![[AG] 复合基因组的合成及与 [A,D,G] 的三物种杂种的合成](https://www.bceaa.cn/thumb/bd15ec4754abf4fb335924f4.webp)
一、Synthesis of [AG] Complex Genome and the Tri-species Hybrid with[A,D,G]（论文文献综述）
李瑞英[1]（2019）在《基于G-Triplex/Hemin DNAzyme的比色法灵敏检测核酸》文中研究说明G-三联体（G-triplex,G3）是由富含鸟嘌呤（G）的DNA序列形成的一种特殊的核酸二级结构,它是由3个“-GGG-”单元通过氢键形成一个G-三分体（G-triad）,再由两个或多个G-triad通过堆积作用形成的。hemin自身具有较低的催化活性,而G-triplex与hemin结合后可以大大提高hemin的催化活性。到目前为止,G-triplex/hemin DNAzyme作为一种新型的过氧化物模拟酶,在生物传感体系中的应用还相对较少,与信号放大策略的联用更是非常有限。本论文以G-triplex/hemin DNAzyme作为信号探针,结合等温循环级联信号放大技术和滚环扩增技术,建立了简单灵敏检测核酸的生物传感新方法。具体研究内容如下:一、基于等温循环级联信号放大的G-triplex/hemin DNAzyme比色法检测HIV-DNA本研究将G3/hemin DNAzyme作为信号探针,结合等温指数扩增（EXPAR）技术,建立了一种简单灵敏检测人类免疫缺陷病毒DNA（HIV-DNA）的比色新方法。在该方法中,目标HIV-DNA与模板杂交引发EXPAR反应,生成大量富G短链,在K+诱导下,富G短链形成G3结构,G3与hemin自组装形成具有过氧化物酶活性的G3/hemin DNAzyme。G3/hemin DNAzyme催化H2O2氧化2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）,使体系产生颜色变化,通过测定420 nm的吸光度变化来检测不同浓度的HIV-DNA。该方法的检出限为4.7 fM。此外,我们也以G-quadruplex/hemin DNAzyme（G-quadruplex,即G-四联体或G4,由富含4个“-GGG-”单元的核酸序列折叠形成）作为信号探针,结合EXPAR技术检测了目标DNA。实验结果表明:G3-EXPAR体系的检出限比G4-EXPAR的检出限低10倍。可见,G3/hemin DNAzyme是EXPAR生物传感平台一种优良的信号探针。本工作为构建灵敏的信号放大策略提供了新思路,进一步扩展了G3在生物传感平台中的应用。二、基于滚环扩增信号放大的G-triplex/hemin DNAzyme比色法检测miRNAG4/hemin DNAzyme是滚环扩增（RCA）常用的信号探针,当两个G4直接相连时,G4二聚体与hemin形成的G4/hemin DNAzyme催化活性会受到影响。而我们发现G3三聚体（三个G3直接相连）与hemin形成的G3/hemin DNAzyme催化活性不会受到影响。因此,本研究将RCA技术与G3/hemin DNAzyme相结合,构建了一种简单灵敏检测miRNA的比色新方法。该方法中,把锁式探针设计为含有G3三聚体的互补序列,通过滚环扩增反应,产生大量G3三聚体的重复串联单元,在K+诱导下,G3三聚体与hemin自组装形成G3/hemin DNAzyme,催化ABTS-H2O2体系产生颜色变化,通过比色信号的响应达到灵敏检测miRNA的目的。该方法的检出限为37.1 fM,其检出限比G4/hemin DNAzyme（两个G4直接相连的G4二聚体与hemin自组装形成）为信号探针的检出限低15.6倍。该方法为提高检测目标的灵敏度和构建新型的G3三聚体传感探针提供了新思路。三、以原位合成的铜纳米簇为荧光探针的免疫分析新方法的研究碱性磷酸酶（ALP）能够催化水解L-抗坏血酸-2-磷酸三钠产生抗坏血酸,在DNA模板存在的情况下,抗坏血酸可以还原Cu-2+原位产生具有荧光的铜纳米簇（CuNCs）。CuNCs的荧光强度随ALP活性增大逐渐增强,检出限为0.006 U/L。而ALP是酶联免疫分析法（ELISA）中常用的标记酶,基于此,构建了一种检测模型抗原人免疫球蛋白G（IgG）的荧光免疫策略。该方法在0.05-12 ng/mL范围内与CuNCs的荧光强度有良好的线性关系,检出限为7 pg/mL,远低于很多之前报道的ELISA方法的检出限。该方法简单快速,成本低廉,灵敏度高,对于拓展商用ALP标记ELISA具有广阔的应用潜能。
