血清培养24h）（4）中药中剂量组:（分别用终浓度为20μmol/L的Aβ25-35和含有中剂量的补肾健脑汤的含药血清培养24h）（5）中药高剂量组:（分别用终浓度为20μmol/L的Aβ25-35和含有高剂量的补肾健脑汤的含药血清培养24h）以上中药高、中、低剂量组（分别用终浓度为20μmol/L的Aβ25-35和含有浓度为高,中、低的补肾健脑汤的含药血清培养24h）。所有细胞均培养在37℃、5%二氧化碳的培养箱中。用ELISA法测定白细胞介素-8（IL-8）含量、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）含量和核因子-КB（NF-КB）。用PCR检测细胞中AKT、Nrf2的m RNA水平。结果:⒈补肾健脑汤含药血清能够保护Aβ25-35诱导损伤的PC12细胞2.补肾健脑汤对PC12细胞AKt/Nrf2mRNA表达量的影响高剂量组AKtm RNA表达量最高,模型组中AKtm RNA表达量最低,相对于空白对照组,AKtm RNA的表达量明显降低;高、高剂量+抑制剂组比模型组的细胞中AKtm RNA表达量高,AKtm RNA表达量在高剂量组细胞中比中剂量组和低剂量组高;高、高剂量+抑制剂组细胞中AKtm RNA表达量与中剂量组比较明显升高模型组中Nrf2m RNA表达量最低,高剂量组+抑制剂组细胞Nrf2m RNA表达量最高。与空白对照组比较,模型组Nrf2m RNA表达量显着降低。高、中、低、高剂量+抑制剂组比模型组细胞中Nrf2m RNA表达量显着升高。同低剂量组比较,中、高剂量、高剂量+抑制剂组中Nrf2m RNA表达量显着升高。与中剂量比较,高剂量、高剂量+抑制剂组中Nrf2m RNA表达量显着升高。高剂量+抑制剂组细胞中Nrf2m RNA表达量显着高于高剂量组。3.补肾健脑汤含药血清对Aβ25-35诱导的PC12细胞白细胞介素-6（IL-6）含量的影响五个模型中,高剂量+抑制剂组白介素6表达量最低,模型组白介素6表达量最高。与空白对照组比较,五个模型组白介素6的表达量明显升高。高、中、低、高+抑制剂组细胞中白介素6比模型组表达量低;高剂量+抑制剂组与低、中剂量组相比较,细胞中白介素6表达量显着减少。4.补肾健脑汤含药血清对Aβ25-35诱导的PC12细胞白细胞介素-8（IL-8）含量的影响五个模型中,高剂量+抑制剂组白介素8表达量最低,模型组白介素8表达量最高。低、中、高剂量组白介素8表达量同空白对照组比较,明显上升;低、中、高剂量、高剂量+抑制剂组细胞中白介素8表达量与模型组比较,明显下降;低、中、高剂量组与高剂量+抑制剂组相比较,细胞中白介素8表达量显着降低。5.补肾健脑汤含药血清对Aβ25-35诱导的PC12细胞白细胞介素1β（IL-1β）含量影响五个模型中,高剂量+抑制剂组白介素1β表达量最低,模型组白介素1β表达量最高。低、中、高剂量、高剂量+抑制剂组与空白对照组比较,白介素1β表达量明显上升,但是与模型组比较,各组细胞中白介素1β表达量显着下降;高剂量+抑制剂组与低、中、高剂量组相比较,细胞中白介素1β表达量明显减少。6.补肾健脑汤含药血清对Aβ25-35诱导的PC12细胞核因子-КB（NF-КB）含量的影响五个模型中,高剂量+抑制剂组NF-KB-1表达量最低,模型组白介素NF-KB-1表达量最高。与空白对照组比较,低、中、高剂量、高+抑制剂组NF-KB-1表达量明显上升。低、中、高剂量、高+抑制剂组细胞中NF-KB-1比模型组的表达量低。结论:⒈补肾健脑汤含药血清能够保护Aβ25-35诱导损伤的PC12细胞。2.补肾健脑汤激活AKt/Nrf2信号通路,AKt/Nrf2m RNA表达量升高,可以抑制促炎细胞因子的表达,从而起到抗炎抗神经细胞凋亡作用。3.补肾健脑汤含药血清对Aβ25-35诱导损伤的PC12细胞起到保护作用,其作用机制可能是通过降低PC12细胞白细胞介素-8（IL-8）含量、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）含量,降低Aβ的毒性作用,减少对炎症因子对神经造成的损伤。4.补肾健脑汤含药血清能抑制核因子-КB（NF-КB）表达,提示补肾健脑汤对Aβ25-35诱导的PC12细胞的保护作用可能存在NF-КB信号通路的参与。
