一、氨茶碱对大鼠气道平滑肌细胞分泌基质金属蛋白酶的影响（论文文献综述）
王晶,李亚,李建生,赵鹏,田燕歌,刘学芳,何慧慧,贾瑞,张彩丽[1]（2021）在《PM2.5对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道重塑的影响及补肺益肾组分方的保护作用》文中进行了进一步梳理目的观察PM2.5对慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠气道重塑的影响及补肺益肾组分方的保护作用与可能机制。方法 72只SD大鼠随机分为空白组、PM2.5组、COPD组、PM2.5+COPD组、补肺益肾组分方组和氨茶碱组,每组12只。第1～8周,除空白组和PM2.5组外,其余各组给予香烟熏吸联合反复细菌感染制备COPD大鼠模型。第9～16周,除空白组和COPD组外,其余各组给予大气实时浓缩PM2.5全身暴露;同时,补肺益肾组分方组和氨茶碱组分别给予补肺益肾组分方6.48 mg/（kg·d）和氨茶碱混悬液54 mg/（kg·d）灌胃,其余各组给予生理盐水灌胃（雌鼠1.5 ml/只、雄鼠2 ml/只）。PM2.5末次暴露24 h内取材,观察肺组织病理形态和超微结构;采用免疫组化法检测肺组织碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血管内皮生长因子（VEGF）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（COLⅠ）,Ⅲ型胶原蛋白（COLⅢ）表达;采用ELISA法检测支气管-肺泡灌洗液中基质金属蛋白酶9 （MMP-9）、基质金属蛋白酶12 （MMP-12）和金属蛋白酶组织抑制因子1 （TIMP-1）水平。结果与空白组比较,PM2.5组、COPD组和PM2.5+COPD组大鼠肺组织出现肺泡壁和支气管壁增厚、支气管狭窄、血管增生、炎症细胞浸润和Ⅱ型肺泡上皮结构破坏,且以PM2.5+COPD组尤为显着;与PM2.5+COPD组比较,补肺益肾组分方组和氨茶碱组以上肺组织病理损伤显着改善。与空白组比较,PM2.5组、COPD组和PM2.5+COPD组大鼠肺组织中bFGF、VEGF、α-SMA、COLⅠ、COLⅢ阳性表达,支气管-肺泡灌洗液中MMP-9和MMP-12均显着升高,TIMP-1显着降低（P<0.05或P<0.01）;与PM2.5组或COPD组比较,PM2.5+COPD组bFGF、VEGF、α-SMA、COLⅠ、COLⅢ和MMP-9、MMP-12显着升高,TIMP-1显着降低（P<0.05或P<0.01）;与PM2.5+COPD组比较,补肺益肾组分方组和氨茶碱组bFGF、VEGF、α-SMA、COLⅠ、MMP-9、MMP-12显着降低,TIMP-1显着升高,补肺益肾组分方组COLⅢ显着降低（P<0.05或P<0.01）。结论 PM2.5暴露显着加重COPD模型大鼠气道重塑,补肺益肾组分方可以延缓PM2.5暴露环境下COPD气道重塑进程,其机制可能与抑制胶原沉积、改善蛋白酶/抗蛋白酶失衡等相关。
王明哲[2]（2021）在《固本止咳中药对COPD模型小鼠呼吸道损伤修复的调控机制研究》文中提出背景:慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD）是一种以持续呼吸道症状和气流受限为特征的疾病,通常是由于明显暴露于有毒颗粒或气体引起的气道和/或肺泡异常所致,其发病机制目前尚未完全阐明,临床疗效欠佳。目前对于COPD的治疗主要以对症治疗为主,治疗效果不理想且需要终身控制疾病的发展。中医以整体观念、辨证施治为纲,可以通过“扶正”、“固卫”起到未病先防,已病防变的作用,从而更好的预防和控制COPD的发生与发展。“固本止咳中药”源于国医大师、中医内科呼吸病专家晁恩祥教授多年诊治COPD的临床经验。晁恩祥教授十分重视人体正气在疾病发病和病情进展中的地位和作用,强调“正气存内,邪不可干”,提出“扶正固卫”理论,因而以经典方剂“玉屏风散”为基础,加减化裁创制固本止咳中药。前期临床研究表明,固本止咳中药在改善患者肺功能等方面有较好效果,并可通过调控T细胞亚群发挥调节人体免疫功能的作用。大量的前期动物实验表明,固本止咳中药可改善COPD模型小鼠肺功能情况、呼吸道病理损伤及炎性因子的过度表达、并降低肺组织αβT细胞/γδT细胞比例、增加肺组织中KGF,KGFR蛋白和基因表达含量等。因此,进一步开展固本止咳中药治疗COPD模型小鼠的疗效及作用机制研究具有一定的意义。目的:损伤修复是在各类细胞生长因子共同作用下的协调有序过程,分为炎症反应、细胞增殖、基质沉积及组织重塑四个时期。呼吸道损伤修复是COPD的主要发病机制之一,贯穿了慢阻肺疾病的全程。本研究从呼吸道的黏膜炎症损伤修复、呼吸道结构损伤修复及异常的呼吸道损伤修复这三个方面入手,研究固本止咳中药对于COPD呼吸道损伤修复的调控作用,从而更好的阐释中医“扶正固卫”、“肺主皮毛”的理论。方法:本研究将100只健康ICR小鼠按体重随机分为空白组（n=30）、模型COPD组（n=35）和固本止咳中药组（n=35）。除正常对照组以外,其余各组均被制成COPD模型。本研究采用被动吸烟加鼻腔滴入LPS的方法进行COPD小鼠造模。治疗组于第61天开始予固本止咳中药灌胃,空白对照组和模型对照组使用蒸馏水以同样方法灌胃,共28天。第一部分:体重监测和肺功能检测明确COPD模型小鼠的模型制备情况和固本止咳中药的药效。在固本止咳中药对COPD模型小鼠的呼吸道黏膜炎性损伤修复的调控作用研究方面,本研究首先通过抗体芯片法对小鼠呼吸道40种炎性因子进行系统检测,并采用免疫组化法对抗体芯片结果中COPD组明显变化和固本止咳中药组发挥明显调控作用的炎性因子进行验证。在固本止咳中药对COPD模型小鼠呼吸道结构损伤修复的调控以及对异常的损伤修复的作用研究方面,本研究通过病理学评判、免疫组化法和透射电镜进行检测,以判断香烟烟雾暴露+LPS滴鼻对小鼠呼吸道结构、肺泡结构、细胞外基质和Ⅱ型上皮细胞的结构损伤情况以及固本止咳中药对COPD模型对相应结构损伤修复及异常的损伤修复的调控情况。第二部分:基于质谱技术,对固本止咳中药的成分分析研究,从固本止咳中药的化学成分入手,探讨其发挥损伤修复作用机制的原理。此外,本研究对各组小鼠肺组织进行label-free蛋白组学检测,明确固本止咳中药治疗COPD模型小鼠的靶点及通路。阐释其对于COPD模型小鼠呼吸道损伤修复多成分-多靶点-多通路整体调控的机制。第三部分:基于western-blot和RT-qPCR技术,对第一部分和第二部分结果富集出现的JAK-STAT信号通路进行验证研究,对通路中JAK1,p-JAK1,STAT3,p-STAT3和SOCS3的蛋白表达水平以及JAK1 mRNA,JAK2mRNA,JAK3mRNA,STAT1 mRNA,STAT3 mRNA,SOCS3mRNA的表达水平进行测定。结果:1)体重监测:固本止咳中药可改善COPD模型小鼠体重增长缓慢的情况。2)肺功能检测:COPD 组较空白组 FEV 0.05,FEV0.1,FEV0.2,PEF,Crs,Cst均明显下降（P<0.01）;Rrs,Ers,Rn均明显升高（P<0.01）;G,H均无统计学差异（P>0.05）。固本止咳中药组较COPD组FEV0.05,FEV0.1,FEV0.2,Crs均明显升高（P<0.05）;Rrs,Ers,Rn均明显下降（P<0.05）;PEF,G,H,Cst均无统计学差异（P>0.05）。3)病理形态学:HE染色结果表明,COPD组小鼠病理形态符合COPD的特征,固本止咳中药可改善COPD模型小鼠50-100μm直径气道、呼吸性细支气管和肺泡的病理形态。透射电镜结果表明,COPD组小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞板层小体出现空泡化,线粒体肿胀,嵴断裂或消失。固本止咳中药组小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞部分板层小体出现空泡化,线粒体肿胀,但程度与COPD组相比明显减轻。4)抗体芯片检测:在40个炎性因子中,COPD组与空白组相比,共有8个显着升高的炎性因子,分别为 IL-6,GM-CSF,TNF-α,IFN-γ,IL-1β,IL-3,IL-17 和 IL-12p70（P<0.05）;固本止咳中药组与COPD组相比,共有7个显着降低的因子,分别为IL-6,GM-CSF,TNF-α,IFN-γ,IL-1β,IL-3 和 TCA-3（P<0.05）。5)免疫组化检测:与空白组相比,COPD组IL-6,GM-CSF,TNF-α,IFN-γ,α-SMA,MMP-9,TIMP-1,MMP-9/TIMP-1,HIF-1α 在肺组织中的表达均明显升高（P<0.05）。与 COPD 组相比,固本止咳中药组 IL-6,GM-CSF,TNF-α,IFN-γ,α-SMA,MMP-9,TIMP-1,MMP-9/TIMP-1,HIF-1α在肺组织中的表达均明显下降（P<0.05）。空白组和COPD组,固本止咳中药组与COPD组之间Collegen 1均无统计学差异（P>0.05）。6)中药成分分析:共鉴定出固本止咳中药的41个成分,其中的多种成分被证明可通过抗炎、抗氧化、抑制气道重塑等参与呼吸道损伤修复的调控。7)label-free蛋白组学检测:在COPD组和空白组之间共发现287个差异蛋白,固本止咳中药组和COPD组之间共发现184个差异蛋白。通过对差异蛋白的GO富集分析、KEGG富集分析和REACTOME富集分析发现:固本止咳中药可通过中性粒细胞脱颗粒、补体通路、细胞外基质、JAK-STAT信号通路等多个途径以及多个参与COPD进展的生物标志物,从整体上参与COPD呼吸道损伤修复的调控。8)JAK-STAT信号通路的实验:本研究通过RT-PCR法对各组小鼠肺组织JAK1,JAK2,JAK3,STAT1,STAT3和SOCS3进行了测定,结果表明:与空白组相比,COPD模型小鼠肺组织中 JAK1 mRNA,JAK2 mRNA,JAK3 mRNA,STAT3 mRNA 和 SOCS3 mRNA表达均明显升高（P<0.05）,STAT1 mRNA两组间无统计学差异（P>0.05）。与COPD组相比,固本止咳中药组小鼠肺组织中JAK1 mRNA,STAT3 mRNA表达明显下降（P<0.05）,且 SOCS3 mRNA 表达明显升高（P<0.05）,JAK2mRNA,JAK3 mRNA,STAT1 mRNA与COPD组相比均无统计学差异（P>0.05）。本研究采用western-blot法对各组小鼠肺组织JAK1,p-JAK1,STAT3,p-STAT3,SOCS3进行测定。与空白组相比,COPD 模型小鼠肺组织中 p-JAK1,p-STAT3,p-JAK1/JAK1,p-STAT3/STAT3 明显升高（P<0.05）;JAK1,STAT3,SOCS3与空白组相比均无统计学差异（P>0.05）。与COPD组相比,固本止咳中药组小鼠肺组织中p-JAK1,p-STAT3,p-STAT3/STAT3明显降低（P<0.05）,SOCS3 明显升高（P<0.05）;JAK1,STAT3,P-JAK1/JAK1 与 COPD组相比均无统计学差异（P>0.05）。结论:1)固本止咳中药可通过减少COPD模型小鼠肺组织炎性因子的过度表达,发挥调控呼吸道黏膜炎症损伤修复的作用;并通过改善COPD模型小鼠呼吸道结构、肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构以及细胞外基质的损伤,发挥调控呼吸道结构损伤修复和减少异常的呼吸道损伤修复的作用。体现了中医扶正固卫,肺主皮毛的理论。2)固本止咳中药在COPD损伤修复机制的整体调控中具有多成分-多靶点-多通路的特点,体现了中医整体观念的特点。3)固本止咳中药可通过下调JAK1和STAT3的磷酸化水平,上调SOCS3的表达从而抑制JAK-STAT信号通路。是固本止咳中药基于扶正固卫、肺主皮毛理论调控呼吸道损伤修复在机制上的具体体现。