朱斌[2]（2016）在《天然异源四倍体甘蓝型油菜中亚基因组的分离及互作》文中提出由种间杂交进化产生异源多倍体是自然界物种形成的一条重要途径,其适应性要显着优于其二倍体祖先种。长期以来,揭示异源多倍体中祖先种基因组的起源及结构变化一直是众多研究者所关注的问题。从一个拥有较长进化史的天然异源多倍体中抽离出其亚基因组并使祖先种得以出现,为研究异源多倍体的基因组进化及互作提供了独特的机会。异源四倍体甘蓝型油菜（Brassica napus L.,AACC）是异源多倍体多倍化进程研究的模式植物。本研究中,通过远缘杂交诱导甘蓝型油菜中C亚基因组染色体的优先消除,抽离出了整个A亚基因组,进而重建了祖先种白菜型油菜（restituted B.rapa L.,RBR）。同时,以本实验室先前获得的一个RBR Oro做父本,与亲本甘蓝型油菜“Oro”进行杂交及连续回交,将C亚基因组的单条染色体附加到剥离的A亚基因组上,在同一背景下对C亚基因组进行解析。最终,通过C基因组染色体特异基因引物的PCR扩增及FISH方法鉴定出了全套的单体异附加系（MAALs）。RBR及MAALs的获得为甘蓝型油菜的基因组进化及基因组互作研究提供了新的思路及材料。本研究的主要结果如下:1.远缘杂交诱导RBR ZS11的建立以国内进行测序的甘蓝型油菜品种“中双11”与海甘蓝（Crambe abyssinica）进行大量的属间杂交,获得了4株染色体数为2n=29的F1杂种。C基因组的特异BAC为探针的FISH及染色体特异基因引物的PCR扩增证实了这些F1杂种（2n=29）中消除了一个完整的C亚基因组,而保留了全部的A亚基因组染色体,同时经海甘蓝基因组为探针的GISH分析,未检测到海甘蓝的染色体片段。随后在F1杂种与海甘蓝的回交后代中筛选到染色体数目为2n=22的单株,该单株经人工辅助自交后获得了染色体为2n=20的植株。这些植株的染色体配对方式与天然白菜的10个二价体及减数分裂后期I染色体以10:10分离一致,且经FISH检测并未发现C基因组染色体及片段,证实了这些材料为“中双11”的剥离白菜（RBR ZS11）。与天然白菜相比,RBR ZS11表现出一些特有的形态特征,例如生活力弱、易感病、叶片有毛,花型较小且花瓣皱缩,自交结实不正常,特别是冬天叶片贴地生长等。随机选取57对AFLP引物对4个F1植株、RBR ZS11及双亲进行遗传分析,各世代植株中均检测到一定数目的相对于甘蓝型油菜的缺失带、新增带及少量的海甘蓝特异带。以随机选取的32对AFLP引物对RBR ZS11及其它17份材料进行聚类分析,结果显示RBR ZS11与白菜型油菜“白油一号”聚为一类。2.甘蓝型油菜C亚基因组的解析为解析天然甘蓝型油菜的C亚基因组,以实验室先前获得的剥离白菜RBR Oro为父本,与供体甘蓝型油菜“Oro”进行杂交及连续回交。通过细胞学方法,共确定了646株BC1和BC2群体植株的染色体数目,其中有129（20.0%）株（2n=21）为可能的MAALs。利用已测序甘蓝型油菜“Darmor”的基因组信息设计、筛选了49对C基因组染色体特异的基因引物。经特异基因引物的PCR扩增,鉴定到全套的RBR Oro附加单条C亚基因组染色体的9个MAALs。随后以多个重复序列探针的BAC-FISH对MAALs植株进行分析,证实了染色体特异基因引物的可靠性。相比于亲本RBR Oro,MAALs表现了一些可能由附加C染色体决定的特异性状,例如AAC2的叶片蜡质。MAALs终变期的染色体配对以及雌、雄配子的传递率均有较大的差异,可能与附加的C基因组染色体与A基因组的同源性及甘蓝型油菜中调节染色体配对的机制有关。其中,AAC1、AAC2表现较高的异源配对三价体,且二者的雌、雄配子传递率显着高于其它MAALs,而AAC9的异源配对三价体频率及雌、雄配子传递率均最低,这可能与C9染色体携带有调控甘蓝型油菜染色体配对的一个主效位点（Pr Bn）相关。最后,借助于全套MAALs,通过设计特异的基因引物进行PCR扩增,将C亚基因组的22个较大的未定的Scaffolds锚定到了对应的C基因组染色体上,证实该套附加系在优化基因组信息上的特有作用。