王枫[10]（2020）在《IGF-1对肥胖相关认知障碍的保护作用及机制研究》文中指出研究目的:近四十年,肥胖逐渐成为了危害我国公众健康的重大公共卫生问题。众所周知,肥胖是多种慢性老年性疾病的危险因素,这其中包括痴呆与认知障碍。进一步的机制研究揭示,肥胖可以促进人和实验动物脑组织中的神经炎症、氧化应激、细胞凋亡、线粒体功能失调等病理生理过程,进而扰乱神经元功能,威胁其生存,最终降低认知水平。针对这些机制,研究人员尝试运用天然植物、化学试剂或者体育锻炼等方式治疗肥胖相关认知障碍,并取得了一定疗效。但从总体上说,人们对于这种疾病的发病机制与治疗方法还缺乏了解,相关研究有待深入。胰岛素样生长因子1（IGF-1）是广泛分布在人体各组织器官的多肽类物质,结构与胰岛素相似,具有促进生长、调控血糖等多种生物学作用。既往的流行病学研究和动物实验发现,外周循环IGF-1浓度与多种认知功能相关疾病存在关联。进一步的研究还发现,外源性IGF-1干预和内源性IGF-1表达增加对认知功能具有保护作用。但是,这种因子在肥胖相关认知障碍中的作用国内外鲜有报道。本研究拟通过病例对照研究探讨血浆IGF-1浓度与肥胖相关认知障碍的关系,再通过动物实验验证外源性IGF-1对高脂饮食（肥胖）小鼠模型认知功能的神经保护作用及分子机制。方法:第一部分为针对老年住院患者的病例对照研究。首先,我们收集120例轻度认知功能障碍（MCI）患者和120例认知功能正常受试者,分别作为病例组和对照组。采集这些受试者入组时的临床数据作为研究资料。应用多因素logistic回归评价肥胖（或超重）是否与MCI的发生有关。然后,我们采集上述两组的部分受试者的空腹静脉血,用ELISA法测定IGF-1浓度,应用多因素logistic回归评价血浆IGF-1浓度与MCI发生的关系,应用Pearson线性回归评价血浆IGF-1浓度与MCI严重程度的相关性。第二部分为动物实验,给予实验小鼠长期而规律的高脂饮食以诱导小鼠的肥胖与代谢紊乱,部分小鼠再接受外源性IGF-1干预。应用水迷宫实验和旷场实验分别评价外源性IGF-1对实验小鼠高脂饮食所致认知障碍和焦虑行为的保护作用。通过测定实验小鼠海马组织中超氧化物歧化酶、活性氧以及丙二醛的活性,评价外源性IGF-1对高脂饮食所致氧化应激反应的抑制作用。通过测定海马组织中肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β、白细胞介素-4和白细胞介素-10的浓度,评价外源性IGF-1对高脂饮食所致神经炎症的抑制作用。通过测定海马组织中线粒体呼吸控制率、三磷酸腺苷和线粒体膜电位水平,评价外源性IGF-1对高脂饮食所致线粒体功能障碍的保护作用。通过测定海马组织中线粒体动力学调节蛋白Drp1、Mfn1和Mfn2的表达水平,评价外源性IGF-1对高脂饮食所致线粒体动力学障碍的保护作用。第三部分为动物实验,给予实验小鼠长期而规律的高脂饮食以诱导小鼠的肥胖与代谢紊乱,部分小鼠再接受外源性IGF-1、PI3K抑制剂LY294002和CREB抑制剂666-15干预。应用水迷宫实验和旷场实验评价p-PI3K和p-CREB是否介导了外源性IGF-1对实验小鼠认知障碍和焦虑行为的保护作用。应用蛋白印迹法测定实验小鼠海马组织中p-PI3K、p-Akt和p-CREB蛋白的表达,以确定PI3K/Akt/CREB信号通路的存在。再测定上述氧化应激、神经炎症、线粒体功能与动力学指标,评价外源性IGF-1是否通过激活PI3K/Akt/CREB信号通路发挥改善这些病理生理异常的保护作用。结果:第一部分结果显示:（1）受试者肥胖（或超重）与MCI的发生有关;（2）在肥胖（或超重）患者中,血浆IGF-1浓度呈显着下降趋势;（3）血浆IGF-1浓度偏低与MCI的发生有关,且不受肥胖因素的影响;（4）血浆IGF-1浓度偏低与MCI的严重程度有关。第二部分结果显示:（1）长期且规律的高脂饮食可以造成小鼠明显的认知障碍以及焦虑行为的增加,同时还可以造成小鼠海马组织中线粒体功能障碍、线粒体动力学异常以及过度的氧化应激和神经炎症反应;（2）给予实验小鼠外源性IGF-1干预可以改善认知功能和焦虑行为,改善海马组织线粒体功能和动力学异常,抑制氧化应激和神经炎症反应;（3）外源性IGF-1的神经保护作用具有剂量效应关系。第三部分结果显示:（1）PI3K/Akt/CERB信号通路在小鼠海马组织中确实存在;（2）长期规律的高脂饮食可以明显抑制PI3K/Akt/CERB信号通路的活性,而外源性IGF-1干预可以重新激活这一通路;（3）外源性IGF-1对高脂饮食所致的认知障碍、焦虑行为、线粒体功能与动力学异常、氧化应激和神经炎症反应的保护作用与PI3K/Akt/CERB信号通路的激活有关。结论在病例对照研究中,血浆IGF-1浓度偏低与肥胖相关认知障碍的发生及严重程度有关。在动物实验中,外源性IGF-1可以激活海马组织中的PI3K/Akt/CREB信号通路,进而改善线粒体功能和动力学,抑制神经炎症和氧化应激反应,最终改善认知功能和焦虑行为。