孙晓[3]（2020）在《人工虫草CPD0301治疗慢性阻塞性肺病的有效成分的作用机制及其生物标示物的研究》文中提出慢性阻塞性肺病（Chronic obstructive pulmonary disease,COPD）是一种常见的慢性炎症性呼吸系统疾病,其主要特点是呈进行性的、不完全可逆的气流受限,常常与气道慢性炎症反应、肺气肿和肺功能丧失相伴随;COPD的发病率和死亡率均较高,2018年我国患者人数已经突破一亿人,影响着全球人类的健康问题。COPD的病理机制非常复杂,炎症反应、氧化应激、蛋白酶-抗蛋白酶失衡、免疫功能紊乱及细胞凋亡等在该病的发病过程中相互联系,相互影响,均发挥着关键作用。目前,COPD的临床用药主要包括支气管扩张剂、糖皮质激素、磷酸二酯酶抑制剂、抗氧化剂等几大类药物。这些药物单独或联合用药都能通过松弛平滑肌或抑制炎症反应对COPD患者起到较好的表面病症治疗效果,但同时对机体产生较大的毒副作用,也不能改变患者肺功能的衰退。因此,寻求更加安全有效的新型COPD治疗药物依旧非常重要。中药对防治COPD及其并发症的发生及发展、延缓肺功能损害及增强机体免疫力有较好的临床疗效。冬虫夏草作为一种珍贵的滋补强壮中药,具有补肺益肾等诸多药理活性;而通过发酵制备的人工虫草在保留野生虫草具有的药理活性的基础上,解决了野生虫草严重不足的难题,如临床应用于治疗COPD等呼吸系统疾病的人工虫草菌粉胶囊一一如金水宝胶囊,百令胶囊等。但是,对虫草抗COPD的有效成分、作用机制、体内生物标示物等方面鲜见报道。为了进一步提高虫草类药物在COPD治疗方面的科学性和有效性,本课题以临床上常用的人工虫草为原料药开展了人工虫草CPD0301抗COPD的有效部位的分离和活性筛选、作用机制以及体内生物标示物的研究。本课题的研究内容主要分为以下三部分:（1）人工虫草中抗COPD的有效成分的筛选,（2）抗COPD有效成分的药理活性及其作用机制的研究,（3）体内生物标示物的筛选及其在COPD模型大鼠中PK-PD关联性的探究。1、人工虫草CPD0301中抗COPD有效成分的筛选人工虫草CPD0301中抗COPD有效成分的筛选研究包括有效部位的提取分离与纯化、有效成分的定性定量分析、抗COPD的活性评价。将冬虫夏草菌粉按照m/v=1:10的比例溶于超纯水及95%乙醇中,100 W功率超声提取得到相应的水提物及醇提物。（1）水提物经过减压浓缩及冻干后,借助HPLC分析技术筛选出10种核苷类化合物并对其进行了定量分析,分析结果为胞苷0.753 mg/g,腺嘌呤 0.248 mg/g,鸟嘌呤 6.520 mg/g,尿嘧啶 0.215 mg/g,次黄嘌呤 0.252mg/g,尿苷 0.395 mg/g,腺苷 5.907 mg/g,2’-脱氧腺苷 0.576 mg/g,鸟苷 4.234 mg/g,胸苷0.376 mg/g,其中鸟嘌呤、腺苷和鸟苷含量较高;（2）醇提物经过乙酸乙酯萃取及大孔树酯柱层析、减压浓缩、重结晶及冻干后,借助GC/MS分析技术对甾醇类物质进行了定性分析,结果表明主要的虫草甾醇类成分是麦角甾醇,随后借助HPLC分析技术对麦角甾醇进行了定量分析,分析结果表明麦角甾醇含量约为5.547 mg/g;（3）乙醇提取后的虫草菌粉再次按照m/v=1:10的比例进行超纯水超声提取,经过醇沉、除蛋白、脱色等处理后,借助硫酸-苯酚法测定其中的多糖含量,分析结果为多糖含量约为4.4%。（4）通过CSE诱导RAW264.7细胞建立体外COPD炎症模型,以NO为评价指标初步评估了核苷类、甾醇类（麦角甾醇）和多糖类物质抗COPD的药理活性,结果表明三者均抑制了 CSE诱导RAW264.7细胞分泌NO的能力,且核苷类及甾醇类优于多糖类。鉴于大量文献报道了多糖类物质抗炎抗氧化的功效,后续实验主要针对核苷类和甾醇（麦角甾醇）展开。二、抗COPD有效成分的药理活性及其作用机制的研究抗COPD有效成分的药理活性及其作用机制研究的主要内容包括体内外COPD模型的建立、药理活性测定以及相关信号通路的探究。COPD的体外模型的建立是通过香烟提取物（CSE）刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞或人支气管上皮细胞16HBE,有效成分与细胞共培养24 h后,借助ELISA法和RT-PCR技术对细胞因子分泌及其mRNA表达水平等方面考察了人工虫草CPD0301中的有效成分对抗炎活性的影响;通过流式细胞技术测定了人工虫草中的有效成分对细胞中活性氧（ROS）水平、细胞表面相关抗原表达及细胞凋亡的影响;通过Western Blot法测定了相关的信号通路蛋白及凋亡相关蛋白的表达,探究了人工虫草中的有效成分对体外分子作用机制的影响。COPD动物模型的建立是通过连续3周、每周1次给老鼠腹腔注射CSE的方式建立;每天通过灌胃给药的方式喂给老鼠人工虫草CPD0301的有效成分,21天后处死老鼠并收集其肺灌洗液（BALF）、血浆及肺组织,通过瑞士-吉姆萨染色统计BALF中炎症细胞的浸润情况;通过酶试剂盒检测及ELISA法测定BALF和血浆中相应的氧化还原相关酶的活力及相关细胞因子的水平;通过HE染色及Masson染色考察人工虫草有效成分对肺组织的形态学影响;通过免疫组化法和Western Blot法测定人工虫草有效成分对动物体内的相关信号通路的影响。1、核苷类物质抗COPD的药理活性及潜在的作用机制研究核苷类物质抗COPD的药理活性及潜在的作用机制研究包括体内外炎症因子分泌、相关基因表达及信号蛋白调控等方面的研究。体外实验结果表明核苷类物质降低了 CSE诱导的RAW264.7细胞中NO、TNF-α、IL-6、IL-1β等炎症介质的分泌,抑制iNOS、TNF-α、IL-6、IL-1β mRNA的表达;体内研究显示核苷类物质改善了 COPD模型小鼠的肺组织结构,降低了小鼠BALF中炎症细胞的浸润,抑制了小鼠BALF及血浆中NO、TNF-α、IL-1β的分泌;体内外分子作用机制的研究均表明,核苷类物质升高了 SIRT1的表达,降低了 NF-κB/p65的表达,表明SIRT1-NF-κB/p65信号通路在核苷类物质的抗炎作用中发挥着重要作用。2、麦角甾醇对COPD的药理活性及潜在的作用机制研究麦角甾醇对COPD的药理活性及潜在的作用机制研究包括麦角甾醇体内外的抗炎、抗氧化、抗凋亡、影响细胞极化及蛋白酶表达等方面的研究。（1）体内外实验结果表明,麦角甾醇不仅抑制了 CSE诱导的16HBE细胞分泌NO、IL-6、TNF-α等炎症因子,降低了细胞中ROS水平,而且减少了炎症细胞在肺部的浸润,抑制了 BALF中氧化应激标志酶活力（CAT、MDA、SOD）,进而发挥其抗炎、抗氧化的作用。此外,麦角甾醇抑制了 CSE引起的16HBE细胞凋亡及小鼠肺组织中的细胞凋亡,上调了抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,下调了促凋亡相关蛋白Bax、Cleaved-caspase 3/7/9和Cleaved-PARP的表达,进而发挥了抗细胞凋亡的作用。麦角甾醇还抑制了信号蛋白NF-κB/p65的表达,说明NF-κB/p65在麦角甾甾醇发挥抗COPD的药理活性中发挥着重要作用。（2）巨噬细胞受到刺激容易发生细胞极化:M1极化（促进炎症）和M2极化（抑制炎症）,在免疫调控中发挥着重要作用。实验结果表明麦角甾醇降低了 M1型细胞典型细胞因子（ROS,IL-6,TNF-α）及其相应 mRNA（iNOS,IL-6,TNF-α）的表达,增加了 M2型细胞典型细胞因子（IL-10,TGF-β）及其相应mRNA（IL-10,TGF-β）的表达;流式细胞术、免疫组化及Western Blot实验结果显示麦角甾醇减少了 M1型细胞典型表面抗原CD40的表达,增加了 M2型细胞典型表面抗原CD163的表达;上述实验结果均表明麦角甾醇能够促使RAW264.7细胞由M1型细胞向M2型细胞转变。此外,实验结果显示麦角甾醇能够激活HDAC3 mRNA及其蛋白的表达,抑制P300、CBP、PCAF mRNA及其蛋白的表达;麦角甾醇能够抑制蛋白激酶IKKβ的活性进而抑制NF-κB/p65的活化。综上,麦角甾醇能够通过HDAC3-NF-κB/p65信号通路调控巨噬细胞的极化,进而发挥抗COPD的治疗作用。三、体内生物标示物及CPD0301在COPD模型大鼠中PK-PD的关联性的探究。体内生物标示物以及CPD0301在COPD模型大鼠中PK-PD关联性的探究包括体内生物标示物的选择及其在COPD模型大鼠体内动力学参数的考察。经过对核苷类物质、多糖类物质及甾醇类物质等人工虫草CPD0301抗COPD的活性成分的初步筛选以及文献调研,最终确定麦角甾醇作为该抗COPD中药的体内生物标示物,并进一步以该物质为人工虫草CPD0301的生物标示物探究了其在COPD模型大鼠中的PK-PD关联性。结果表明,给COPD模型大鼠人工虫草CPD0301的量越大,血浆中生物标示物的含量越高,最高血药浓度Cmax及药-时曲线下面积AUC0∞也随之增大,随即药理活性越高。此外,蒸馏水溶解人工虫草CPD0301并按照450 mg/kg、一天三次的剂量给药后,大鼠血浆中生物标示物的 Cmax 为 15.74 ng/mL、AUC0-∞为180.941 ng/mL·h,而 20%羟丙基-β-环糊精溶解人工虫草CPD0301并按照1.35 g/kg、一天一次的剂量给药后,大鼠血浆中生物标示物的Cmax为97.50 ng/mL、AUC0-∞为1031.30 ng/mL·h,后者远高于前者;且单次给药时,后者达到最高血药浓度的时间明显延后。综上所述,本课题首先对人工虫草抗COPD的有效成分进行了筛选,借助HPLC、GC/MS及化学反应等分析手段分离确定了核苷类成分、甾醇类、多糖类等三类主要活性物质。随后,我们对核苷类和甾醇类（麦角甾醇）物质抗COPD的体内外药理活性和分子作用机制展开了系统的研究,结果表明核苷类物质具有较好的抗炎作用,可以减少炎症细胞的肺部浸润及炎性介质的释放;麦角甾醇在抗炎、抗氧化、抗细胞凋亡、蛋白酶平衡及免疫调节等方面也具有显着的调控作用,表现为其可以抑制炎性细胞浸润及炎性因子的释放、降低氧化物水平并提高抗氧化酶活性、抑制凋亡相关蛋白的表达、抑制金属基质蛋白酶的活性及影响巨噬细胞的极化等。核苷类物质及麦角甾醇的作用机制均与组蛋白去乙酰化酶的活化及NF-κB/p65的抑制有关。最后,我们筛选出麦角甾醇为人工虫草CPD0301的体内生物标示物,并发现人工虫草CPD0301的羟丙基-β-环糊精混悬剂优于常规水溶剂,探究了其在COPD大鼠模型中的药代动力学特征。结果表明人工虫草发挥药理作用呈现浓度依赖性,且以20%羟丙基-β-环糊精为溶剂时AUC0-β提高、血药浓度达峰时间后延。总之,本研究为抗COPD虫草类药物的深入开发和临床研究提供了理论和实验基础。