明佳熠[3]（2016）在《新型芥菜型油菜的创建及遗传多样性分析》文中认为芥菜型油菜（Brassica juncea）是由白菜（Brassica rapa）和黑芥（Brassica nigra）杂交后,经过染色体自然加倍而形成。由于芥菜型油菜的驯化历史短,其遗传物质比其亲本种相对狭窄。白菜和黑芥直接杂交合成芥菜型油菜,是利用亲本种人工合成芥菜型油菜的主要方式,但人工合成过程需要克服亲本种间杂交不亲和障碍,需要胚挽救才能获得亲本种间的杂交种,致使该方法只能局限于少量亲本种材料的杂交利用。本研究提出了一种新方法,用芥菜型油菜与白菜和黑芥杂交,经过胚挽救和染色体加倍获得两种六倍体AAAABB和AABBBB,再用两种六倍体分别与亲本种黑芥和白菜杂交得到新型芥菜型油菜,从而达到利用亲本种的遗传变异拓宽芥菜型油菜遗传多样性。1六倍体的创建以7份芥菜型油菜（AABB）为母本,分别授以4份黑芥（BB）和3份白菜（AA）的花粉,经过胚挽救、秋水仙素染色体加倍,最终4个组合的胚萌发出芽并扩繁成无性系,再经过形态学、花粉育性、细胞学、分子标记鉴定,确定4个材料都为真杂种,且都加倍成功。4个组合中,一个组合为芥菜型油菜与黑芥杂交获得的六倍体AABBBB,另三个组合为芥菜型油菜与白菜杂交获得的六倍体AAAABB。我们对六倍体S0和S1的结实性进行了统计学分析,结果发现S0中两种六倍体AAAABB和AABBBB的自交和天然结实性没有显着差异（p>0.05）;但在六倍体S1中,AABBBB的自交和天然结实性结实性显着高于六倍体AAAABB（T-Test,p<0.01）。2六倍体的结实性和可交配性分析利用上述两种六倍体分别与白菜和黑芥杂交创建新型芥菜型油菜。其中六倍体AABBBB与白菜的可交配性为0.048粒/每角果,六倍体AAAABB与黑芥的可交配性为0.037粒/每角果,两种组合的可交配性未检测到显着差异（p>0.05）。以上分析说明,以两种途径创建芥菜型油菜具有可行性,杂交亲和性没有显着的差别。3新型芥菜型油菜的遗传基础分析对新型芥菜型油菜进行遗传变异分析,结果显示新型芥菜型油菜的平均遗传距离（0.37±0.16）大于自然芥菜型油菜（0.25±0.08）,且大于新型-自然芥菜型油菜之间的遗传距离（0.28±0.11）。同时,新型芥菜型油菜遗传多样性（0.36±0.14）大于自然芥菜型油菜（0.30±0.15）。主成分分析发现,新型芥菜型油菜和自然芥菜型油菜能被分开,且新型芥菜型油菜的分布范围更广,变异程度更大。上述数据表明,与传统途径相比,以六倍体为桥梁的策略能够相对容易地将白菜和黑芥的遗传物质转移到芥菜型油菜中,达到拓宽现有芥菜型油菜的遗传背景的目的。
汤访评[4]（2009）在《菊属与四个近缘属植物远缘杂交研究》文中研究指明菊花具有很高的观赏和经济价值,被广泛用作切花、盆栽和公园花坛布置。但许多菊花品种对病害、虫害和其它环境胁迫缺乏抗性。菊花近缘属中存在许多如抗病、抗虫、抗逆等优良特性的优异种质。本研究首先以菊属（Dendranthema）大岛野路菊（D.crassum（Kitam.）Kitam:2n=10x=90）.南京野菊（D.indicum（L.）Des Moul; 2n=4x=36）和菊花脑（D.nakingense（Hand.-Mazz.） Y.R.Ling;2n=2x=18）为母本,分别与亚菊属（Ajania）多花亚菊（A.myriantha（Franchet） Ling ex Shm; 2n=2x=18）、芙蓉菊属（Crossosstephium）芙蓉菊（C.chinense（L.）Makino;2n =2x=18）、太行菊属（Opisthopappus）太行菊（O.taihangensis（Ling）Shih;2n= 2x=18）和菊蒿属（Tanacetum）菊蒿（T.vulgare L.;2n=2x=18）进行属间远缘杂交,探讨菊属与近缘属植物间亲缘关系；再通过属间杂种F1为桥梁亲本与栽培菊花杂交,进行菊花种质创新,为抗性菊花新品种选育奠定基础,主要研究结果如下：（1）以大岛野路菊和南京野菊为母本,芙蓉菊为父本进行属间杂交没有得到种子。