一、从腹泻患者粪便中检出O26出血性大肠杆菌（论文文献综述）
江婉琳[1]（2021）在《奶牛粪源大肠杆菌分型、毒力基因检测及耐药性分析》文中提出目的:本研究从奶牛肛拭子中进行大肠杆菌分离鉴定,研究其血清型、系统进化群、多位点序列分型、毒力基因的分布及耐药性,为奶牛粪源大肠杆菌潜在致病性和指导养殖场合理使用抗生素提供依据。方法:（1）采集新疆克拉玛依、阿克苏地区奶牛肛拭子进行大肠杆菌的分离培养,对分离株进行生化鉴定和16S r RNA PCR鉴定。（2）利用玻片凝集试验鉴定血清型;通过三重PCR方法,对chuA,yjaA和TspE4.C2基因进行检测,根据电泳图谱确定大肠杆菌的系统进化群;对7个管家基因（adk、fumC、gyrB、icdA、mdh、purA和recA）进行PCR扩增并测序,在线提交序列完成MLST分型,根据ST型之间有5个或5个以上管家基因序列号相同的归为一群,用goeBURST软件进行分离株ST型聚类分析。（3）通过PCR的方法对sfaS、crl和fliC等17个大肠杆菌毒力基因进行检测。（4）采用K-B法测定大肠杆菌分离株耐药性,对blaTEM、blaSHV、sul 1、sul 2、aac（3）-Ⅱ、cmlA、tetA、tetB、qnrB等针对β-内酰胺类、磺胺类、氨基糖苷类、氯霉素类、四环素类和喹诺酮类抗生素的24种耐药基因进行PCR检测。结果:（1）从阿克苏和克拉玛依牛场分别采集了101份和106份肛拭子。经过生化鉴定和16S r RNA PCR检测,获得克拉玛依大肠杆菌分离株55株,分离率为51.89%;阿克苏大肠杆菌分离株51株,分离率为50.50%。（2）血清型结果显示,克拉玛依大肠杆菌分离株55株有31株检测为致病性大肠杆菌血清型,24株未检测出血清型。阿克苏大肠杆菌分离株51株有32株检测为致病性大肠杆菌血清型,19株未检测出血清型。检出率最高的均为肠致病性大肠杆菌血清型（EPEC）,分别占23.64%（13/55）和33.33%（17/51）;均未检测到肠出血性大肠杆菌（EHEC）。克拉玛依和阿克苏大肠杆菌分离株优势血清型不同,分别为O142:K86（B）、O15:K?和O125:K70（B15）、O86:K61（B7）、O164:K?。系统进化群结果显示,106株大肠杆菌分离株分属4个群,69.81%（74/106）为B1群、17.92%（19/106）为A群、10.38%（11/106）为D群和1.89%（2/106）为B2群。克拉玛依和阿克苏大肠杆菌分离株大多数为B1群,分别占68.63%（35/51）和70.91%（39/55）。而B2群分离株仅来自阿克苏地区牛场。MLST分型表明,106株大肠杆菌分离株分属62种不同的ST型,其中30种ST型存在于现有数据库中,占48.39%;发现新ST型（STn）32种,编号分别为STn-1～32,占51.61%。优势ST型为ST-154,占12.26%（13/106）;克拉玛依大肠杆菌分离株ST型相对集中,而阿克苏大肠杆菌各分离株散在分布于各ST型。goeBURST分析显示,106株大肠杆菌分离株分成8个克隆群和20个单独型。（3）对hlyA、afa、eaeA、ipa H等17种毒力基因进行PCR检测,结果显示:fli C、ompA及crl的检出率分别为100%、99.06%及91.51%,远远高于其他毒力基因。本次试验未检出stx-1、iha、sfa、iuc D和afa这5种毒力基因。根据特异性致病变基因分布,存在四种致病变杂交模式EAEC/UPEC、EPEC/ETEC、EIEC/UPEC和UPEC/NMEC。（4）106株大肠杆菌分离株对青霉素耐药率达97%以上;对头孢噻吩耐药率为60%以上;多重耐药率为37.74%。24种耐药基因的检测结果显示:可检测出bla TEM、bla OXA、tetA、aac（3）-II、sul 1等11个基因;未检测出bla CTX-M、qnrA、oqxA、aac（3）-I等13个基因。表型和耐药基因的携带存在一定的一致性。结论:（1）本试验从奶牛粪源肛拭子样品中分离获得106株大肠杆菌分离株,分离率为51.21%。血清型、系统进化群及MLST分型显示分离株呈现明显的多样性,以O86:K61（B7）、B1群和ST154最为流行。（2）血清型和毒力基因检测结果提示牛粪源大肠杆菌存在致病风险。（3）大肠杆菌分离株对青霉素、头孢噻吩等表现出一定的耐药性,多重耐药占比为37.74%,存在耐药基因TEM、OXA、qnrS、aac（6’）-Ib-cr、tetA、tetB、sul 1、sul 2、sul 3、cmlA。（4）两个地区大肠杆菌分离株变异程度各不相同:从ST型,毒力基因检测或耐药基因分析推测克拉玛依分离株进化较为集中,而阿克苏分离株进化相对分散。
纪凯丽[2]（2020）在《7种血清型STEC多重荧光定量PCR检测方法的建立及其应用》文中进行了进一步梳理产志贺氏毒素大肠杆菌（Shigella toxin-producing Escherichia coli,STEC）是一类肠道病原体的总称,可引起全球范围内的零散感染或广泛爆发。牛是STEC最主要的宿主,STEC在其肠道内生存、繁殖,随粪便排出体外,污染食物、水源、土壤,经粪口途径传播,对人类有高致病性,可引起人类的胃肠道疾病如出血性肠炎、溶血性尿毒症,严重者还会导致死亡。O157血清型是STEC的主要致病血清型,但近年来,一些非O157血清型（如O26、O45、O103、O111、O121、O145）的流行也日益严重,在有的国家和地区甚至超过了 O157血清型。为快速、准确地检测奶牛粪便中O26、O45、O103、O111、O121、O145、O157等7种血清型的STEC,本文建立了一种富集增菌后进行多重荧光定量PCR的检测方法,可有效检出奶牛粪便中的这7种STEC,并在验证了该方法的可行性后,将此方法应用于江苏省部分地区奶牛场的粪便样品检测。