秦燕勤[4]（2020）在《基于组分配伍药效的补肺益肾组分方干预COPD炎症反应机制》文中指出目的1 补肺益肾组分方（Effective-component compatibility of Bufei Yishen formula,ECC-BYF）及其组分配伍干预作用评价:以慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD）大鼠为研究对象,评价ECC-BYF及其组分配伍对COPD大鼠的干预作用特征,揭示其组分配伍规律。2ECC-BYF阻抑炎症反应机制探讨:以脂多糖（LPS）诱导的巨噬细胞炎症反应模型为研究对象,采用转录组学分析ECC-BYF阻抑炎症反应治疗COPD可能的作用机制。方法实验一228只SD大鼠随机分为正常组（Normal）、模型组（Model）、ECC-BYF组、补气组（Buqi Group,BQ）、补肾组（Bushen Group,BS）、化痰组（Huatan Group,HT）、活血组（Huoxie Group,HX）、扶正组（Fuzheng Group,FZ）、祛邪组（Quxie Group,QX）、补气化痰组（Buqi Huatan Group,BQHT）、补气活血组（Buqi Huoxie Group,BQHX）、补肾化痰组（Bushen Huatan Group,BSHT）、补肾活血组（Bushen Huoxie Group,BSHX）、扶正化痰组（Fuzheng Huatan Group,FZHT）、扶正活血组（Fuzheng Huoxue Group,FZHX）、补气祛邪组（Buqi Quxie Group,BQQX）、补肾祛邪组（Bushen Quxie Group,BSQX）、氨茶碱组（Aminophylline Group,APL）、乙酰半胱氨酸组（N-Acetylcysteine Group,NAC）,共19组,每组12只。1至8周,采用香烟烟雾暴露联合反复细菌感染的方法复制COPD稳定期大鼠模型,9至16周,给予相应的药物灌胃,16周结束后取材。采用WBP全身体积描记系统及PFT测量系统测定肺功能;病理学技术观察肺组织病理及超微结构;对支气管肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中细胞进行分类计数;ELISA法检测血清、BALF中白介素（Interleukin,IL）-1p、IL-6、肿瘤坏死因子（Tumornecrosis factor,TNF）-α等,BALF 中胶原蛋白（Collagen,COL）-1、COL-3、基质金属蛋白酶（Matrix metalloprotein,MMP）-9、MMP-12等,肺组织研磨液及 BALF 中黏蛋白 5AC（Mucin 5AC,MUC5AC）、水通道蛋白5（Aquaporins 5,AQP5）等,血清中血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）、组织因子（Tissue factor,TF）、血栓调节蛋白（Thrombomodulin,TM）等因子水平;比色法检测血清及肺组织研磨液中丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、脂质过氧化物（Lipidperoxide,LPO）等氧化应激产物水平;流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚型。对各类指标进行Region（R）值综合评价,分析ECC-BYF及其组分配伍对COPD大鼠的治疗作用特点,揭示ECC-BYF组分配伍规律。实验二巨噬细胞分为空白组（Control）、LPS模型组（Model）及ECC-BYF不同浓度组,MTT法检测不同浓度ECC-BYF对细胞活性的影响。qPCR法检测不同浓度ECC-BYF对 IL-1β、IL-6、TNF-α、前列腺素-内过氧化物合酶 2（Prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2）mRNA表达的影响,筛选ECC-BYF合适浓度。将巨噬细胞分为Control、Model、ECC-BYF及不同组分配伍组（同实验一）,qPCR法检测其对IL-1β、IL-6、TNF-α、PTGS2 mRNA表达的影响,筛选阻抑炎症反应最佳组分配伍,进行下一步实验。将巨噬细胞分为Control、Model、ECC-BYF、BSHT组,LPS作用24h后提取细胞总RNA,采用Illumina基因测序平台对各组细胞进行基因测序。分析各组细胞基因表达,筛选差异表达基因,对其进行GO富集和KEGG富集功能注释,获得富集基因及相关通路,分析ECC-BYF及BSHT组分配伍可能的阻抑炎症反应机制。结果实验一1对肺功能的影响模型组大鼠潮气量（Tidal Volume,VT）、呼气峰流速（Peak expiratory flow,PEF）、每分钟通气量（Minute Volume,MV）、用力肺活量（Forced vital capacity,FVC）、0.1秒用力呼气容积（Forced expiratory volume in 0.1s,FEV0.1）、0.3 秒用力呼气容积（FEV0.3）明显低于正常组（P<0.05,P<0.01）;ECC-BYF组、氨茶碱组大鼠肺功能较模型组大鼠有明显改善（P<0.01）。2对肺组织病理的影响模型组大鼠肺组织镜下可见细支气管基底膜增厚、肺泡壁断裂融合、肺泡腔扩大、肺泡平均截距（mean linear intercept,MLI）显着增大（P<0.01）,平均肺泡数（mean alveolar number,MAN）明显减少（P<0.01）,并伴有大量炎性细胞浸润,呈肺气肿征象。与模型组比较,ECC-BYF组、氨茶碱组大鼠肺组织病理征象明显减轻（P<0.01）。超微结构方面,模型组大鼠肺组织呼吸膜明显增厚（P<0.01）;肺泡Ⅱ型上皮细胞中板层小体数量减少,呈空泡化;线粒体数量减少、嵴模糊。ECC-BYF及除补肾组外的组分配伍组呼吸膜增厚情况缓解（P<0.05,P<0.01）;线粒体及板层小体数量有所增加。3对炎症反应的影响BALF中炎性细胞数:与模型组比较,ECC-BYF、BSHT、BQQX组大鼠BALF细胞总数、中性粒及淋巴细胞比例显着降低（P<0.05,P<0.01）;FZ、QX、FZHT组BALF细胞总数,BQ、BSHX、FZHX、BSQX组中性粒比例,BQ、FZHT、BSQX组淋巴细胞比例降低（P<0.05,P<0.01）。炎症因子水平:模型组大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平较正常组显着升高,IL-10水平显着降低（P<0.01）:BALF中TNF-α、IL-6水平显着升高（P<0.01）。不同组分配伍对各炎症因子效应不同,R值综合评价结果显示:不同组分配伍阻抑炎症因子的强度为:ECC-BYF、FZHX、BQHX、BQQX、BSHT、BSHX、BSQX（P<0.05,P<0.01）。4对蛋白酶/抗蛋白酶失衡的影响模型组大鼠血清、BALF中MMP-9、MMP-12,BALF中COL-1、COL-3水平较正常组显着升高,BALF中TIMP-1水平显着降低（P<0.05,P<0.01）。R值综合评价结果显示:ECC-BYF、HX、FZ、FZHT、BQQX、BSQX调节蛋白酶/抗蛋白酶失衡及胶原沉积疗效显着（P<0.05,P<0.01）。5对氧化应激的影响模型组大鼠血清及肺组织MDA、LPO水平较正常组显着上升（P<0.01）。各指标R值综合评价结果显示:ECC-BYF、HT、FZ、BQHT可显着调节氧化/抗氧化失衡（P<0.05,P<0.01）。6对黏液分泌的影响模型组大鼠BALF中MUC5AC、AQP5及肺组织中MUC5AC水平较正常组显着增加（P<0.01）。R值综合评价结果显示:ECC-BYF、BSHT、BQHX、APL、NAC抑制黏液高分泌效果显着（P<0.05,P<0.01）。7对内皮损伤/修复的影响模型组大鼠血清TF、VEGF水平显着升高,TM水平较正常组显着降低（P<0.01）。R值综合评价结果显示:ECC-BYF、HX、FZ、BSHX、BQQX在调节内皮损伤/修复效果显着（P<0.05,P<0.01）。8对T淋巴细胞表型的影响模型组大鼠血液CD4+、CD8+细胞数及CD4+/CD8+比例较正常组显着降低（P<0.01）。与Model比较,BYF、FZ、BS、BSHT、BSHX组大鼠血液CD4+、CD8+细胞数显着增多（P<0.05,P<0.01）;BQHT、BQHX、FZHT、APL 组 CD4+细胞数,HT 组 CD8+细胞数及 ECC-BYF、BQ、BQHT、BQHX、FZHT、BQQX、APL 组 CD4+/CD8+比例显着降低（P<0.05,P<0.01）。实验二1 ECC-BYF及其组分配对LPS诱导的巨噬细胞炎症反应的影响ECC-BYF可显着降低LPS诱导的巨噬细胞IL-1β、IL-6、TNF-α和PTGS2 mRNA表达,160 μg/mL效果较好;BSHT显着降低IL-1β、PTGS2 mRNA表达,BQHT可显着降低 IL-1β、TNF-α、PTGS2 mRNA 表达,BQQX、BSQX 配伍可显着降低 IL-1β、IL-6、PTGS2mRNA 表达（P<0.01）。2 ECC-BYF及BSHT组分对LPS诱导的巨噬细胞基因表达的影响差异表达基因水平分析结果显示,空白组与模型组比较,差异表达基因中上调780个,下调677个;ECC-BYF与模型组比较,差异表达基因上调235个,下调276个;BSHT与模型组比较,差异表达基因上调99个,下调144个。ECC-BYF可调节LPS诱导的巨噬细胞186个基因,BSHT配伍可调节LPS诱导的巨噬细胞110个基因。GO富集分析各组细胞差异表达基因结果显示:空白组与模型组差异表达的基因富集于575个GO条目中,主要包括炎症反应、固有免疫反应、细胞内信号转导及细胞组分等。ECC-BYF与Model差异表达的基因富集于279个GO条目中,主要包括炎症反应、细胞因子介导的信号通路、免疫反应及细胞组分等。BSHT与Model差异表达的基因富集于111个GO条目中,主要包括炎症反应、免疫系统进程及细胞组分等。KEGG通路富集结果显示:空白组与模型组差异表达基因富集于TNF信号通路、NF-κB通路、细胞因子受体相互作用通路等63条通路中;ECC-BYF与Model差异表达基因富集于Toll样受体、细胞因子受体相互作用通路、TNF信号通路等24条通路中;BSHT与ECC-BYF差异表达基因富集于Toll样受体、MAPK通路、细胞因子受体相互作用通路等14条通路中。富集通路多与炎症反应及免疫反应有关。结论1补肺益肾组分方及其组分配伍对COPD大鼠不同药效指标有不同的作用特点。含淫羊藿苷的组分配伍阻抑炎症反应效果显着;含人参皂苷Rh1和黄芪甲苷的组分配伍调节氧化/抗氧化失衡作用显着;含丹皮酚的组分配伍调节血管损伤/修复效果显着;FZHT、HX、FZ、BQQX、BSQX组分配伍调节蛋白酶/抗蛋白酶失衡及胶原沉积效果显着;ECC-BYF、BSHT、BQHX配伍抑制黏液高分泌效果显着;FZHT、ECC-BYF、BQHT配伍调节T淋巴细胞表型疗效较好。2 ECC-BYF、BSQX、BSHT、BQQX对LPS诱导的巨噬细胞炎症反应有显着抑制作用;ECC-BYF和BSHT阻抑其炎症反应可能与调控TNF介导的信号通路、NF-κB、细胞因子受体相互作用通路有关。