二、白细胞介素-1对β淀粉样蛋白胞毒及基因表达的调节作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、白细胞介素-1对β淀粉样蛋白胞毒及基因表达的调节作用（论文提纲范文）
（1）基于小胶质细胞极化、树突棘稳定探讨加减薯蓣丸改善APP/PS1小鼠学习记忆能力的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 理论探讨 |
| 1 中医对AD的认识 |
| 2 脾肾亏虚,痰瘀互结是AD的基本病机 |
| 3 从补肾健脾,化痰祛瘀论治AD |
| 4 加减薯蓣丸组方分析及现代药理学研究 |
| 实验一 观察加减薯蓣丸对APP/PS1 小鼠学习记忆能力及抑郁行为的影响 |
| 1 实验材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验二 观察加减薯蓣丸对APP/PS1 小鼠海马神经元病理变化及Aβ_(1-42)沉积的影响 |
| 1 实验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验三 观察加减薯蓣丸对APP/PS1 小鼠海马小胶质细胞表型转化的影响 |
| 1 实验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验四 观察加减薯蓣丸对APP/PS1小鼠海马Nlrp3/ASC/Caspase-1炎症小体激活的影响 |
| 1 实验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验五 观察加减薯蓣丸对APP/PS1 小鼠树突棘密度和突触蛋白的影响 |
| 1 实验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验六 观察加减薯蓣丸对APP/PS1 小鼠海马BDNF/Rac1/Cofilin通路的影响 |
| 1 实验材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 一 结论 |
| 二 本研究的创新点 |
| 三 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 综述 中医药治疗阿尔茨海默病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录二 博士期间发表的论文情况 |
| 致谢 |
（2）轻度认知障碍神经炎症机制的作用靶点（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 1.4 质量评估及数据的提取 |
| 2 结果Results |
| 2.1 MCI病理改变 |
| 2.2 神经炎症在MCI中的作用 |
| 2.3 炎性细胞 |
| 2.3.1 小胶质细胞 |
| 2.3.2 星形胶质细胞 |
| 2.4 神经炎症因子 |
| 2.4.1 肿瘤坏死因子α |
| 2.4.2 NLRP3炎性小体 |
| 2.4.3 核因子κB |
| 2.4.4 CD40 |
| 3 小结与展望Conclusions and prospects |
（3）音乐干预对APP/PS1小鼠空间认知能力的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 AD的概述 |
| 1.2 AD的病理学变化 |
| 1.2.1 淀粉样蛋白级联假说 |
| 1.2.2 Tau蛋白级联假说 |
| 1.2.3 胆碱能神经元假说 |
| 1.3 AD与神经炎症 |
| 1.3.1 AD与小胶质细胞 |
| 1.3.2 AD与白细胞介素 |
| 1.3.3 AD与肿瘤坏死因子-α |
| 1.4 AD与肠道健康 |
| 1.5 基于AD的音乐干预研究 |
| 1.6 本文的主要工作 |
| 1.7 本文的结构安排 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验动物与分组 |
| 2.2 音乐材料及音乐干预 |
| 2.3 实验试剂 |
| 2.4 实验仪器 |
| 2.5 实验流程与实验方法 |
| 2.5.1 实验流程 |
| 2.5.2 水迷宫实验 |
| 2.5.3 免疫荧光技术 |