1.7种血清型STEC多重荧光定量PCR检测方法的建立传统的分离培养、生化鉴定检测方法过程复杂,检测周期比较长,且容易造成漏检。本文采用Taqman探针法,建立一种多重荧光定量PCR检测方法,配合富集培养,可快速、准确地对样品进行检测。本研究将7种血清型的产志贺氏毒素大肠杆菌分为三组:①针对O157血清型,检测其高特异性O抗原基因rfbE与stx1、stx2、eae四个基因;②针对O103、O111、O121血清型,检测其wzxO103、wzxO111、wzxO121三个基因;③针对O26、O45、O145血清型,检测其wzxO26、wbqE+FO45、wzxO145三个基因。针对这三组目标血清型菌株的靶标基因,同时进行三个多重荧光定量PCR反应,即可完成对7种血清型菌株的检测。特异性试验结果显示,三组多重荧光定量PCR除阳性对照组出现目的基因扩增外,其余对照组均无扩增曲线;灵敏性试验结果显示,每个菌株的检测限浓度均达到101 CFU/mL;重复性试验结果显示,各靶基因在模板浓度相同情况下,Ct值差值小于1。以上结果证明该多重荧光定量PCR检测法的特异性好、灵敏度高和重复性好,该检测方法具有可行性。检测方法在实验室层面初步建立后,为进一步验证方法在生产上的可行性,从奶牛场采集100份奶牛粪便样品,于富集前、后分别用国际上广泛使用的多重经典PCR（cPCR）检测方法与本研究建立的多重荧光定量PCR（mqPCR）进行检测,结果显示:O26、O45、O103、O111、O121、O145、O157 等 7 种血清型,富集前 cPCR 检测法阳性率为2%、2%、3%、0%、1%、5%、1%;富集前mqPCR检测法阳性率为4%、5%、7%、1%、4%、17%、5%;富集后 cPCR 检测法阳性率为 5%、3%、6%、1%、4%、11%、2%;富集后 mqPCR 检测法阳性率为 8%、11%、10%、3%、7%、25%、7%。数据表明,多重荧光定量PCR检测前将样品进行富集培养,可有效提高样品检出率,较国际上广泛使用的多重经典PCR方法更加敏感准确。2.江苏省部分地区奶牛场粪便样品临床检测从江苏省部分地区的4个奶牛场分别采集100份奶牛粪便样品,共400份。将样品振荡培养增菌,取增菌后培养物制取DNA模板,采用本研究构建的富集增菌后多重荧光定量PCR进行检测。结果显示:O26、O45、O103、O111、O121、O145、O157等7种血清型,在A奶牛场样品中的阳性率为6%、11%、7%、0%、4%、14%、5%;在B奶牛场样品中的阳性率为9%、4%、11%、2%、8%、18%、6%;在C奶牛场样品中的阳性率为3%、5%、4%、0%、3%、27%、0%;在D奶牛场样品中的阳性率为2%、3%、2%、0%、1%、16%、0%。数据表明,4个奶牛场的优势血清型均为STEC O145,阳性率分别 14%、18%、27%、16%。综上所述,本文所建立的多重荧光定量PCR检测法灵敏度高、特异性好;江苏省不同牛场之间STEC流行情况不同。
吴巨飞,王海燕[3]（2020）在《一起外籍船舶船员感染性腹泻的病原学检测》文中研究表明目的对一起外籍船舶船员感染性腹泻疫情进行病原学检测。方法采集外籍船舶船员的粪便10份、肛拭子样本16份、血液9份、其他样品6份。依照《感染性腹泻诊断标准》（WS 271—2007）和《预防医学微生物学及检验技术》,通过细菌培养、核酸检测及毒力基因检测等方法来鉴定本起感染性腹泻疫情是否由O157∶H7引起。结果从腹泻患者的肛拭子和粪便中,检出2份肠出血性大肠杆菌EHEC-stx1基因核酸阳性,患者血清中检出志贺毒素EHECstx1,并且从肛拭子和粪便中培养出2株肠出血性大肠杆菌菌株。结论本次外籍船舶船员感染性腹泻是由肠出血性大肠杆菌引起,并排除本次感染性腹泻是由O157∶H7引起的疫情。
黄昭鸿[4]（2020）在《产志贺毒素大肠埃希氏菌标志性毒力基因stx快速检测与分型法的建立》文中研究表明产志贺毒素大肠埃希氏菌（Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC）作为食源性致病菌中的一种,其致病能力极强,被感染者容易形成出血性结肠炎或血性腹泻,严重者可进一步发展为溶血性尿毒综合征,危及生命。STEC广泛分布于生活环境中,在食品制作、加工、包装以及运输过程中极易感染此菌。建立一种快速、简便的产志贺毒素大肠埃希氏菌检测与分型方法有助于更好地开展食品安全的检测,进一步降低STEC的感染风险。本研究利用不对称聚合酶链式反应（Asymmetric Polymerase Chain Reaction,aPCR）结合免疫层析技术（Immu-nochromatographic Assay,ICA）,快速检测并准确分型产志贺毒素大肠埃希氏菌STEC标志性毒力基因stx,主要内容和结果如下:首先,建立快速检测STEC标志性毒力基因stx的方法。利用不对称PCR技术分别制备生物素标记的stx1和stx2目标基因单链DNA,该扩增产物与红色聚苯乙烯微球标记的stx1和stx2目的基因上游引物特异性结合,结合物上的生物素基团与免疫层析试纸条上的链霉亲和素特异性结合而显色,实现对STEC标志性毒力基因stx的检测。对检测条件进行优化,结果显示:stx1不对称PCR体系中stx1F:Biotin-stx1R最佳引物浓度比为1:7,stx2不对称PCR体系中stx2F:Biotin-stx2R则为1:4,不对称PCR最佳循环次数为55,最佳退火温度为55℃,stx1与stx2的最佳引物加入量均为3μL（Biotin-stx1R与Biotin-stx2R浓度均为2μM）,标记物聚苯乙烯微球最佳封闭剂为1%的BSA,最优加入量为20μL。利用所建立的方法能准确地检测出含有stx基因的STEC,且对不含stx基因的菌株显示阴性检测结果,具有良好的检测特异性。其次,建立快速分型stx1和stx2的方法。