陈秋仪[5]（2020）在《加减乌梅丸颗粒对哮喘大鼠激素干预模型气道重塑及TGF-β1/Smad通路的影响》文中研究说明研究目的:本研究通过建立哮喘大鼠激素干预模型,运用临床确有疗效的加减乌梅丸颗粒作为治疗药物,评估该药物对模型大鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响以及对气道重塑的阻抑作用,阐明加减乌梅丸颗粒阻抑哮喘大鼠激素干预模型气道重塑的作用靶点及作用机制。研究方法:将健康雄性SD大鼠随机分为正常组、哮喘组、地塞米松组、普米克令舒组及中药组,适应性喂养1周,除正常组外,其余各组均于实验第1天和第8天腹腔注射卵蛋白（OVA）与氢氧化铝佐剂混合液致敏,第15天开始以1%OVA隔天雾化激发,除正常组和哮喘组外,其余各组均在雾化激发前给予地塞米松磷酸钠注射液0.5 mg/kg腹腔注射,按每周0.1 mg/kg速度撤减地塞米松的剂量,普米克令舒组予普米克令舒0.413 mg/kg每日雾化吸入,中药组予加减乌梅丸颗粒1.86 g/kg每日灌胃,均用药7周,观察大鼠一般表征,末次给药24 h后取材。（1）比较各组大鼠肺通气功能及气道重塑程度:大鼠麻醉后检测各组肺通气功能,记录用力肺活量（FVC）、0.2秒用力呼气容积（FEV0.2）、0.2秒内的平均流速（FEV0.2/FVC%）、用力最大呼气流速（PEF）、用力中期呼气流速（FEF25-75%）等数据;处死大鼠后取部分左肺组织固定、石蜡包埋切片,行HE和Masson染色观察各组大鼠肺组织的病理形态学改变,用医学图像分析软件测定气道壁面积（Wat）、气道平滑肌面积（Wam）及两者占气道总面积的百分比。（2）比较各组Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ蛋白以及TGF-β1/Smad信号通路各指标变化:对大鼠右肺进行肺泡灌洗,ELISA法检测各组灌洗液中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad6、Smad7含量;取大鼠部分左肺组织,以免疫组化法测定TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad6、Smad7、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ的平均光密度值;取大鼠右肺上叶、中叶,分别行Western Blotting和RT-qPCR检测,比较各组大鼠肺组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad6、Smad7、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ蛋白及mRNA相对表达水平。研究结果:（1）与正常组比较,哮喘组大鼠经卵蛋白激发后可观察到呼吸急促、搔抓口鼻、烦躁不安、腹肌抽搐、时有喷嚏等表现,并逐渐俯伏在一处,反应迟钝,可闻及明显的喘鸣音,地塞米松组同样具有以上表现,但体重明显减轻,毛发色泽更显暗淡,烦躁不安、暴躁程度更为明显,并具有较强攻击性,中药组以上症状均有所改善,喘鸣音减轻;哮喘组肺通气功能指标FVC、FEV0.2、FEV0.2/FVC%、PEF、FEF25-75%均较正常组显着下降（P<0.05）,出现了持续性的气流阻塞,地塞米松组相比哮喘组无明显差异（P>0.05）,中药组各项指标较二组均有明显改善（P<0.05）,气流阻塞症状有所缓解;HE染色及Masson染色结果显示哮喘组气道周围可见大量炎症细胞浸润,气道管腔明显变窄,气道壁、平滑肌层和基底膜层厚度显着增加,间质纤维增生,胶原蛋白沉积增多,Wat%、Wam%较正常组均显着升高（P<0.05）,气道重塑明显,地塞米松组相比哮喘组气道改变有所减轻、Wat%显着降低（P<0.05）,中药组气道改变较二组均有减轻,气道周围少量炎症细胞浸润,气道壁、平滑肌层和基底膜层厚度降低,胶原蛋白沉积减少,Wat%显着降低（P<0.05）;（2）与正常组比较,哮喘组大鼠肺泡灌洗液中TGF-β1、Smad2、Smad3含量均显着升高（P<0.05）,Smad6、Smad7含量均显着降低（P<0.05）,肺组织中 TGF-β1、Smad2、Smad3、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ蛋白及 mRNA 相对表达水平均显着升高（P<0.05）,Smad6、Smad7蛋白及mRNA相对表达水平均显着降低（P<0.05）;与哮喘组比较,地塞米松组大鼠肺泡灌洗液中TGF-β1含量显着降低（P<0.05）,肺组织中 TGF-β1、Smad2、Smad3、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ蛋白及 mRNA 相对表达水平均显着降低（P<0.05）,Smad6、Smad7蛋白及mRNA相对表达水平均显着升高（P<0.05）;与地塞米松组比较,中药组肺泡灌洗液中TGF-β1、Smad2、Smad3含量均显着降低（P<0.05）,Smad6、Smad7含量均显着升高（P<0.05）,肺组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ蛋白及mRNA相对表达水平均显着降低（P<0.05）,Smad6、Smad7蛋白及mRNA相对表达水平均显着升高（P<0.05）。研究结论:加减乌梅丸颗粒通过调控TGF-β1/Smad信号通路,可恢复Smad2/3和Smad6/7的平衡,抑制TGF-β1信号在细胞内的转导,进而减少气道平滑肌增生以及Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ蛋白沉积,抑制气道壁增厚,延缓气道重塑的发展,改善肺通气功能。
马锦地[6]（2019）在《基于COPD疗效的补肺益肾组分方优化及抑制气道黏液高分泌机制探讨》文中研究说明目的1 以慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）模型大鼠为对象,以补肺益肾方及阳性对照药物氨茶碱为比较,评价补肺益肾组分方干预COPD大鼠效果,确定与补肺益肾方等效的补肺益肾组分方。2以COPD模型大鼠为对象,以补肺益肾方、补肺益肾组分方及阳性对照药物氨茶碱、乙酰半胱氨酸为比较,基于药效对补肺益肾组分方精简优化,确定与补肺益肾组分方等效的补肺益肾组分精简方。3观察补肺益肾组分精简方改善COPD大鼠气道黏液高分泌的作用,并基于EGFR/PI3K/mTOR通路初步探讨其作用机制,为临床应用提供依据。方法实验一:84只SD大鼠随机分为正常组（Normal）,模型组（Model）,补肺益肾方组（BYF）,补肺益肾组分方高剂量组（BYZF-H）,补肺益肾组分方中剂量组（BYZF-M）,补肺益肾组分方低剂量组（BYZF-L）和氨茶碱组（APL）,每组12只。1-12周采用香烟烟雾暴露联合肺炎克雷伯杆菌感染方法制备COPD稳定期大鼠模型,13-20周给予相应药物灌胃。采用全身体积描记系统及PFT测量系统检测大鼠肺功能;采用病理学技术观察肺组织病理及支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）沉渣细胞分类计数变化;采用酶联免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测BALF白细胞介素（interleukin,IL）-1β水平,血清中IL-6、基质金属蛋白酶（matrix metalloprotein,MMP）-9水平;采用血清总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）试剂盒及脂质过氧化物（lipid peroxidation,LPO）试剂盒测定血清T-AOC及LPO变化。采用R值综合评价法综合评价补肺益肾方,补肺益肾组分方高、中、低剂量及氨茶碱对COPD大鼠疗效,筛选与补肺益肾方等效的补肺益肾组分方并进行下一步实验。实验二:144只SD大鼠随机分为正常组（Normal）、模型组（Model）、补肺益肾方组（BYF）、补肺益肾组分方组（根据实验一结果确定,BYZF）、补肺益肾组分精简1方组（BYZF-J1）、补肺益肾组分精简2方组（BYZF-J2）、补肺益肾组分精简3方组（BYZF-J3）、补肺益肾组分精简4方组（BYZF-J4）、补肺益肾组分精简5方组（BYZF-J5）、补肺益肾组分精简6方组（BYZF-J6）、氨茶碱组（APL）和乙酰半胱氨酸组（NAC）;共12组,每组12只。1-8周制备COPD大鼠模型,9-16周给予大鼠相应药物灌胃。检测肺功能、肺组织病理、BALF沉渣细胞分类计数变化;ELISA法检测BALF肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-α、IL-11β、黏蛋白MUC5AC水平及血清IL-6、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制剂1（tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP-1）水平;T-AOC试剂盒及LPO试剂盒测定血清T-AOC及LPO变化;免疫组化法检测肺组织Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ表达。R值综合评价法综合评价补肺益肾方、补肺益肾组分方、补肺益肾组分各精简方、氨茶碱及乙酰半胱氨酸对COPD大鼠疗效,筛选与补肺益肾方及补肺益肾组分方等效的补肺益肾组分精简方并进行进一步研究。