| 2.5.4 酶联免疫吸附法 |
| 2.5.5 肠道切片染色 |
| 2.6 统计分析 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 音乐干预对AD小鼠的空间认知能力的影响 |
| 3.2 音乐干预对AD小鼠神经病理进程的影响 |
| 3.2.1 音乐干预降低Aβ的积累 |
| 3.2.2 音乐干预降低血清中Tau的积累 |
| 3.2.3 音乐干预降低海马神经元丢失 |
| 3.3 音乐干预对AD小鼠炎症反应的影响 |
| 3.3.1 音乐干预降低血清中炎性因子含量 |
| 3.3.2 音乐干预减少海马中小胶质细胞丢失 |
| 3.3.3 音乐干预对小胶质细胞形态的影响 |
| 3.4 音乐干预对AD小鼠肠道形态结构的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 音乐干预与AD的认知改变 |
| 4.2 音乐干预改善AD的神经病理变化 |
| 4.3 音乐干预影响AD的神经炎症改变 |
| 4.4 音乐干预对肠道结构发育的影响 |
| 第五章 全文总结与展望 |
| 5.1 全文总结 |
| 5.2 后续工作展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的成果 |
| 附录 中英文缩略词 |
（4）六味地黄丸含药血清通过Caspase-1/GSDMD-N通路对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 阿尔茨海默病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（5）有氧运动可保护β-淀粉样蛋白1-42诱导老年痴呆模型大鼠的大脑（论文提纲范文）
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 材料和方法Materials and methods |
| 1.1 设计 |
| 1.2 时间及地点 |
| 1.3 材料 |
| 1.3.1 实验动物 |
| 1.3.2 主要药品、试剂 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 模型构建及分组 |
| 1.4.2 水迷宫实验 |
| 1.4.3激光散斑成像观察各组大鼠大脑皮质血流变化 |
| 1.4.4 苏木精-伊红染色观察大鼠海马组织神经元的形态变化 |
| 1.4.5 TUNEL染色检测各组大鼠脑组织中的细胞凋亡 |
| 1.4.6 ELISA法检测各组大鼠脑组织中白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的水平 |
| 1.4.7 免疫荧光检测各组大鼠脑组织中NF-κB的核移位 |
| 1.4.8 Western blot检测各组大鼠脑组织中p-AMPK、p-e NOS和NF-κB的表达 |
| 1.5主要观察指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果Results |
| 2.1 实验动物数量分析实验选用大鼠80只，分为4组，实验过程无脱失，全部进入结果分析。 |
| 2.2 定位航行实验结果 |
| 2.3 空间探索实验 |
| 2.4 激光散斑成像检测各组大鼠大脑皮质血流变化 |
| 2.5 各组大鼠脑海马区形态学的比较 |
| 2.6 TUNEL染色检测各组大鼠脑组织中的细胞凋亡 |
| 2.7 ELISA法检测各组大鼠脑组织中白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的水平 |
| 2.8 免疫荧光检测各组大鼠脑组织中NF-κB的核移位 |
| 2.9 Western blot检测各组大鼠脑组织中p-AMPK、p-e NOS和NF-κB的表达 |
| 3 讨论Discussion |
（6）小胶质细胞介导神经元损伤在神经退行性疾病中的作用（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 入选标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 1.4 数据的提取 |
| 2 结果Results |
| 2.1 小胶质细胞感知失调与神经退行性疾病 |
| 2.2 小胶质细胞管家功能异常与神经退行性疾病 |
| 2.2.1 小胶质细胞趋化因子和趋化因子受体作用失调 |