利用双重不对称PCR（Duplex aPCR）制备地高辛标记的stx1目标基因单链DNA与生物素标记的stx2目标基因单链DNA,该扩增产物与被红色聚苯乙烯微球标记的stx1和stx2目标基因上游引物特异性结合,结合物上的地高辛和生物素分别与试纸条上的抗地高辛抗体和链霉亲和素特异性结合并显色,根据不同检测线的显色情况,判断菌株所携带的不同类型的stx基因。对检测条件进行优化,结果显示:双重不对称PCR体系中stx1F:Digoxin-stx1R与stx2F:Biotin-stx2R引物浓度最佳比例皆为1:6,最佳循环次数为45,最佳退火温度为59℃,stx1与stx2的最佳引物加入量均为3μL（Digoxin-stx1R与Biotin-stx2R浓度均为2μM）,标记物聚苯乙烯微球的最佳封闭剂为Seablock,最适加入量为50μL。利用该方法对不同stx基因型的STEC菌株进行检测,结果显示该方法能够准确地分型检测stx1与stx2基因。最后,利用本实验建立的stx基因分型检测法对20株菌株进行stx基因的检测与分型,结果显示该方法可准确地检测出含有STEC标志性毒力基因stx的菌株并实现准确分型。该方法对于非产志贺毒素菌株呈现阴性检测结果。具有选择性高且快速、准确和安全的优点,结果判定便利、直观,可实现现场快速检测的目的,适合基层实验室使用。
张瑾瑜[5]（2018）在《新疆牛源STEC的分离鉴定、血清型与毒力基因检测及药物敏感性分析》文中研究说明目的:研究新疆部分地区牛源STEC在牛粪便、胴体、饲料和饮水中的存在情况,揭示其在牛场各个环节中的分布规律,以及其流行病学特点;方法:1、2015年9月至2017年1月期间,分别从新疆伊犁、博乐、五家渠、昌吉和乌鲁木齐等地的9个牛场、1个活畜交易市场和1个牛屠宰加工厂采集牛肛拭子、粪便、胴体拭子、饲料和饮水样本,经EC肉汤增菌后,用常规方法结合PCR（16S r RNA）技术进行大肠杆菌的分离鉴定,再用PCR检测大肠杆菌分离株的Stx1、Stx2基因。2、对分离得到的牛源STEC菌株,用多重PCR法检测“the Big Six”血清型的菌株的所占比例。3、对分离得到的牛源STEC菌株,用PCR检测eae A和Hly毒力基因,采用K-B纸片法对17种兽医临床常用的抗革兰氏阴性杆菌药物进行敏感性检测;结果:1、从9个牛场、1个活畜交易市场和1个屠宰加工厂中共采集到1453份样本,其中STEC阳性样本为217份（14.9%,217/1453）;新疆伊犁、博乐、石河子、昌吉、五家渠及乌鲁木齐的STEC样本阳性率分别为9.9%、19.9%、4.0%、26.2%、43.0%、7.5%;春季（3月-5月）、夏季（6月-8月）、秋季（9月-11月）和冬季（12月～次年2月）的STEC样本阳性率分别为27.3%（147/538）、0.8%（2/247）、13.0%（49/376）和6.5%（19/292）;肛拭子、胴体拭子、粪便、饲料和饮水样本STEC阳性率分别为19.4%（190/978）、8.3%（4/48）、6.7%（16/239）、1.1%（1/94）和6.4%（6/94）;共分离到468株STEC菌株,其中132株携带Stx1,122株携带Stx2,214株同时携带Stx1和Stx2。2、400株牛源STEC中O26、O45、O103、O111、O121、O145和O157血清型的菌株的检出率分别为2.5%、0%、0%、1.0%、0%、1.0%和0.75%。3、7株分离自腹泻犊牛的STEC菌株中eae A基因的携带率为14.3%（1/7）,Hly基因携带率为100%;7株分离自腹泻犊牛的STEC菌株对麦迪霉素耐药性最高,耐药率达到了100%,而对头孢噻肟、头孢噻吩、头孢哌酮、头孢唑啉、头孢曲松、头孢他啶、头孢呋辛、头孢吡肟、头孢西叮、氨曲南、妥布霉素、氨苄西林、氧氟沙星、链霉素敏感性最高,均达到100%,其次是卡那霉素达到85.7%;结论:牛源STEC普遍存在于所检测的牛场、活畜交易市场和屠宰加工厂,肛拭子样本阳性率最高,而牛胴体被污染的情况较严重,春季是STEC的排菌高峰期;分离到的牛源STEC菌株同时携带Stx1和Stx2的菌株最多;在制定防控牛源STEC的措施时,要尽量避免牛粪便对胴体的污染,春季更要注意牛粪便的无害化处理。目前新疆部分地区存在国际较为流行的non-O157血清型的菌株,但检出率不高,O157血清型菌株亦是如此。分离自腹泻犊牛的7株目标菌均携带Hly毒力基因,推测其对人类有较强的潜在致病性,7株菌对兽医临床常用抗生素有耐药情况存在,但总体耐药水平不高。
莫云[6]（2018）在《中国南方6个城市鼠形动物粪便中致泻性大肠埃希菌的检出率及病原学特征》文中研究说明1研究背景和目的致泻性大肠埃希菌（Diarrheagenic Escher1 chia coli,DEC）是引起胃肠道感染的一类大肠埃希菌（Escherichia coli,E.coli）的统称,是导致医院感染和社区感染的重要致病菌之一。鼠与人类生活关系密切,有证据表明鼠携带多种人兽共患病病原体,包括DEC。因此,有必要了解我国鼠类DEC的携带情况及其病原学特征。我们于2014年10月至2017年5月期间,用笼捕法在我国广东省广州市、深圳市和茂名市,福建省厦门市、湖南省益阳市和云南省麻栗坡县等六城市部分城区进行鼠形动物采集,并对其粪便样本携带DEC情况进行了调查,了解了这些地区鼠形动物中DEC的携带情况、毒力基因分布及耐药特征,采用PFGE聚类分型分析了鼠形动物中DEC的同源关系,为鼠源性DEC感染传播的防控提供基础信息。2研究方法2.1在监测地通过笼捕法捕获鼠形动物,收集动物粪便样本,通过分离培养及生化鉴定等方式初筛E.coli;2.2对分离所得E.coli进行多重PCR试验检测特异毒力基因,确认DEC并分型;2.3用K-B纸片法进行药敏试验,获得DEC耐药率及耐药模式情况;2.4用PFGE法进行基因分型,比较条带聚类情况,分析不同地区不同种属鼠形动物中DEC的同源关系。