实验三:采用病理学技术观察正常组（Normal）、模型组（Model）、补肺益肾组分精简方组（根据实验二结果确定,BYZF-J）、乙酰半胱氨酸组（NAC）大鼠气道病理变化;免疫组化法观察气道MUC5AC、MUC5B、EGFR、Akt、p-mTOR定位与表达;实时荧光定量聚合酶链反应检测气道组织MUC5AC、MUC5B、EGFR、PI3K、Akt、mTOR mRNA表达;蛋白印迹技术检测气道EGFR、PI3K、Akt、mTOR、p-EGFR、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR 蛋白表达。结果实验一:肺功能方面,与Normal 比较,Model大鼠潮气量（VT）、每分钟呼气量（MV）、呼气峰流速（PEF）、用力肺活量（FVC）、第0.1秒用力呼气容积（FEV0.1）及FEVO.1/FVC显着降低（P<0.05,P<0.01）;功能残气量（FRC）显着升高（P<0.01）。R值综合评价各治疗药物对COPD大鼠肺功能均有显着纠正作用（P<0.05,P<0.01）,强度由高至低依次为:BYZF-M、BYF、APL、BYZF-H、BYZF-L。Model大鼠肺组织病理显示肺泡腔扩大、可见大量肺泡壁断裂融合;细支气管基底膜增厚,周围有较多炎性细胞浸润;肺泡平均截距（mean linear intercept,MLI）较Normal显着增高（P<0.01）,平均肺泡数（mean alveolar nuber,MAN）显着降低（P<0.01）。与Model比较,各治疗组大鼠肺组织病理均有改善,以BYF、BYZF-H、BYZF-M较为显着。R值综合评价法对肺功能（VT、MV、PEF、FVC、FEV0.1、FEV0.1/FVC、FRC）,肺组织病理（MLI、MAN）,BALF沉渣染色中性粒细胞比例,BALF中IL-11β,血清中IL-6、MMP-9、T-AOC、LPO水平共15个指标评价,结果显示各治疗药物均对COPD模型大鼠有显着纠正作用（P<0.05,P<0.01）,强度由高至低依次为:BYZF-H、BYZF-M、BYF、BYZF-L、APL。综合药物疗效、安全性及药物成本,确定补肺益肾组分方中剂量为等效的补肺益肾组分方（BYZF）,进行下一步实验研究。实验二:肺功能方面,补肺益肾组分方,补肺益肾方,补肺益肾组分精简1、2、3、5、6方,氨茶碱及乙酰半胱氨酸对COPD大鼠肺功能有显着改善作用（P<0.05,P<0.01）,各治疗措施改善COPD大鼠肺功能强度依次为:APL、NAC、BYZF、BYF、BYZF-J2、BYZF-J5、BYZF-J6、BYZF-J3、BYZF-J1、BYZF-J4。肺组织病理方面,各治疗组大鼠肺组织病理损伤均有减轻,MLI均较Model显着降低（P<0.01）;BYF、BYZF、BYZF-J1、BYZF-J3、BYZF-J5、BYZF-J6大鼠MAN较Model显着增高（P<0.05,P<0.01）。炎症因子方面,与Model相比较:BYZF、BYZF-J3、BYZF-J6大鼠BALF TNF-α水平显着降低（P<0.05）;BYF、BYZF-J3、BYZF-J4、BYZF-J5、BYZF-J6、NAC大鼠IL-1β显着降低（P<0.05,P<0.01）;BYF、BYZF-J1 至BYZF-J6 及NAC大鼠血清 IL-6显着降低（P<0.05,P<0.01）。抑制炎症反应与氧化应激方面,R值综合评价显示药物作用强度由高至低依次为:BYZF、BYZF-J6、BYZF-J3、BYF、BYZF-J4、BYZF-J5、BYZF-J1、BYZF-J2、NAC、APL。改善COPD大鼠肺组织胶原沉积及蛋白酶/抗蛋白酶失衡方面,R值综合评价显示BYZF、BYZF-J1、BYZF-J5、NAC较Model改善显着（P<0.05,P<0.01）。R值综合评价肺功能（VT、MV、PEF、EF50、FVC、FEV0.1、FEVO.1/FVC）,肺组织病理（MLI、MAN）,BALF IL-1β、TNF-α、MUC5AC水平,血清IL-6、MMP-9、TIMP-1、T-AOC、LPO水平及肺组织Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ表达共19个指标,各治疗药物对COPD大鼠均有显着纠正作用,强度由高至低依次为:BYZF、BYZF-J5、NAC、BYF、BYZF-J3、BYZF-J6、BYZF-J2、BYZF-J1、APL、BYZF-J4,根据结果确定补肺益肾组分精简5方为补肺益肾组分精简方（BYZF-J）,进行下一步实验研究。实验三:气道病理显示Model大鼠气道基底膜增厚,黏膜下腺体增大,可见上皮细胞脱落,纤毛倒伏,细支气管管腔狭窄;AB-PAS染色见大量蓝染杯状细胞。NAC及BYZF-J大鼠气道病理改变均有改善,杯状细胞较模型大鼠显着减少（P<0.01）,以BYZF-J改善更为明显。与Normal相比,Model大鼠气道MUC5AC与MUC5B蛋白及mRNA表达显着升高（P<0.01）;NAC及BYZF-J大鼠气道MUC5AC与MUC5B蛋白及mRNA表达较Model显着降低（P<0.01）。与Normal相比,Model大鼠气道EGFR、Akt、mTOR、PI3K mRNA显着增高（P<0.05,P<0.01）;NAC大鼠气道EGFR、Akt、mTOR mRNA及BYZF-J大鼠EGFR、Akt、mTOR、PI3K mRNA较Model显着降低（P<0.05,P<0.01）。Model大鼠气道组织EGFR、Akt、PI3K、mTOR表达及其磷酸化蛋白表达较Normal显着升高（P<0.05,P<0.01）;与Model相比较,NAC可显着降低EGFR、PI3K、Akt及其磷酸化水平与磷酸化mTOR水平（P<0.05,P<0.01）,BYZF-J显着降低EGFR、PI3K、Akt、mTOR表达及磷酸化水平（P<0.05,P<0.01）。结论1补肺益肾组分方对COPD大鼠有较好的疗效,以高、中剂量为优,可显着改善COPD大鼠肺功能和肺组织病理、减轻炎症和氧化应激反应,降低COPD大鼠血清MMP-9水平;其效果与补肺益肾方相当。获得补肺益肾组分方中剂量为等效的补肺益肾组分方。2补肺益肾组分各精简方可不同程度改善COPD大鼠肺功能和肺组织病理、减轻炎症反应和氧化应激、减少肺组织胶原沉积、改善蛋白酶/抗蛋白酶失衡。其中补肺益肾组分精简1、2、3、5、6方与补肺益肾方及补肺益肾组分方效果相当,且以精简5方较优,获得补肺益肾组分精简5方为治疗COPD的有效组分中药,即补肺益肾组分精简方。3补肺益肾组分精简方可改善COPD大鼠气道重塑、减少杯状细胞数、抑制黏膜下腺体增生;显着降低黏蛋白MUC5AC、MUC5B表达有效抑制气道黏液高分泌,其机制可能与调控EGFR/PI3K/mTOR通路有关。4补肺益肾组分方及补肺益肾组分精简方治疗COPD疗效有待进一步临床验证,其抑制气道黏液高分泌机制有待进一步深入研究。
曹利静[7]（2019）在《百令胶囊对支气管哮喘患者气道重塑及肺功能的影响》文中研究表明背景支气管哮喘（bronchial asthma,BA）简称哮喘,是一种由多种炎性细胞参与的气道慢性炎性疾病,是临床常见的呼吸道系统疾病,以反复咳嗽、喘息、呼吸困难等为临床特征,若病情反复或治疗不当可导致气道不可逆性缩窄和气道重塑,严重影响患者生活质量。研究显示,在各种炎性因子及环境刺激作用下,使得MMPs及TGF-β等细胞因子分泌增加,在各种炎性因子的作用下导致成纤细胞及平滑肌细胞增殖,导致气道重塑。近几年来,中医在哮喘病的临床治疗上取得了较为显着的进步。百令胶囊是由虫草菌粉经过低温发酵并通过生物方法生产出的纯中药。冬虫夏草具备多种免疫功能,其通过激活巨噬细胞、T、B淋巴细胞而发挥免疫调节功能,但其对气道重塑的研究较少,本次研究目的探讨百令胶囊对支气管哮喘气道重塑相关因子、肺功能改善情况及对生活质量的影响。目的探讨百令胶囊对BA患者气道重塑因子、肺功能及生活质量的影响。方法研究对象选取2017年3月至2018年5月新乡医学院第一附属医院呼吸内科收治的慢性持续期BA患者52例分为2组,对照组和观察组,每组26例。对照组应用布地奈德福莫特罗粉吸入剂,每次1吸（布地奈德160μg,福莫特罗4.5μg）,每天2次,疗程12周;孟鲁司特钠片10 mg,每日1次,睡前口服,疗程12周。观察组在对照组治疗方法基础上同时应用百令胶囊0.5 g,3粒/次,每日3次,口服,疗程12周。于治疗前、治疗12周后应用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清MMP-9、TIMP-1及TGF-β1浓度,肺功能仪测定FVC、FEV1及PEF等指标。通过ACT评分评价患者生活质量。最后采用SPSS22.0软件进行分析。结果1.治疗12周后,2组患者血清MMP-9、TIMP-1及TGF-β1水平均较治疗前显着降低（P<0.05）。与对照组相比,观察组血清MMP-9、TIMP-1及TGF-β1水平降低更明显（P<0.05）。2.治疗12周后,2组患者的FVC、FEV1、PEF较治疗前显着升高（P<0.05）。与对照组相比,观察组升高更明显（P<0.05）。3.治疗12周后,2组患者的ACT评分较治疗前均显着升高（P<0.05）,与对照组相比,观察组升高较明显（P<0.05）。结论百令胶囊联合常规治疗通过降低MMP-9、TIMP-1及TGF-β1水平抑制哮喘气道重塑,改善肺功能,从而提高患者的生活质量,为哮喘的治疗提供了新的方向。
曹园[8]（2017）在《瘤果黑种草子抗慢性阻塞性肺病的组分优化及免疫作用机理研究》文中认为目的:确定抗慢性阻塞性肺病（hronic obstructive pulmonary disease,COPD）的瘤果黑种草子（nigella glandulifera seeds,NGS）有效部位黄酮和挥发油的最优组合,并探索其抗COPD的效应及作用机制。方法:1)采用固定剂量法观察瘤果黑种草子黄酮和挥发油组合物（nigella glandulifera seeds flavonoids and volatile oil composition,NFVC）的急性毒性反应;2)于小鼠足趾注射角叉菜胶,观察NFVC抑制小鼠足趾肿胀度的影响;于大鼠足趾注射弗氏佐剂,观察NFVC对抑制大鼠足趾肿胀程度的影响;采用脂多糖（lioPosacchrid,LPS）诱导RAW264.7体外炎症模型,观察NFVC对小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7分泌白介素-8（Interleukin-8,IL-8）、白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、一氧化氮（nitric oxide,NO）炎症因子水平的影响;采用乙酰胆碱（acetylcholine chloride,Ach）和组胺（histamine,His）所致豚鼠离体气管环平滑肌痉挛,观察NFVC对离体豚鼠气管平滑肌解痉作用的影响。