| 2.2.2 小胶质细胞吞噬作用紊乱 |
| 2.2.3小胶质细胞与星形胶质细胞相互作用 |
| 2.3 小胶质细胞防御功能紊乱与神经退行性疾病 |
| 2.3.1 小胶质细胞相关细胞因子介导的宿主防御紊乱 |
| 2.3.2 小胶质细胞释放蛋白酶损伤神经元 |
| 2.3.3 小胶质细胞释放超氧化物损伤神经元 |
| 2.3.4 疾病相关小胶质细胞限制神经退行性变 |
| 2.3.5 小胶质细胞其他宿主防御失调致神经退行性变的机制 |
| 3 总结与展望Summary and prospects |
| 3.1 既往他人在该领域研究的贡献和存在的问题 |
| 3.2 作者综述区别于他人他篇的特点 |
| 3.3 综述的局限性 |
| 3.4 综述的重要意义 |
（7）黄连解毒汤含药脑脊液对Aβ1-42致BV2细胞凋亡及炎症反应的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 阿尔茨海默病概述 |
| 1.1 阿尔茨海默病发病机制假说 |
| 1.2 Aβ沉积与阿尔茨海默病 |
| 1.3 小胶质细胞与阿尔茨海默病 |
| 1.3.1 小胶质细胞对脑稳态的保护作用 |
| 1.3.2 小胶质细胞通过表面受体响应吞噬功能 |
| 1.3.3 小胶质细胞过度激活与凋亡促进神经炎症 |
| 2 中医对阿尔茨海默病的认识 |
| 3 阿尔茨海默病治疗现状 |
| 3.1 胆碱酯酶抑制剂 |
| 3.2 抑制Aβ蛋白沉积药物 |
| 3.3 N-甲基-D-天门冬氨酸受体拮抗剂 |
| 3.4 钙离子拮抗剂 |
| 3.5 抗氧化药物 |
| 3.6 非甾体抗炎药物 |
| 3.7 靶向小胶质细胞治疗 |
| 4 黄连解毒汤治疗阿尔茨海默病的研究基础 |
| 实验研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物与细胞 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验仪器及耗材 |
| 1.5 实验试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 寡聚体Aβ_(1-42)淀粉样蛋白孵育 |
| 2.2 黄连解毒汤含药脑脊液脑脊液制备 |
| 2.2.1 动物分组与给药 |
| 2.2.2 制备含药脑脊液 |
| 2.3 小胶质细胞培养 |
| 2.3.1 细胞换液 |
| 2.3.2 细胞传代 |
| 2.3.3 细胞冻存 |
| 2.3.4 细胞复苏 |
| 2.4 实验检测 |
| 2.4.1 MTT法测定不同浓度寡聚体Aβ_(1-42)致BV2 细胞损伤的影响 |
| 2.4.2 Annexin V-FITC/PI双染法检测小胶质细胞凋亡 |
| 2.4.2.1 寡聚体Aβ_(1-42)诱导小胶质细胞凋亡浓度确定 |
| 2.4.2.2 流式细胞术检测黄连解毒汤对寡聚体Aβ_(1-42)致小胶质细胞凋亡率影响 |
| 2.4.3 Western Blot检测黄连解毒汤对寡聚体Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞Cleave Caspase-3、Arg-1与i NOS蛋白表达水平影响 |
| 2.4.3.1 小胶质细胞蛋白提取 |
| 2.4.3.2 BCA蛋白定量检测与蛋白变性 |
| 2.4.3.3 Western blot免疫印迹法检BV2 细胞Cleave Caspase-3、Arg-1与i NOS蛋白的表达 |
| 2.4.4 黄连解毒汤含药脑脊液对寡聚体Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞炎性因子IFN-γ、IL-6、IL-10 表达的影响 |
| 3 统计学分析方法 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 不同浓度寡聚体Aβ_(1-42)作用于BV2细胞毒性作用观察 |
| 4.2 黄连解毒汤含药脑脊液对Aβ_(1-42)致BV2细胞凋亡的影响 |
| 4.2.1 寡聚体Aβ_(1-42)诱导小胶质细胞凋亡浓度确定 |
| 4.2.2 黄连解毒汤对寡聚体Aβ_(1-42)致小胶质细胞凋亡影响 |
| 4.3 黄连解毒汤对寡聚体Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞Cleaved Caspase-3、Arg-1与i NOS蛋白表达水平影响 |