3研究结果3.1共捕获鼠形动物6种共1122只,其中褐家鼠为优势鼠种,占60.70%,其次是臭鼩鼱,占25.85%。3.2从部分鼠形动物肠内粪便样本中共分离得到了 839株E.coli。检测到186株DEC,检出率为22.17%。其中包括10株肠致病性大肠埃希菌（Enteropathogenic E.coli,EPEC）、3 株肠聚集性大肠埃希菌（Enteroaggregative E.coli,EAEC）和173株肠产毒性大肠埃希菌（Enterotoxigenic E.coli,ETEC）,检出率分别为 1.19%、0.36%、20.62%,分别占DEC总数的5.38%、1.61%及93.01%,未检测到EHEC菌。EPEC及EAEC仅在褐家鼠及臭鼩鼱中检出,ETEC几乎在各类鼠形动物（板齿鼠除外）样本中均有检出。除广东深圳外,其余地区收集的鼠形动物样本均有DEC检出。DEC在冬季捕获的鼠形动物中检出率最高,为27.23%。3.3 57株（30.64%）DEC对1种以上药物表现出耐药反应,菌株对四环素的耐药率最高（26.345）,其次是氯霉素（13.44%）,对头孢类药物、氟喹诺酮类药物及呋喃妥因的耐药率均低于5%,而对哌拉西林-他唑巴坦、美罗培南及阿米卡星均敏感。多重耐药株占4.30%。产ESBLs耐药株占3.76%。3.4根据PFGE聚类结果,91株DEC共分87种带型,相似度为58.0%-100%。按≥90%相似度标准可聚为11簇（共26株）,按≥95%相似度标准可聚为7簇（共16株）,按100%相似度标准可聚为2簇（共6株）。不同地区、不同种类鼠形动物中携带的DEC可以存在同源关系。4研究结论鼠形动物中携带DEC的型别以ETEC、EPEC、EAEC为主。鼠形动物分离的DEC的耐药率较低,主要对四环素、氯霉素表现出耐药反应,包括少数多重耐药及产ESBLs耐药的菌株。不同地区、不同种类鼠形动物中携带的DEC存在同源关系,提示DEC在鼠形动物中相互传播的可能性。
丁浩[7]（2017）在《新疆部分地区牛源E.coli O157:H7的分离鉴定、毒力基因检测及药物敏感性试验》文中认为研究新疆部分地区健康牛群中E.coli O157:H7的分布情况,及分离菌株携带毒力基因的特点和对临床常用抗菌药的敏感性情况,并验证生产实践中免疫磁珠富集法对于牛源E.coli O157:H7分离结果的影响。1、从新疆伊犁、博乐、五家渠、昌吉和乌鲁木齐等地的10个牛场随机采集健康牛的肛拭子样本883份和胴体表面拭子48份,经EC肉汤增菌后,用免疫磁珠法富集,再用SMAC平板和MUG液体培养基进行筛选,最后用PCR和生化试验进行鉴定。2、对分离得到的牛源E.coli O157:H7菌株,用PCR法检测Stx1、Stx2、eaeA、Hly和Tccp等毒力基因,分析分离株毒力基因携带特点。3、对分离得到的牛源E.coli O157:H7菌株,采用K-B纸片法对17种兽医临床常用的抗革兰氏阴性杆菌药物进行敏感性检测。4、对从新疆伊犁、昌吉和五家渠采集的243份牛场源肛拭子、粪便、饲草料、饮水和胴体拭子样本,采用免疫磁珠法富集后和直接涂布SMAC平板的方法进行初步筛选,再进行后续E.coli O157:H7的分离鉴定,采用Fisher exact test statistic和McNemar’s Test进行统计学分析,评价生产实践中免疫磁珠富集法在牛源E.coli O157:H7分离过程中的作用。结果显示:1、从931份样本中共分离得到16株E.coli O157:H7,检出率1.72%,其中伊犁地区11株、乌鲁木齐5株,检出率分别为3.93%、1.48%,博乐、昌吉和五家渠的样本中均未检出;从883份肛拭子和48份胴体拭子样本中分别检出14株、2株E.coli O157:H7,检出率分别为1.59%、4.17%。2、16株牛源E.coli O157:H7分离株志贺毒素基因的携带率为81.3%,其中stx1、stx2及stx1和stx2携带率分别为12.5%、25.0%和43.7%。eaeA、Hly、Tccp基因携带率分别为100%、87.5%、75.0%。3、16株E.coli O157:H7分离株对妥布霉素敏感性最高,达到100%,其次是头孢西丁、头孢吡肟、氧氟沙星、氨曲南、头孢他啶达到93.8%;而对麦迪霉素耐药性最高,耐药率达到了100%;4、免疫磁珠法从243份样品中分离到8株E.coli O157:H7,而普通方法只检出了其中的4株,虽然统计学差异不显着（P≧0.05）,但在本试验中免疫磁珠法确实提高了E.coli O157:H7检出数。由以上结果可以得出结论:E.coli O157:H7存在于新疆部分地区健康牛群中,但分离率不高;牛胴体拭子中检出了E.coli O157:H7,且多数分离株同时携带多种毒力基因,推测其对人类有较强的潜在致病性;分离的16株菌对兽医临床常用抗生素有耐药情况存在,但总体耐药水平不高;虽然本实验中,免疫磁珠法和常规法相比差异不显着,但却明显增加了分离菌的数量,故依然推荐在开展E.coli O157:H7的病原检测时使用免疫磁珠富集法。
张新,严寒秋,曲梅,吕冰,黄瑛,陈丽娟[8]（2017）在《肠出血性大肠杆菌O26∶H11鞭毛抗原的诱导及鉴定研究》文中进行了进一步梳理目的对肠出血性大肠杆菌（EHEC）O26∶H11鞭毛抗原诱导及鉴定进行研究,为日常检测提供可借鉴的方法。方法对疑似EHEC O26∶H11菌株进行生化鉴定和血清分型,比较37℃及28℃2种温度Swarm琼脂诱导鞭毛抗原的效果,并采用荧光定量PCR检测8种致泻性大肠杆菌毒力基因eae、stx1、stx2、lt、st、bfp A、aggR和ipa H。结果 28℃诱导鞭毛抗原H11血清凝集为阳性,37℃诱导鞭毛抗原血清凝集为阴性;毒力基因检测结果显示stx1和eae基因阳性,其余均为阴性;菌株鉴定为EHEC O26∶H11。结论 28℃Swarm琼脂可诱导鞭毛H11,肠出血性大肠杆菌O26∶H11鉴定时应检测相关毒力基因。