通过上述整体动物实验,细胞实验,动物离体组织实验,筛选出瘤NFVC最优组合;3)采用气管内滴入LPS加烟熏建立大鼠COPD模型,观察大鼠的一般状况,肺组织的病理改变,进行支气管肺泡灌洗液（Bronchial alveolar lavage fluid,BALF）和血液炎性细胞分类,采用ELISA法测分别定BALF和血液中的IL-8、γ干扰素（Interferon-γ,IFN-γ）、白介素-4（Interleukin-4,IL-4）、白介素-17（Interleukin-17,IL-17）、白介素-10（Interleukin-10,IL-10）和转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）的含量水平以及血液中的α1-抗胰蛋白酶、纤维链接蛋白含量;采用流式细胞仪检测血液中不同类型的T淋巴细胞:Th1、Th2、Th17及Treg淋巴细胞。结果:1)NFVC无明显急性毒性;2)与单剂量黄酮组和挥发油组比较,NFVC200:40mg/kg剂量组（即200mg/kg黄酮加40mg/kg挥发油）抑制角叉菜胶致小鼠足跖肿胀度明显（P<0.01）;NFVC140:10mg/kg、140:20mg/kg剂量组抑制佛氏完全佐剂致大鼠足趾肿胀度明显（P<0.01）;NFVC80:12.5μg/ml、80:25μg/ml剂量组抑制RAW264.7释放NO、IL-8、IL-6等炎症细胞因子作用明显（P<0.01）;NFVC1:10mg/ml、2:5mg/ml剂量组降低Ach和His致豚鼠气管平滑肌收缩张力作用明显（P<0.01）;3)NFVC与黄酮组、挥发油组比较:改善COPD模型大鼠活动少、饮食饮水减少等精神状态,对其肺组织的病理变化有不同程度的减轻;血清中IL-4、IL-8、IL-17、纤维链接蛋白的含量水平均降低（P<0.05）,IL-10、α1-抗胰蛋白酶的含量水平均升高（P<0.05）,白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞数量下降（P<0.05）,Th1、Th17淋巴细胞比例下降（P<0.05）;BALF中IL-4、IL-8、IL-17的含量水平均降低（P<0.05）,白细胞、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞数量下降（P<0.05）。结论:NFVC70:20mg/kg、140:10mg/kg、140:20mg/kg对角叉菜胶和佐剂性关节足趾肿胀有抑制作用,对RAW264.7细胞释放IL-8、IL-6和NO有抑制作用,缓解豚鼠支气管痉挛,结果提示为最优组合物的配比剂量。NFVC140:20mg/kg剂量组具有较好的抗COPD的作用,其作用机理可能与抑制中性粒细胞及以Th1、Th17为主的T淋巴细胞,阻止RAW264.7细胞释放IL-8、IL-6减缓炎症反应;增加α1-抗胰蛋白酶的含量,减轻气道的炎症刺激,减缓小、细支气管结构重建和肺大泡的形成有关。
庞才双,曾妮,申永春,文富强[9]（2017）在《慢性阻塞性肺疾病气道重塑机制及其研究进展》文中认为慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）是全球性的健康问题,以不完全可逆且进行性加重的气流受限为特征。气流受限与结构上病变分不开,气道重塑是气道壁及肺实质的慢性炎症和结构破坏。支气管壁中成分的变化,引起气道腔变狭窄扭曲,肺气肿形成,导致的结果则是气流阻力增加、进行性加重的小气道气流受限,慢性的气流阻塞。本文就COPD气道重塑机制和研究现状进行综述。
马小娟[10]（2014）在《维吾尔药神香草对慢性哮喘的干预作用及其过程中Tfh细胞的变化研究》文中认为目的：本研究通过建立Balb/c小鼠慢性哮喘的模型，并用维吾尔药神香草干预后，观察神香草对慢性哮喘气道高反应性的抑制作用；比较肺组织中MMP-9、TIMP-1与T细胞亚群的关系，并探讨神香草能否通过调节MMP-9/TIMP-1的平衡而达到改善气道重塑的目的；检测不同组中Tfh细胞表型和含量的变化，以了解Tfh细胞是否参与了慢性哮喘的发病过程，同时观察维吾尔药神香草干预后对慢性哮喘时Tfh细胞表达的影响。本研究包括：①复制慢性哮喘的动物模型，并分别经地塞米松和神香草干预后，观察各组小鼠气道反应性、肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞比例及组织结构的改变，探讨神香草能否降低气道高反应性，减轻组织损伤；②通过比较各组MMP-9，TIMP-1与T细胞主要细胞因子的相关性，探讨慢性哮喘发病过程中MMP-9，TIMP-1的改变与T细胞亚群的关系；同时给予神香草干预，观察维吾尔药神香草是否能通过调节MMP-9，TIMP-1的平衡而对慢性哮喘气道重塑发挥改善作用；③分析哮喘组和对照组中Tfh细胞含量和表型的变化，初步探讨Tfh细胞在慢性哮喘发生过程中的作用；并观察维吾尔药神香草干预后脾脏和外周血中Tfh细胞及其相关分子的改变，进一步揭示神香草的作用机制。方法：课题第一部分：①神香草水提液的制备。神香草干草经煮沸、过滤后呈水提液，并浓缩备用；②选择健康的雌性Balb/c小鼠32只，随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组和神香草组。除对照组外，其余三组小鼠均致敏，并连续激发8周；预处理组小鼠分别于激发前1h给予地塞米松和神香草水提液灌胃，连续8周。末次激发24h内在清醒、无创条件下测定小鼠气道反应性；抽取肺泡灌洗液并进行白细胞的分类和计数；并观察各组小鼠肺组织形态学的改变以及胶原纤维的沉积和气道粘液分泌的情况。课题第二部分：神香草水提液的制备及模型的复制同第一部分。末次激发后留取标本，测定指标。通过Real-timePCR检测各组小鼠肺组织中MMP-9、TIMP-1、IFN-γ、IL-4、IL-17、TGF-βmRNA的变化，并且分别比较MMP-9、TIMP-1和IFN-γ、IL-4、IL-17、TGF-β的相关性；此外，使用westernblot和免疫组化的方法检测并比较了各组肺组织中MMP-9、TIMP-1在蛋白水平的表达。课题第三部分：神香草水提液的制备及模型的复制同第一部分。末次激发后留取标本，测定指标。通过流式细胞术检测并比较各组脾脏和外周血中Tfh细胞的比例；采用RT-PCR，WesternBlot和免疫组化等方法分别检测BCL-6、CXCR5、ICOS、ICOSL和IL-21在mRNA水平和蛋白水平的表达。结果：课题第一部分：与对照组比较，哮喘组小鼠在吸入各浓度Mch时Penh值均升高（P＜0.05），且此差异具有浓度依赖性；地塞米松组和神香草组小鼠在吸入各浓度Mch时Penh的变化大于对照组，但明显低于哮喘组，差异有统计学意义（P＜0.05）；哮喘组BALF中白细胞的含量和嗜酸性粒细胞的比例均增加（P＜0.05），但经地塞米松和神香草干预后含量和比例均减少（P＜0.05）；哮喘组小鼠血清IgE的浓度增加（P＜0.05），而神香草干预后IgE的浓度有所下降；此外，Masson染色和PAS染色的结果均表明哮喘组肺组织中有大量的胶原纤维沉积和黏液分泌，而地塞米松组和神香草组中上述变化均减轻。课题第二部分：经RT-PCR法均观察到哮喘组肺组织MMP-9和TIMP-1的表达与对照组比较明显升高，尤其是TIMP-1的变化更加显着，差异有统计学意义（P＜0.05）；而经地塞米松和神香草干预后，MMP-9、TIMP-1的表达降低，与哮喘组比较有统计学差异（P＜0.05）；同时发现，经地塞米松和神香草干预后，肺组织IL-4、IL-17和TGF-β在mRNA水平的表达均较哮喘组减少（P＜0.05），而IFN-γmRNA的表达量却增加（P＜0.05）；相关性分析表明，MMP-9与IL-4和IL-17的表达呈正相关，而与IFN-γ的表达呈负相关；TIMP-1的表达量与各指标均密切相关。此外，蛋白水平的检测也表明，哮喘组MMP-9和TIMP-1的表达增加（P＜0.05），而经地塞米松和神香草干预后表达量下降（P＜0.05）。课题第三部分：经地塞米松和神香草干预后，脾脏和外周血中CD4+CXCR5+细胞数的百分率均低于哮喘组，并且神香草组中的减少更加明显（P＜0.05）；同时神香草组肺组织中BCL-6、CXCR5、ICOS、ICOSL和IL-21mRNA的表达均低于哮喘组（P＜0.05），并且经WesternBlot检测后发现神香草组BCL-6、CXCR5、ICOS、ICOSL的水平也低于哮喘组（P＜0.05）；此外，IL-21的阳性表达量也明显减少（P＜0.05）。结论：①慢性哮喘时肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞比值增加，气道反应性增高，组织损伤并伴有大量黏液的分泌；而经维吾尔药神香草预处理后可减少嗜酸性粒细胞比值，降低气道反应性，减轻组织损伤和黏液的分泌；提示，维吾尔药神香草可能通过影响T细胞的表达，使炎性细胞和细胞因子减少，从而降低气道高反应性和组织损伤。②慢性哮喘发病过程中，MMP-9、TIMP-1的改变与T细胞主要细胞因子的变化具有相关性；而维吾尔药神香草可减少IL-4、IL-17和TGF-β的表达，增加IFN-γ的表达，还可纠正MMP-9/TIMP-1的失衡；考虑T细胞亚群的异常表达可能影响了MMP-9和TIMP-1的分泌，维吾尔药神香草可能通过调节T细胞亚群的表达，纠正了MMP-9/TIMP-1失衡从而达到缓解气道重塑的目的；③哮喘组小鼠脾脏和外周血中Tfh细胞的含量增加，并且肺组织中BCL-6、CXCR5、ICOS、ICOSL、IL-21mRNA水平和蛋白水平的表达明显升高，提示Tfh细胞可能参与了慢性哮喘的发病过程；而神香草组小鼠脾脏和外周血中Tfh细胞的含量低于哮喘组；并且神香草组小鼠肺组织Tfh细胞相关分子BCL-6、CXCR5、ICOS、ICOSL及IL-21在mRNA水平和蛋白水平的表达明显降低，考虑维吾尔药神香草可能抑制了慢性哮喘过程中Tfh细胞的表达。
二、氨茶碱对大鼠气道平滑肌细胞分泌基质金属蛋白酶的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、氨茶碱对大鼠气道平滑肌细胞分泌基质金属蛋白酶的影响（论文提纲范文）
（1）PM2.5对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道重塑的影响及补肺益肾组分方的保护作用（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物和细菌 |
| 1.2 香烟 |
| 1.3 药物 |
| 1.4 主要试剂与仪器 |
| 1.5 模型制备 |
| 1.6 PM2.5暴露 |
| 1.7 分组及给药 |
| 1.8 观察指标及方法 |
| 1.8.1 肺组织病理 |
| 1.8.2肺组织超微结构 |
| 1.8.3 肺组织b FGF、VEGF、α-SMA、COLⅠ和COLⅢ表达水平 |
| 1.8.4 支气管-肺泡灌洗液中蛋白酶水平 |
| 1.9 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组大鼠肺组织病理形态比较 |
| 2.2 各组大鼠肺组织超微结构比较 |
| 2.3 各组大鼠肺组织b FGF、VEGF、α-SMA、COLⅠ和COLⅢ表达比较 |