| 4.4 黄连解毒汤含药脑脊液对寡聚体Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞炎性因子IFN-γ、IL-6、IL-10表达的影响 |
| 讨论 |
| 1 AΒ沉积与细胞凋亡 |
| 1.1 细胞凋亡与AD |
| 1.2 Aβ诱导细胞凋亡 |
| 2 神经炎症是阿尔茨海默病的重要发病机制 |
| 3 小胶质细胞凋亡加重AΒ沉积与神经炎症 |
| 4 黄连解毒汤可以通过抑制小胶质细胞凋亡调控小胶质细胞极化改善神经炎症 |
| 5 “毒损脑络”理论与黄连解毒汤在AD中的运用 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 从“毒损脑络”探讨小胶质细胞在阿尔茨海默病发病中的作用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专着、及科研成果 |
（8）肾素-血管紧张素系统参与2型糖尿病认知功能障碍的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述一 糖尿病认知功能障碍发病机制的研究进展 |
| 一、危险因素 |
| 二、发病机制 |
| 三、结语 |
| 文献综述二 肾素血管紧张素系统在中枢神经系统疾病中的研究进展 |
| 一、脑组织中RAS组成成分的分布及作用 |
| 二、RAS在中枢神经系统疾病中的作用机制 |
| 三、结语 |
| 第一部分 外周血ACE水平、活性及I/D基因多态性与2型糖尿病轻度认知功能障碍的相关性研究 |
| 一、前言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 第二部分 RAS在KK-AY小鼠认知功能障碍中的作用 |
| 一、前言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 第三部分 RAS在高糖诱导HT22细胞损伤中的机制研究 |
| 一、前言 |
| 二、材料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（9）补肾健脑汤对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 阿尔茨海默病的发病机制与治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（10）IGF-1对肥胖相关认知障碍的保护作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、血浆IGF-1浓度与肥胖相关认知障碍的关系 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 受试者选择 |
| 1.1.2 数据收集 |
| 1.1.3 静脉血标本采集 |
| 1.1.4 MCI的诊断 |
| 1.1.5 超重和肥胖的诊断 |
| 1.1.6 血浆IGF-1浓度的检测 |
| 1.1.7 慢性疾病史的确定 |
| 1.1.8 统计方法的使用 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 病例组和对照组受试者的特征比较 |
| 1.2.2 病例组和对照组受试者认知功能的比较 |
| 1.2.3 病例组和对照组受试者BMI的比较 |
| 1.2.4 MCI发生与BMI的相关性 |
| 1.2.5 采集血样和未采集血样受试者的资料比较 |
| 1.2.6 病例组和对照组血浆IGF-1的浓度 |
| 1.2.7 MCI发生与血浆IGF-1 浓度的相关性 |
| 1.2.8 认知功能水平与血浆IGF-1浓度的相关性 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、外源性IGF-1对高脂饮食相关认知障碍的保护作用 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 伦理学要求 |
| 2.1.2 饲养与分组 |
| 2.1.3 造模与干预 |
| 2.1.4 认知功能的评估 |
| 2.1.5 焦虑与紧张行为的评估 |
| 2.1.6 组织标本的获取 |
| 2.1.7 脑脊液中PEG-IGF-1 浓度的测定 |
| 2.1.8 氧化应激指标的测定 |
| 2.1.9 炎症指标的测定 |