韦小瑜,游旅,田克诚,唐光鹏,王定明[9]（2015）在《贵州省首次从腹泻病例中检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7》文中研究指明目的从贵州省1例腹泻病例的粪便标本中分离鉴定O157肠出血性大肠杆菌并对其进行毒力基因检测。方法收集腹泻病例的粪便标本,mEC肉汤增菌后,采用O157胶体金进行初筛,阳性者增菌液经免疫磁珠富集后进行肠出血性大肠杆菌的分离,对分离株进行系统生化鉴定,O157、H7诊断血清凝集,应用特异性PCR进行rfbE和fliC基因鉴定,以及stx1、stx2、eaeA和hlyA 4种毒力基因检测。结果腹泻病例粪便标本经mEC肉汤增菌后,检测O157胶体金阳性;增菌液经免疫磁珠富集后培养出可疑菌落,经系统生化鉴定为大肠杆菌,血清型为O157∶H7;PCR检测O抗原特异性rfbE基因和H7特异性fliC基因均阳性;毒力基因eaeA、stx2和hly均阳性,stx1阴性。结论分离株确诊为肠出血性大肠杆菌O157∶H7,为贵州省腹泻病例中首株该病原体。
王意银[10]（2012）在《昆明地区部队驻地细菌性腹泻病原监测》文中研究指明细菌性腹泻（bacterial diarrhea）是指除霍乱、痢疾、伤寒、副伤寒病原以外的各种细菌所引起的，以腹泻为主要表现的一组常见肠道传染病，是感染性腹泻（infectiousdiarrhea）的主要组成部分。感染性腹泻主要高发于婴幼儿，高发期为每年的6～8月份和10～12月份，其中细菌性腹泻以夏季为主。2011年全国法定报告传染病中，感染性腹泻病例发病836591例，与2010年同期相比上升11.55%。感染性腹泻发病率的显着增加，是造成部队非战斗减员的重要原因之一，并可影响部队各项战勤任务的完成。同时感染性腹泻也是我军官兵平、战时期的常见病和多发病。为探讨我区部队感染性腹泻的流行病学特征、病原构成及特点等问题,我们于2009年6月至2011年5月在昆明地区部队驻地开展了细菌性腹泻病原监测，主要从病原分离，病原鉴定及分型和流行病学特征分析等方面开展研究，以期为我区部队肠道传染病制定有针对性的防控、诊断及治疗提供参考依据。本实验于2009年6月至2011年5月在昆明地区部队驻地共调查腹泻病例1352例，通过驻地各哨点医院检验科对本院送检，且符合腹泻病例定义病人的粪便标本进行定期收集，填写病人信息个案登记表，并按《腹泻症候群监测技术方案》（2009）及相关技术方案对标本进行腹泻病原菌分离，对所分离到的病原菌进行形态、生化及血清学鉴定，并对昆明地区部队驻地的细菌性腹泻病原学资料进行统计分析。从1352例腹泻腹泻病例中共检出各种肠道病原菌530株，检出率为39.2%。其中弗劳地枸橼酸杆菌检出率居首位（6.14%）、肺炎克雷伯菌次之（5.62%）、居第三位的是变形杆菌（4.66%），志贺菌55株（4.07%），EIEC25株（1.85%）。与1985年、2001年李刚山等在该地区所做感染性腹泻病原学监测进行比较分析，发现引起腹泻的部分主要菌型发生了改变，如：1985年、2001年志贺菌感染的主要菌型以福氏2a血清型为主，侵袭性大肠杆菌感染的主要血清型是EIEC O152：K？。而本次监测显示，2009年6月至2011年5月在昆明地区部队驻地志贺菌和侵袭性大肠杆菌感染的血清型则分别以福氏1b和EIECO28:K73及EIEC O124:K72为主。监测显示，昆明地区部队驻地的细菌性腹泻虽总体呈全年散发趋势，但仍表现一定季节性、周期性变化，通过成组卡方检验，各月份病原菌检出率差异显着（P<0.02）。不同年龄组检出率在35.51～42.79%之间，26岁～45岁年龄段检出率较高，其中36～45岁年龄组检出率最高（42.79%），但各年龄组病原菌检出率无显着性差异（P﹥0.05）。昆明地区部队驻地的细菌性腹泻男女性别间检出率无显着性差异（P﹥0.05）。通过对昆明地区部队驻地腹泻病原监测，查清了主要细菌性腹泻病原菌的构成，建立了病原谱，掌握了昆明地区部队驻地细菌性腹泻的流行病学特征，为进一步探讨肠道传染病的诊断、防控及流行病学研究提供重要依据。
二、从腹泻患者粪便中检出O26出血性大肠杆菌（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、从腹泻患者粪便中检出O26出血性大肠杆菌（论文提纲范文）
（1）奶牛粪源大肠杆菌分型、毒力基因检测及耐药性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1 研究目的及意义 |
| 2 国内外研究进展 |
| 2.1 大肠杆菌的生物特性 |
| 2.1.1 大肠杆菌的特征 |
| 2.2 大肠杆菌的流行病学特点 |
| 2.3 大肠杆菌分型 |
| 2.3.1 大肠杆菌的血清分型 |
| 2.3.2 大肠杆菌的系统进化群 |
| 2.3.3 大肠杆菌的多位点序列分型(MLST) |
| 2.4 大肠杆菌致病性及毒力基因研究进展 |
| 2.5 大肠杆菌耐药性及耐药机制 |
| 2.5.1 大肠杆菌耐药性 |
| 2.5.2 大肠杆菌耐药机理 |
| 2.5.3 大肠杆菌耐药现状 |
| 3 研究内容 |
| 3.1 奶牛粪源大肠杆菌的分离鉴定 |
| 3.2 奶牛粪源大肠杆菌分型 |
| 3.2.1 血清型 |
| 3.2.2 系统进化群 |
| 3.2.3 多位点序列分型(MLST) |
| 3.3 奶牛粪源大肠杆菌毒力基因检测 |
| 3.4 奶牛粪源大肠杆菌耐药性分析 |
| 4 技术路线 |
| 第二章 试验研究 |
| 试验一 奶牛粪源大肠杆菌分离鉴定 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 菌株来源 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 样品的采集及处理 |