大岛野路菊和南京野菊分别有57%和46%的大孢子母细胞能发育成成熟的雌配子体。父本芙蓉菊花粉离体萌发率为51%,授在母本柱头上2h开始萌发,一直延续2 d,说明花粉活力较高。通过对授粉后不同时间段子房切片的观察,发现子房中几乎没有胚胎,说明芙蓉菊与大岛野路菊和南京野菊远缘杂交失败的主要原因可能是由杂种胚的早期败育所致。（2）对12个属间杂交组合授粉后15d的大量胚珠进行离体培养,共获得大岛野路菊×芙蓉菊、南京野菊×芙蓉菊、大岛野路菊×多花亚菊、菊花脑×菊蒿及南京野菊×太行菊5个杂交组合后代,其中前3个组合各分别获得1个株系,后两个组合分别获得4个和7个株系。而在常规人工杂交条件下,这5个杂交组合均未获得杂种后代,表明胚珠拯救是获得菊属与近缘属远缘杂种的一条有效途径。（3）对5个属间杂种后代进行基因组荧光原位杂交分析,发现菊属与亚菊属基因组在荧光原位杂交时需要高浓度的封堵DNA才能区分彼此,说明菊属与亚菊属之间亲缘关系较近；而菊属与芙蓉菊属、菊蒿属和太行菊属的基因组在荧光原位杂交时不需要封堵DNA,说明彼此间亲缘关系相对较远。此外,（南京野菊×芙蓉菊）F1生长健壮,开花茂盛；（南京野菊×太行菊）F1生长健壮,但不见花芽分化；（南京野菊×菊蒿）F1在田间无法正常生长。推测菊属与4个近缘属间的亲缘关系由近及远依次为亚菊属、芙蓉菊属、太行菊属和菊蒿属。（4）以栽培菊花品种‘天坠玉露’为母本,大岛野路菊×芙蓉菊、南京野菊×芙蓉菊和菊花脑×菊蒿3个属间杂种F1为父本进行人工杂交,发现结实率分别为22.5%、12.5%和0.25%。对杂种后代进行基因组双色荧光原位杂交分析,在‘天坠玉露’×（南京野菊×芙蓉菊）F1和‘天坠玉露’×（菊花脑×菊蒿）F1杂交后代中没有观察到芙蓉菊和菊蒿染色体,说明两个近缘属植物的染色体可能已被排斥,但在‘天坠玉露’×（大岛野路菊×芙蓉菊）F1杂交后代中观察到了‘天坠玉露’、大岛野路菊和芙蓉菊3个基因组染色体,实现了栽培菊花种质创新,使充分利用菊花近缘属优良种质进行栽培菊花品种改良成为可能。
韩红玉[5]（2007）在《柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊和子孢子差异表达基因的研究》文中研究指明鸡球虫病是由艾美耳球虫寄生于肠道所引起的一种危害严重的全球性寄生虫病，给养鸡业造成巨大的经济损失。目前控制球虫病的主要方法包括化学药物防治和疫苗免疫预防，但由于这些方法存在安全、价格以及抗药虫株出现等问题，迫切需要寻找新的防治手段来控制球虫病。而研制高效安全的抗球虫病基因工程疫苗和新药物的关键在于寻找到重要的虫体抗原基因。本论文以对鸡危害最为严重的柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）为研究对象，开展了E.tenella孢子生殖发育阶段差异表达基因的分离、鉴定等研究，为探讨鸡球虫的入侵和生长发育机制，研制高效、安全的抗球虫疫苗和新药物奠定了重要基础。1．利用抑制性消减杂交技术和cDNA微阵列技术筛选E.tenella孢子化卵囊和子孢子阶段虫体差异表达基因为了分离鉴定E.tenella孢子发育阶段虫体的差异表达基因，分别以E.tenella未孢子化卵囊和孢子化卵囊为驱动组，子孢子为实验组；未孢子化卵囊为驱动组，孢子化卵囊为实验组，利用抑制性消减杂交（SSH）技术，构建了1个E.tenella子孢子与孢子化卵囊的消减cDNA文库（ZB），1个子孢子与未孢子化卵囊的消减cDNA文库（ZW）和1个孢子化卵囊与未孢子化卵囊的消减cDNA文库（BW）。经PCR鉴定，2个子孢子消减cDNA文库的重组率都为96％，孢子化卵囊消减cDNA文库的重组率为98％，大部分插入片段都大于500 bp。从构建好的3个消减cDNA文库中共挑取3004个克隆制成cDNA微阵列。芯片杂交分析后获得1371个差异表达基因克隆，其中从BW消减cDNA文库中获得245个，从ZB消减cDNA文库中获得582个，从ZW消减cDNA文库中获得544个。对其中727个差异表达基因克隆进行测序，结果获得了657条有效ESTs序列（BW文库197条有效ESTs，ZB文库275条，ZW文库185条），代表118个单一基因，其中孢子化卵囊31个，子孢子87个。