| 2.1.10 线粒体功能指标的测定 |
| 2.1.11 线粒体动力学的测定 |
| 2.1.12 统计方法的使用 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 实验小鼠代谢状况评价 |
| 2.2.2 实验小鼠的认知功能 |
| 2.2.3 实验小鼠的焦虑与紧张行为 |
| 2.2.4 验证外源性IGF-1通过血脑屏障到达脑组织的可能性 |
| 2.2.5 实验小鼠海马组织的线粒体功能 |
| 2.2.6 实验小鼠海马组织的线粒体动力学 |
| 2.2.7 实验小鼠海马组织的氧化应激水平 |
| 2.2.8 实验小鼠海马组织的神经炎症水平 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、外源性IGF-1对高脂饮食相关认知障碍保护作用的分子机制 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 伦理学要求 |
| 3.1.2 饲养与分组 |
| 3.1.3 造模与干预 |
| 3.1.4 认知功能的评估 |
| 3.1.5 焦虑与紧张行为的评估 |
| 3.1.6 组织标本的获取 |
| 3.1.7 脑脊液中PEG-IGF-1 浓度的测定 |
| 3.1.8 氧化应激指标的测定 |
| 3.1.9 炎症指标的测定 |
| 3.1.10 线粒体功能指标的测定 |
| 3.1.11 线粒体动力学的测定 |
| 3.1.12 信号通路蛋白的测定 |
| 3.1.13 统计方法的使用 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 实验小鼠代谢状况评价 |
| 3.2.2 实验小鼠的认知功能 |
| 3.2.3 实验小鼠的焦虑与紧张行为 |
| 3.2.4 验证外源性IGF-1通过血脑屏障到达脑组织的可能性 |
| 3.2.5 实验小鼠海马组织中PI3K/Akt/CREB信号通路的存在 |
| 3.2.6 实验小鼠海马组织的线粒体功能 |
| 3.2.7 实验小鼠海马组织的线粒体动力学 |
| 3.2.8 实验小鼠海马组织的氧化应激水平 |
| 3.2.9 实验小鼠海马组织的神经炎症水平 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 胰岛素样生长因子1对认知功能保护作用的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、白细胞介素-1对β淀粉样蛋白胞毒及基因表达的调节作用（论文参考文献）
- [1]基于小胶质细胞极化、树突棘稳定探讨加减薯蓣丸改善APP/PS1小鼠学习记忆能力的作用机制[D]. 王小燕. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [2]轻度认知障碍神经炎症机制的作用靶点[J]. 都屹泓,孙焱,杨若愚,王丽岩,蔡明. 中国组织工程研究, 2021(29)
- [3]音乐干预对APP/PS1小鼠空间认知能力的影响及机制研究[D]. 刘婷. 电子科技大学, 2021(01)
- [4]六味地黄丸含药血清通过Caspase-1/GSDMD-N通路对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤的影响[D]. 高琳琳. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [5]有氧运动可保护β-淀粉样蛋白1-42诱导老年痴呆模型大鼠的大脑[J]. 曹海信,王小梅. 中国组织工程研究, 2021(11)
- [6]小胶质细胞介导神经元损伤在神经退行性疾病中的作用[J]. 谢文佳,夏天娇,周卿云,刘羽佳,顾小萍. 中国组织工程研究, 2021(07)
- [7]黄连解毒汤含药脑脊液对Aβ1-42致BV2细胞凋亡及炎症反应的机制研究[D]. 彭红梅. 成都中医药大学, 2020(02)
- [8]肾素-血管紧张素系统参与2型糖尿病认知功能障碍的机制研究[D]. 田赛. 东南大学, 2020(02)
- [9]补肾健脑汤对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护机制研究[D]. 关勇. 辽宁中医药大学, 2020(02)
- [10]IGF-1对肥胖相关认知障碍的保护作用及机制研究[D]. 王枫. 天津医科大学, 2020(06)