| 1.2.2 大肠杆菌的分离 |
| 1.2.3 大肠杆菌的鉴定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 奶牛粪源大肠杆菌的生化鉴定 |
| 2.2 奶牛粪源大肠杆菌的PCR鉴定 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 试验二 奶牛粪源大肠杆菌分型 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 菌株 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 致病性大肠杆菌血清型检测 |
| 1.2.2 系统进化群 |
| 1.2.3 多位点序列分型(MLST) |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 大肠杆菌分离株血清分型 |
| 2.2 大肠杆菌分离株系统进化群 |
| 2.3 大肠杆菌分离株MLST |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 试验三 奶牛粪源大肠杆菌毒力基因检测 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 试验菌株 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 毒力基因检测 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 试验四 奶牛粪源大肠杆菌耐药性分析 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 试验菌株 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 药敏试验及多重耐药分析 |
| 1.2.2 引物的设计与合成 |
| 1.2.3 耐药基因PCR反应体系及扩增程序 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 药敏试验及多重耐药分析 |
| 2.1.1 药敏试验 |
| 2.1.2 多重耐药分析 |
| 2.2 耐药基因的检测 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 结论 |
| 第四章 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 附件 |
（2）7种血清型STEC多重荧光定量PCR检测方法的建立及其应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 产志贺氏毒素大肠杆菌研究进展 |
| 引言 |
| 1. STEC的流行特性 |
| 1.1 STEC病原学 |
| 1.2 STEC流行病学 |
| 2. STEC毒力基因 |
| 2.1 LEE毒力岛和eae基因 |
| 2.2 志贺氏毒素(Stx) |
| 2.3 hly |
| 3. STEC检测方法研究进展 |
| 3.1 传统检测法 |
| 3.2 免疫磁珠富集法 |
| 3.3 免疫学检测法 |
| 3.4 分子生物学检测法 |
| 4. 本研究的目的与意义 |
| 第二章 7种血清型STEC多重荧光定量PCR检测方法的建立 |
| 1. 材料 |
| 1.1 菌株 |
| 1.2 主要培养基与试剂 |
| 1.3 主要仪器、探针和引物 |
| 2. 方法 |
| 2.1 模板制备 |
| 2.2 PCR扩增体系 |
| 2.3 7种STEC菌株血清型验证 |
| 2.4 灵敏度检测 |
| 2.5 特异性检测 |
| 2.6 重复性检测 |
| 2.7 方法验证 |
| 3. 结果 |
| 3.1 菌株血清型验证结果 |
| 3.2 多重cPCR结果 |
| 3.3 单重qPCR结果 |
| 3.4 多重mqPCR结果 |
| 3.5 多重mqPCR特异性分析结果 |
| 3.6 多重mqPCR灵敏性分析结果 |
| 3.7 多重mqPCR重复性分析结果 |
| 3.8 方法验证结果 |
| 4. 讨论 |
| 第三章 江苏省部分地区奶牛场粪便样品中7种血清型STEC菌株的检测 |
| 1. 材料 |
| 1.1 样品采集 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2. 方法 |
| 2.1 DNA模板制备 |
| 2.2 多重荧光定量PCR检测 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 全文总结 |
| 后续研究计划 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间参与发表的学术论文 |
| 致谢 |
（3）一起外籍船舶船员感染性腹泻的病原学检测（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 仪器与试剂 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 细菌培养 |
| 1.3.2 样品核酸检测及毒力基因检测 |
| 1.3.3 血清学检测 |
| 1.3.4 O157∶H7的鉴别诊断 |
| 2 结果 |
| 2.1 细菌学鉴定 |
| 2.2 血清学检测结果 |
| 2.3 核酸检测及O157:H7的鉴别诊断结果 |
| 3 讨论 |
（4）产志贺毒素大肠埃希氏菌标志性毒力基因stx快速检测与分型法的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语 |