| 2.4 各组大鼠支气管-肺泡灌洗液中蛋白酶水平比较 |
| 3 讨论 |
（2）固本止咳中药对COPD模型小鼠呼吸道损伤修复的调控机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述一 扶正固卫、肺主皮毛理论与慢性阻塞性肺疾病呼吸道损伤修复 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 蛋白质组学在中医药中的应用研究 |
| 参考文献 |
| 第一部分 固本止咳中药对COPD模型小鼠的治疗作用和调控呼吸道损伤修复作用研究 |
| 前言 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 基于组学的固本止咳中药调控COPD模型小鼠呼吸道损伤修复机制的整体研究 |
| 前言 |
| 实验一 基于质谱技术的固本止咳中药成分分析 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 实验二 基于蛋白组学的固本止咳中药调控COPD模型小鼠损伤修复机制研究 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 基于JAK-STAT信号通路的固本止咳中药调控COPD模型小鼠呼吸道损伤修复机制研究 |
| 前言 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）人工虫草CPD0301治疗慢性阻塞性肺病的有效成分的作用机制及其生物标示物的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 综述 |
| 第一章 前言 |
| 1 慢性阻塞性肺病(COPD) |
| 1.1 COPD概述 |
| 1.2 COPD的诱因及诊断 |
| 1.3 COPD的病理生理学 |
| 1.4 COPD的发病机制 |
| 1.5 COPD的信号调控机制 |
| 1.6 COPD的治疗现状 |
| 2 冬虫夏草的研究现状 |
| 2.1 化学成分的研究 |
| 2.2 药理作用的研究 |
| 3 PK-PD在中药研究中的意义 |
| 3.1 样品预处理方法 |
| 3.2 样品检测方法 |
| 4 本课题的研究思路 |
| 5 参考文献 |
| 第二部分 人工虫草CPD0301中抗COPD有效成分的筛选 |
| 第二章 人工虫草CPD0301中核苷类物质定性及定量分析 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 1.1 实验试剂与药品 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 核苷类物质提取与分离 |
| 2.2 样品溶液的制备 |
| 2.3 核苷类物质(Nucleosides) HPLC分析方法的建立 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 方法的专属性 |
| 3.2 标准曲线与线性范围 |
| 3.3 方法精密度与准确度 |
| 3.4 方法回收率 |
| 3.5 人工虫草CPD0301中各核苷成分的含量 |
| 4 讨论与小结 |
| 5 参考文献 |
| 第三章 人工虫草CPD0301中甾醇类物质筛选 |
| 第一节 人工虫草CPD0301中甾醇类物质定性分析 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 1.1 实验试剂与药品 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 甾醇类物质提取、分离、纯化 |
| 2.2 色谱条件 |
| 2.3 质谱条件 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 甾醇粗提取物中的总甾醇含量 |
| 3.2 纯化后的甾醇定性检测 |
| 4 讨论与小结 |
| 第二节 人工虫草CPD0301中麦角甾醇的定量分析 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 1.1 实验试剂与药品 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 甾醇类物质提取与分离 |
| 2.2 样品溶液的制备 |
| 2.3 麦角甾醇(Ergosterol)HPLC分析方法的建立 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 方法的专属性 |
| 3.2 标准曲线与线性范围 |
| 3.3 方法精密度 |
| 3.4 方法回收率与准确度 |
| 3.5 人工虫草CPD0301中麦角甾醇的含量 |
| 4 讨论与小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 人工虫草CPD0301中多糖类物质筛选 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 1.1 实验试剂与药品 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 多糖类物质提取与分离 |
| 2.2 多糖的测定 |
| 2.3 蛋白质、多肽、氨基酸、还原性糖等杂质的测定 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 多糖的含量测定 |
| 3.2 杂质的测定 |
| 4 讨论与小结 |
| 5 参考文献 |
| 第五章 人工虫草CPD0301中有效成分的初步活性评价 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 1.1 实验仪器与设备 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 细胞 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 核苷类物质的纯化 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 细胞传代、冻存、复苏 |
| 2.4 COPD炎症模型的建立 |
| 2.5 NO的含量测定 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 CSE溶液的定量测定 |
| 3.2 MTT法测定CSE对RAW264.7细胞活力的影响 |
| 3.3 体外建模所需CSE浓度的筛选 |
| 3.4 核苷类、甾醇类、多糖类及麦角甾醇对10%CSE诱导的RAW264.7细胞分泌NO的影响 |
| 4 讨论与小结 |
| 5 参考文献 |
| 第三部分 人工虫草CPD0301中抗COPD有效成分的药理活性及其作用机制的研究 |
| 第六章 人工虫草CPD0301中核苷类物质的药理活性及其作用机制的研究 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 1.1 实验仪器与设备 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 细胞和动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 细胞传代、冻存、复苏 |
| 2.3 MTT法检测细胞存活率 |
| 2.4 COPD炎症模型的建立 |
| 2.5 体内外相关炎症因子的测定 |
| 2.6 BALF中炎症细胞瑞士-吉姆萨染色 |
| 2.7 Balb/c小鼠肺组织形态学观察 |
| 2.8 RT-PCR法测定RAW264.7细胞中炎症因子mRNA水平 |
| 2.9 Western blot法测定体内外相关蛋白的表达 |
| 2.10 免疫组化法测定肺组织中相关蛋白的表达 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 核苷类物质对细胞活力的影响 |
| 3.2 核苷类物质对RAW264.7中炎症因子分泌的影响 |
| 3.3 核苷类物质对RAW264.7细胞中信号蛋白表达的影响 |
| 3.4 核苷类物质对小鼠肺组织结构的影响 |
| 3.5 核苷类物质缓解了COPD小鼠肺组织中的炎症反应 |
| 3.6 核苷类物质对小鼠肺组织中相关信号蛋白表达的影响 |
| 4 讨论与小结 |
| 5 参考文献 |
| 第七章 麦角甾醇抗COPD的药理活性及其作用机制的研究 |
| 第一节 麦角甾醇具有抗炎、抗氧化和抗细胞凋亡的作用 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 1.1 实验仪器与设备 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 细胞和动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 细胞传代、冻存、复苏 |
| 2.3 SRB法检测细胞存活率 |
| 2.4 COPD炎症模型的建立 |
| 2.5 体内外相关炎症因子或炎症细胞的测定 |
| 2.6 体内外相关氧化还原指标的测定 |
| 2.7 麦角甾醇对16HBE细胞产生ROS的影响 |
| 2.8 麦角甾醇对16HBE细胞及Balb/c小鼠肺组织细胞凋亡的影响 |
| 2.9 Balb/c小鼠肺组织形态学观察 |
| 2.10 Western blot法测定体内外相关蛋白的表达 |
| 2.11 NF-KB/p65活力的测定 |
| 2.12 免疫组化法测定肺组织中相关蛋白的表达 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 体外细胞模型的确立 |
| 3.2 麦角甾醇对16HBE细胞活力的影响 |
| 3.3 麦角甾醇对COPD体内外模型中炎症反应的影响 |
| 3.4 麦角甾醇对COPD体内外模型中氧化应激的影响 |
| 3.5 麦角甾醇对CSE诱导的小鼠肺组织形态结构的影响 |
| 3.6 麦角甾醇对COPD体内外模型中细胞凋亡作用的影响 |
| 3.7 麦角甾醇对COPD体内外模型中信号蛋白表达的影响 |
| 4 讨论与小结 |
| 第二节 麦角甾醇在巨噬细胞极化过程中发挥着重要作用 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 1.1 实验仪器与设备 |
| 1.2 药品与试剂 |
| 1.3 细胞和动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞培养、传代、冻存与复苏 |
| 2.2 SRB法检测细胞存活率 |
| 2.3 COPD炎症的建立 |