序列同源性搜索结果显示：31个孢子化卵囊单一基因中，蛋白功能已知的有12个，蛋白功能未知的有19个，在球虫中已报道的有7个；87个子孢子单一基因中，蛋白功能已知的有23个，蛋白功能未知的有64个，在球虫中已报道的有6个。从中选择了5个差异表达基因克隆，应用实时定量PCR进行验证，结果显示与芯片杂交结果一致。BLASTX同源性比较分析后发现：孢子化卵囊阶段虫体差异表达基因编码的蛋白与E.tenella微线蛋白、TA4抗原蛋白、表面抗原蛋白，刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）的热激蛋白和蛋白质二硫异构酶，人隐孢子虫（Cryptosporidium.hominis）卵囊壁蛋白等有较高的同源性；子孢子阶段虫体高表达基因编码的蛋白与恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶、钙依赖性蛋白激酶，约氏疟原虫（Plasmodium yoelii）神经磷脂酶C，E.tenella SERPIN1蛋白、微线蛋白、反转录酶等有较高的同源性。提示这些基因编码的蛋白可能参与了卵囊孢子化的形成、虫体的入侵、虫体在宿主细胞内的生长发育、虫体与宿主细胞的相互作用、细胞代谢、免疫调节及细胞信号传导等。本研究为分析鉴定鸡球虫孢子发育阶段虫体差异表达基因，探讨与鸡球虫入侵和生长发育相关基因的作用机制等奠定了基础。2．E. tenella孢子化卵囊和子孢子差异表达新基因全长cDNA的克隆与分析根据差异表达基因的ESTs序列，利用RACE技术扩增获得8个E. tenella新基因的全长cDNA，其中包括5个孢子化卵囊新基因全长cDNAs（编号为：BW1-A05、BW1-E06、BW3-F04、BW3-D10、BW11-H07；Genbank登录号：EF552212、EF552214、EF552213、EF552211、EF552218），3个子孢子新基因全长cDNAs（编号为：ZB1-A02、ZB1-A08、ZB11-A04；Genbank登录号：EF552216、EF552217、EF552215）。利用生物信息学分析软件对新基因编码蛋白的理化性质、跨膜结构、抗原位点等进行了分析预测，对编码蛋白的保守功能域、结构位点及同源性蛋白进行了搜索，结果显示4个基因编码的蛋白与其它顶复器原虫蛋白有较高的同源性，其中孢子化卵囊高表达基因BW11-H07编码的蛋白与T. gondii的假想蛋白有较高的同源性；BW1-E06基因编码的蛋白与推测的T.gondii蛋白质二硫键异构酶（putative PDI-like protein）有较高的同源性；子孢子阶段高表达基因ZB11-A04编码的蛋白与T.gondii天冬氨酸蛋白酶3（toxomepsin 3）有较高同源性；ZB1-A02基因编码的蛋白与婴儿利氏曼原虫（Leishmania infantum）蛋白激酶有较高的同源性；其余基因编码的蛋白可能是E. tenella特有的蛋白。本研究为鸡球虫候选基因工程疫苗靶分子和新治疗药物靶标的筛选提供了重要的参考依据。3．E. tenella新基因在大肠杆菌中的表达将获得的E. tenella差异表达新基因（BW1-E06、BW3-F04、ZB1-A02、ZB1-A08）全长cDNA连接到原核表达载体pGEX-4T-2中，成功构建了4个重组表达质粒pGEX-4T-E06（4T-E06）、pGEX-4T-F04（4T-F04）、pGEX-4T-A02（4T-A02）、pGEX-4T-A08（4T-A08），并在大肠杆菌BL21（DE3）中成功诱导表达，纯化获得4个重组融合蛋白（GST-E06、GST-F04、GST-A02、GST-A08），其中4T-E06表达的融合蛋白大部分以可溶性蛋白形式出现，其余3个重组质粒表达的融合蛋白都以包涵体形式存在，利用GST resin成功纯化了4个重组融合蛋白。Western-blot分析结果表明4个重组蛋白都具良好的抗原性。进一步深入研究这些基因以及编码蛋白的功能，对研制鸡球虫候选疫苗和新治疗药物都具有重要意义。4．