| 1 绪论 |
| 1.1 产志贺毒素大肠埃希氏菌简介 |
| 1.1.1 产志贺毒素大肠埃希氏菌不同的血清型及其危害 |
| 1.1.2 产志贺毒素大肠埃希氏菌宿主 |
| 1.1.3 产志贺毒素大肠埃希氏菌传播途径 |
| 1.2 产志贺毒素大肠埃希氏菌致病机制 |
| 1.2.1 志贺毒素 |
| 1.2.2 LEE毒力岛 |
| 1.2.3 pO157大质粒 |
| 1.3 产志贺毒素大肠埃希氏菌检测方法 |
| 1.3.1 平板培养法 |
| 1.3.2 免疫学检测法 |
| 1.3.3 分子生物学法 |
| 1.3.4 产志贺毒素大肠埃希氏菌检测方法比较 |
| 1.4 不对称PCR技术简介与应用 |
| 1.5 研究目的和意义 |
| 2 不对称PCR结合免疫层析法快速检测产志贺毒素大肠埃希氏菌stx基因 |
| 2.1 实验材料与试剂 |
| 2.1.1 菌株 |
| 2.1.2 培养基 |
| 2.1.3 主要药品和试剂 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.1.5 试剂及其配制 |
| 2.1.6 实验设计的引物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 产志贺毒素大肠埃希氏菌的培养 |
| 2.2.2 产志贺毒素大肠埃希氏菌基因组提取 |
| 2.2.3 免疫层析试纸条的制备 |
| 2.2.4 聚苯乙烯微球的活化与标记 |
| 2.2.5 不对称PCR体系的建立 |
| 2.2.6 免疫层析实验 |
| 2.2.7 免疫层析试纸条检测stx基因 |
| 2.2.8 特异性实验 |
| 2.2.9 数据处理 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 不对称PCR上、下游引物添加比例的优化 |
| 2.3.2 不对称PCR循环次数的优化 |
| 2.3.3 不对称PCR退火温度的优化 |
| 2.3.4 不对称PCR引物加入量的优化 |
| 2.3.5 不同封闭剂对检测结果的影响 |
| 2.3.6 BSA的添加量对检测结果的影响 |
| 2.3.7 免疫层析试纸条检测stx基因 |
| 2.3.8 特异性实验 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 双重不对称PCR结合免疫层析法快速分型产志贺毒素大肠埃希氏菌stx基因 |
| 3.1 实验材料与试剂 |
| 3.1.1 菌株 |
| 3.1.2 培养基 |
| 3.1.3 主要药品和试剂 |
| 3.1.4 实验仪器 |
| 3.1.5 试剂及其配制 |
| 3.1.6 实验设计的引物 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 产志贺毒素大肠埃希氏菌的培养 |
| 3.2.2 产志贺毒素大肠埃希氏菌基因组提取 |
| 3.2.3 免疫层析试纸条的制备 |
| 3.2.4 聚苯乙烯微球的标记 |
| 3.2.5 双重不对称PCR体系的建立 |
| 3.2.6 免疫层析实验 |
| 3.2.7 免疫层析试纸条分型stx基因 |
| 3.2.8 特异性实验 |
| 3.2.9 数据处理 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 双重不对称PCR上、下游引物添加比例的优化 |
| 3.3.2 双重不对称PCR循环次数的优化 |
| 3.3.3 双重不对称PCR退火温度的优化 |
| 3.3.4 双重不对称PCR引物加入量的优化 |
| 3.3.5 不同封闭剂对分型结果的影响 |
| 3.3.6 Seablock的添加量对分型结果的影响 |
| 3.3.7 聚苯乙烯微球标记方式对分型结果的影响 |
| 3.3.8 聚苯乙烯微球上样量对分型结果的影响 |
| 3.3.9 免疫层析试纸条分型stx基因 |
| 3.3.10 特异性实验 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 结论与展望 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在读期间公开发表论文(着)及科研情况 |
| 已发表的论文 |
| 参与的科研项目 |
（5）新疆牛源STEC的分离鉴定、血清型与毒力基因检测及药物敏感性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 STEC的病原学 |
| 1.2 STEC的流行病学 |
| 1.3 STEC的宿主与传播途径 |
| 1.4 STEC的分布规律研究现状 |
| 1.5 STEC的毒力基因及致病机制 |
| 1.6 STEC的耐药现状 |
| 1.7 研究的目的和意义 |
| 第2章 新疆部分地区牛源STEC分离鉴定 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 新疆部分地区牛源STEC分离株血清型的多重PCR鉴定 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 腹泻犊牛STEC分离株毒力基因检测及药物敏感性试验 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 谢辞 |
| 作者简介 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（6）中国南方6个城市鼠形动物粪便中致泻性大肠埃希菌的检出率及病原学特征（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1 城市鼠形动物及其病原携带情况 |