| 2.4 体内外相关炎症因子的建立 |
| 2.5 BALF中炎症细胞瑞士-吉姆萨染色 |
| 2.6 SD大鼠肺组织形态学观察 |
| 2.7 RT-PCR法测定RAW264.7细胞中炎症因子mRNA水平 |
| 2.8 流式细胞仪检测巨噬细胞表面表示物的表达 |
| 2.9 Western blot法测定体内外相关蛋白的表达 |
| 2.10 免疫组化法测定肺组织中相关蛋白的表达 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 细胞活力的测定 |
| 3.2 麦角甾醇对细胞极化标志性炎症介质分泌的影响 |
| 3.3 麦角甾醇对CSE诱导的SD大鼠生命体征及肺组织的影响 |
| 3.4 麦角甾醇对体内外模型中巨噬细胞表面标示蛋白表达的影响 |
| 3.5 麦角甾醇对RAW264.7细胞和肺组织中MMP-9蛋白表达的影响 |
| 3.6 麦角甾醇对COPD体内外模型中信号蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 人工虫草在COPD模型大鼠中的PK-PD关联性研究 |
| 第八章 麦角甾醇作为生物标示物探究人工虫草CPD0301在体内的PK-PD关联性 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 1.1 实验试剂与药品 |
| 1.2 实验仪器与设备 |
| 1.3 实验动物 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 液相色谱条件 |
| 2.2 质谱条件 |
| 2.3 内标物溶液的配制 |
| 2.4 药物代谢动力学实验方案 |
| 2.5 血浆样本前处理方法 |
| 2.6 分析方法学验证 |
| 2.7 药动学参数计算 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 方法的专属性 |
| 3.2 线性范围与定量下限 |
| 3.3 精密度和准确度 |
| 3.4 提取回收率 |
| 3.5 稳定性 |
| 3.7 基质效应 |
| 3.8 药代动力学研究 |
| 4 讨论 |
| 4.1 样品前处理方法 |
| 4.2 药动学研究的意义 |
| 5 小结 |
| 6 参考文献 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 攻读学位论文期间发表的文章 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（4）基于组分配伍药效的补肺益肾组分方干预COPD炎症反应机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中药组分配伍在现代中药研究中的应用 |
| 参考文献 |
| 综述二 慢性阻塞性肺疾病发病机制研究概述 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 补肺益肾组分方及其组分配伍对COPD大鼠的干预作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二 补肺益肾组分方阻抑炎症反应机制 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 存在的问题和不足 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（5）加减乌梅丸颗粒对哮喘大鼠激素干预模型气道重塑及TGF-β1/Smad通路的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 激素依赖型哮喘的发病机制与治疗进展 |
| 1 激素依赖型哮喘的定义 |
| 2 激素依赖型哮喘的发病机制 |
| 3 激素依赖型哮喘临床治疗进展 |
| 4 总结与展望 |
| 综述二 乌梅丸治疗支气管哮喘的研究进展 |
| 1 乌梅丸源流及其发展 |
| 2 乌梅丸治疗支气管哮喘的理论基础 |
| 3 乌梅丸治疗支气管哮喘的临床应用进展 |
| 4 乌梅丸治疗支气管哮喘的现代药理学研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 加减乌梅丸颗粒对哮喘大鼠激素干预模型气道重塑及肺通气功能的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 实验二 加减乌梅丸颗粒对哮喘大鼠激素干预模型TGF-β1/Smad信号通路及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（6）基于COPD疗效的补肺益肾组分方优化及抑制气道黏液高分泌机制探讨（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 组分中药治疗肺系疾病研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 慢性阻塞性肺疾病气道黏液高分泌研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 补肺益肾组分方治疗COPD大鼠疗效评价 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二 基于COPD模型大鼠疗效的补肺益肾组分方精简优化 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 实验三 补肺益肾组分精简方抑制COPD大鼠气道黏液高分泌机制探讨 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 存在问题与不足 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（7）百令胶囊对支气管哮喘患者气道重塑及肺功能的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 支气管哮喘气道重塑发病机制及治疗进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附件 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）瘤果黑种草子抗慢性阻塞性肺病的组分优化及免疫作用机理研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 研究内容与方法 |
| 1 组合物的急性毒性实验 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 组合物析因设计与筛选试验 |
| 2.1 组合物剂量配比 |
| 2.2 筛选试验1:小鼠角叉菜胶致小鼠足趾肿胀实验 |
| 2.3 筛选试验2:大鼠佐剂型关节炎实验 |
| 2.4 筛选试验3:体外刺激RAW264.7体外抗炎筛选实验 |
| 2.5 筛选试验4:豚鼠肺气管螺旋条实验 |
| 2.6 筛选试验分析 |
| 2.7 统计分析 |
| 3 NFVC对COPD大鼠模型的作用及其机理研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 慢性阻塞性肺疾病发病机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 教师评阅意见表 |
（9）慢性阻塞性肺疾病气道重塑机制及其研究进展（论文提纲范文）
| 1 上皮间质转化与COPD气道重塑 |
| 2 细胞外基质变化与COPD气道重塑 |
| 3 炎症反应与COPD气道重塑 |
| 4 气道重塑的治疗 |
| 5 小结与展望 |
（10）维吾尔药神香草对慢性哮喘的干预作用及其过程中Tfh细胞的变化研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 维吾尔药神香草对气道高反应性的抑制作用 |
| 1 内容与方法 |
| 1.1 实验动物的分组 |
| 1.2 动物模型的建立 |
| 1.3 神香草水提液的制备 |
| 1.4 指标检测 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 维吾尔药神香草对慢性哮喘气道重塑过程中 MMP-9，TIMP-1 平衡的调节作用 |
| 1 内容与方法 |
| 1.1 实验动物的分组 |
| 1.2 动物模型的建立 |
| 1.3 神香草水提液的制备 |
| 1.4 指标检测 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部 Tfh 细胞在慢性哮喘发病机制中的作用及其神香草的干预 |
| 1 内容与方法 |
| 1.1 实验动物分组 |
| 1.2 动物模型的建立 |
| 1.3 神香草水提液的制备 |
| 1.4 指标检测 |
| 1.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
四、氨茶碱对大鼠气道平滑肌细胞分泌基质金属蛋白酶的影响（论文参考文献）
- [1]PM2.5对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道重塑的影响及补肺益肾组分方的保护作用[J]. 王晶,李亚,李建生,赵鹏,田燕歌,刘学芳,何慧慧,贾瑞,张彩丽. 中医杂志, 2021
- [2]固本止咳中药对COPD模型小鼠呼吸道损伤修复的调控机制研究[D]. 王明哲. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]人工虫草CPD0301治疗慢性阻塞性肺病的有效成分的作用机制及其生物标示物的研究[D]. 孙晓. 山东大学, 2020(10)
- [4]基于组分配伍药效的补肺益肾组分方干预COPD炎症反应机制[D]. 秦燕勤. 北京中医药大学, 2020(04)
- [5]加减乌梅丸颗粒对哮喘大鼠激素干预模型气道重塑及TGF-β1/Smad通路的影响[D]. 陈秋仪. 北京中医药大学, 2020(04)
- [6]基于COPD疗效的补肺益肾组分方优化及抑制气道黏液高分泌机制探讨[D]. 马锦地. 北京中医药大学, 2019(07)
- [7]百令胶囊对支气管哮喘患者气道重塑及肺功能的影响[D]. 曹利静. 新乡医学院, 2019(02)
- [8]瘤果黑种草子抗慢性阻塞性肺病的组分优化及免疫作用机理研究[D]. 曹园. 新疆医科大学, 2017(05)
- [9]慢性阻塞性肺疾病气道重塑机制及其研究进展[J]. 庞才双,曾妮,申永春,文富强. 西部医学, 2017(01)
- [10]维吾尔药神香草对慢性哮喘的干预作用及其过程中Tfh细胞的变化研究[D]. 马小娟. 新疆医科大学, 2014(04)