E. tenella重组蛋白免疫保护效果的初步研究为评价本研究研制的几种基因重组抗原在鸡体中诱导的免疫保护效果，将重组表达抗原GST-E06、GST-A02、空载体pGEX-4T-2表达蛋白GST分别设高（100μg）、中（50μg）、低（25μg）三个免疫剂量加弗氏佐剂肌肉免疫鸡。同时将4T-E06、4T-A02、4T-A08、4T-F04重组表达质粒转化的活菌和空载体质粒转化的活菌分两个剂量（150μg和300μg）口服免疫鸡。分别于7、17和27日龄三次免疫鸡，31日龄时经口攻击感染E. tenella 2×104个卵囊/只。结果显示：1)增重：所有免疫组鸡增重量均低于不免疫不攻虫组，重组蛋白免疫组增重最多的是4T-A02（50μg）免疫组，其相对增重率为80.7％；口服活菌免疫组，增重较多是重组表达菌4T-A08（300μg）和4T-A02（150μg）剂量免疫组，相对增重率为83.3％和81.7％，与不免疫攻虫组（73.2％）相比差异显着（p＜0.05）。2)卵囊产量：重组蛋白免疫组卵囊产量最低的为4T-E06（50μg）免疫组，相对卵囊产量为63.6％；口服活菌免疫组的卵囊产量最低的为4T-A02（300μg）免疫组，相对卵囊产量为66.6％；3)肠道病变记分：重组蛋白免疫组病变记分与不免疫攻虫组差异不明显，但50μg免疫剂量组的病变记分都低于不免疫攻虫组，其中最低的免疫组为4T-A02（50μg）；口服免疫组病变记分都低于不免疫攻虫组的病变记分，其中最低的免疫组为4T-A02（300μg），与不免疫攻虫组差异显着（p＜0.05）。深入对这些重组抗原的递呈、免疫佐剂以及不同免疫组合等方面进行研究，同时进一步对其它孢子发育阶段差异表达基因及其基因产物诱导对鸡抗球虫病的效果进行评估，将有助于早日获得可在现场推广应用的球虫基因工程疫苗。
二、Synthesis of [AG] Complex Genome and the Tri-species Hybrid with[A,D,G]（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Synthesis of [AG] Complex Genome and the Tri-species Hybrid with[A,D,G]（论文提纲范文）
（1）基于G-Triplex/Hemin DNAzyme的比色法灵敏检测核酸（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1部分 综述 |
| 1.1 DNAzyme(DNA酶)在分析化学中的应用 |
| 1.1.1 RNA-Cleaving DNAzyme在分析化学中的应用 |
| 1.1.2 G-quadruplex/hemin DNAzyme在分析化学中的应用 |
| 1.1.3 G-triplex/hemin DNAzyme在分析化学中的应用 |
| 1.2 本论文选题目的及意义 |
| 第2部分 研究报告 |
| 2.1 基于等温循环级联信号放大的G-triplex/hemin DNAzyme比色法检测HIV-DNA |
| 2.1.1 引言 |
| 2.1.2 实验部分 |
| 2.1.3 结果与讨论 |
| 2.1.4 小结 |
| 2.2 基于滚环扩增信号放大的G-triplex/hemin DNAzyme比色法检测miRNA |
| 2.2.1 引言 |
| 2.2.2 实验部分 |
| 2.2.3 结果与讨论 |
| 2.2.4 小结 |
| 2.3 以原位合成的铜纳米簇为荧光探针的免疫分析新方法的研究 |
| 2.3.1 引言 |
| 2.3.2 实验部分 |
| 2.3.3 结果与讨论 |
| 2.3.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间研究成果 |
（2）天然异源四倍体甘蓝型油菜中亚基因组的分离及互作（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 植物远缘杂交与异源多倍体 |
| 1.2 作物远缘杂交的研究进展 |
| 1.3 油菜远缘杂交的研究 |
| 1.3.1 芸薹属简介 |
| 1.3.2 甘蓝型油菜远缘杂交研究进展 |
| 1.3.2.1 远缘杂交转移抗性基因 |
| 1.3.2.2 导入细胞质不育基因 |