| 2 致泻性大肠埃希菌 |
| 3 研究设想 |
| 第二章 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 第三章 结果 |
| 1 鼠形动物采样情况 |
| 2 大肠埃希菌分离情况 |
| 3 致泻性大肠埃希菌检测及毒力基因分布情况 |
| 4 致泻性大肠埃希菌药敏试验结果分析 |
| 5 致泻性大肠埃希菌PFGE同源性分析 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 结论 |
| 1 全文小结 |
| 2 本研究的创新点 |
| 3 本研究的不足及补充计划 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间成果 |
| 附录 |
| 致谢 |
（7）新疆部分地区牛源E.coli O157:H7的分离鉴定、毒力基因检测及药物敏感性试验（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩写词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 E.coli O157:H7的概况 |
| 1.2 E.coli O157:H7毒力基因及致病机制 |
| 1.3 E.coli O157:H7耐药现状 |
| 1.4 E.coli O157:H7的检测技术 |
| 1.5 研究目的和意义 |
| 第2章 新疆部分地区牛源E.coli O157:H7分离鉴定 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 牛源E.coli O157:H7分离株毒力基因携带特点分析 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 牛源E.coli O157:H7分离株药物敏感性试验 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 免疫磁珠富集法对牛源E.coli O157:H7分离鉴定的影响 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 谢辞 |
| 作者简介 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（8）肠出血性大肠杆菌O26∶H11鞭毛抗原的诱导及鉴定研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 仪器与试剂 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 样品的分离培养及生化染色鉴定 |
| 1.3.2 血清学分型及鞭毛抗原的诱导 |
| 1.3.2. 1 抗原O和抗原H分型 |
| 1.3.2. 2 鞭毛抗原H诱导 |
| 1.3.3 荧光定量PCR方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 菌落形态及生化染色鉴定结果 |
| 2.2 诊断血清分型结果 |
| 2.2.1 抗原O和抗原H分型结果 |
| 2.2.2 鞭毛抗原H诱导结果 |
| 2.3 荧光定量PCR结果 |
| 3 讨论 |
（9）贵州省首次从腹泻病例中检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 2 结 果 |
| 3 讨 论 |
（10）昆明地区部队驻地细菌性腹泻病原监测（论文提纲范文）
| 中英文对照一览表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 前言 |
| 技术路线 |
| 材料方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 文献综述 细菌性腹泻研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表的论文 |
| 附件一 |
| 附件二 |
四、从腹泻患者粪便中检出O26出血性大肠杆菌（论文参考文献）
- [1]奶牛粪源大肠杆菌分型、毒力基因检测及耐药性分析[D]. 江婉琳. 石河子大学, 2021(02)
- [2]7种血清型STEC多重荧光定量PCR检测方法的建立及其应用[D]. 纪凯丽. 扬州大学, 2020(01)
- [3]一起外籍船舶船员感染性腹泻的病原学检测[J]. 吴巨飞,王海燕. 中国卫生检验杂志, 2020(16)
- [4]产志贺毒素大肠埃希氏菌标志性毒力基因stx快速检测与分型法的建立[D]. 黄昭鸿. 江西师范大学, 2020(12)
- [5]新疆牛源STEC的分离鉴定、血清型与毒力基因检测及药物敏感性分析[D]. 张瑾瑜. 新疆农业大学, 2018(05)
- [6]中国南方6个城市鼠形动物粪便中致泻性大肠埃希菌的检出率及病原学特征[D]. 莫云. 南方医科大学, 2018(05)
- [7]新疆部分地区牛源E.coli O157:H7的分离鉴定、毒力基因检测及药物敏感性试验[D]. 丁浩. 新疆农业大学, 2017(02)
- [8]肠出血性大肠杆菌O26∶H11鞭毛抗原的诱导及鉴定研究[J]. 张新,严寒秋,曲梅,吕冰,黄瑛,陈丽娟. 中国卫生检验杂志, 2017(01)
- [9]贵州省首次从腹泻病例中检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7[J]. 韦小瑜,游旅,田克诚,唐光鹏,王定明. 中国人兽共患病学报, 2015(02)
- [10]昆明地区部队驻地细菌性腹泻病原监测[D]. 王意银. 第三军医大学, 2012(01)