| 1.3.3 远缘杂交诱导染色体的消除 |
| 1.3.3.1 染色体消除现象 |
| 1.3.3.2 芸薹属远缘杂交的染色体消除现象 |
| 1.3.4 染色体消除机制研究 |
| 1.4 单体异附加系的研究 |
| 1.4.1 单体异附加系 |
| 1.4.2 芸薹属植物附加系研究概况 |
| 1.4.3 附加系的培育方法 |
| 1.4.4 附加系的鉴定手段 |
| 1.4.4.1 分子标记 |
| 1.4.4.2 细胞学手段 |
| 1.4.5 单体附加系应用的新思路 |
| 1.4.5.1 异源多倍体的基因组解析 |
| 1.4.5.2 异附加系促进受体基因组重组 |
| 1.4.6 易位系、代换系研究 |
| 1.5 本研究的目的及意义 |
| 2 远缘杂交诱导甘蓝型油菜A亚基因组的剥离 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 染色体计数及染色体行为观察 |
| 2.2.3 胚抢救 |
| 2.2.4 组织培养 |
| 2.2.5 花粉育性观察 |
| 2.2.6 AFLP分析 |
| 2.2.7 原位杂交 |
| 2.2.7.1 酶解制片 |
| 2.2.7.2 探针及封阻DNA的制备 |
| 2.2.7.3 原位杂交过程 |
| 2.2.7.4 原位杂交照片的处理 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 剥离白菜RBR ZS11的创建 |
| 2.3.2 剥离过程的细胞学鉴定 |
| 2.3.2.1 F_1（2n=29）植株的染色体行为 |
| 2.3.2.2 杂种F_1、BC_1及RBR ZS11的原位杂交分析 |
| 2.3.3 杂种F_1及RBR ZS11的AFLP分析 |
| 2.3.4 RBR ZS11的聚类分析 |
| 2.3.5 RBR ZS11的表型特征 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 甘蓝型油菜C基因组染色体丢失的相关机制 |
| 2.4.2 远缘杂交抽离甘蓝型油菜A亚基因组的优势 |
| 2.4.3 RBR的研究意义 |
| 3 甘蓝型油菜C亚基因组染色体的遗传解析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 染色体计数及染色体行为观察 |
| 3.2.3 花粉育性观察 |
| 3.2.4 原位杂交 |
| 3.2.4.1 探针制备 |
| 3.2.4.2 多重双色原位杂交 |
| 3.2.5 C基因组染色体特异基因引物 |
| 3.2.5.1 特异引物设计 |
| 3.2.5.2 PCR扩增 |
| 3.2.6 数据处理 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 RBR附加C亚基因组染色体的MAALs的创建 |
| 3.3.2 C基因组染色体特异引物鉴定MAALs |
| 3.3.3 MAALs中C基因组染色体的完整性鉴定 |
| 3.3.4 MAALs的染色体配对分析 |
| 3.3.5 MAALs的雌、雄配子传递率分析 |
| 3.3.6 以MAALs锚定基因组序列中的未定Scaffolds |
| 3.3.7 MAALs的表型特征 |
| 3.3.8 黄化型RBR Oro植株 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 C亚基因组与甘蓝型油菜的抗性及适应性 |
| 3.4.2 C亚基因组的独立进化与共进化 |
| 3.4.3 MAALs有助于优化油菜基因组信息 |
| 4 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 附录Ⅰ |
| 附录Ⅱ |
| 个人简介 |
| 发表文章 |
| 致谢 |
（3）新型芥菜型油菜的创建及遗传多样性分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 芸薹属的研究概述 |
| 1.1.1 芸薹属植物的起源 |
| 1.1.2 芸薹属植物的亲缘关系 |
| 1.2 芥菜的分类及遗传多样性研究 |
| 1.2.1 芥菜的起源 |
| 1.2.2 芥菜的分类 |
| 1.2.3 芥菜的遗传多样性 |
| 1.3 芸薹属异源多倍体的研究 |
| 1.3.1 多倍体的一般简介 |
| 1.3.2 多倍体的应用 |
| 1.3.3 芸薹属多倍体的研究概述 |
| 1.4 远缘杂交在育种中的利用 |
| 1.5 本研究的目的和意义 |
| 第二章 芥菜与白菜、黑芥的异源六倍体构建 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 试验方法 |
| 2.3 试验结果与分析 |
| 2.3.2 六倍体的鉴定 |
| 2.3.3 六倍体结实性的调查 |
| 2.3.4 六倍体可交配性调查 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 六倍体的稳定性 |
| 2.4.2 多倍体的结实性 |
| 2.4.3 六倍体在芸薹属中的育种潜力 |
| 第三章 新型芥菜型油菜的创建 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 试验材料 |
| 3.2.2 试验方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 新型芥菜型油菜的创建 |
| 3.3.2 F1的苗期形态及成熟期形态观察 |
| 3.3.3 F1的花粉育性 |
| 3.3.4 F1的细胞学鉴定 |
| 3.3.5 新型芥菜型油菜的遗传变异 |
| 3.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（4）菊属与四个近缘属植物远缘杂交研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 1 菊属与近缘属植物间杂交研究现状 |
| 2 近缘属种质资源的利用现状 |
| 3 远缘杂交障碍及其克服对策 |
| 3.1 远缘杂交不亲和性及其克服方法 |
| 3.2 杂种不育性及其克服方法 |
| 4 远缘杂种的鉴定 |
| 4.1 形态学鉴定 |
| 4.2 细胞学鉴定 |
| 4.3 同工酶鉴定 |
| 4.4 分子标记鉴定 |
| 5 本课题的目的及意义 |
| 第一章 大岛野路菊与芙蓉菊的属间杂交 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 属间杂交结实性 |
| 2.2 花粉萌发 |
| 2.3 雌配子体、幼胚发育和幼胚拯救 |
| 2.4 植株形态学鉴定 |
| 2.5 细胞学鉴定和杂交后代GISH分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 大岛野路菊与芙蓉菊属间杂交障碍 |
| 3.2 菊属与芙蓉菊属间亲缘关系 |
| 第二章 南京野菊与芙蓉菊的属间杂交 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 属间杂交结实性 |
| 2.2 花粉萌发 |
| 2.3 雌配子体、幼胚发育和幼胚拯救 |
| 2.4 植株形态学鉴定 |
| 2.5 细胞学鉴定 |
| 2.6 杂交后代的GISH分析 |
| 2.7 CGH比较基因组杂交与南京野菊染色体构型分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 南京野菊与芙蓉菊属间杂交障碍 |
| 3.2 菊属与芙蓉菊属间亲缘关系 |
| 3.3 南京野菊基因组组成分析 |
| 第三章 大岛野路菊与多花亚菊的属间杂交 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 属间杂交结实性 |
| 2.2 花粉萌发 |
| 2.3 幼胚拯救 |
| 2.4 植株形态学鉴定 |
| 2.5 细胞学鉴定和杂种后代的GISH分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 大岛野路菊与多花亚菊属间杂交障碍 |
| 3.2 菊属与亚菊属间亲缘关系 |
| 第四章 菊花脑与菊蒿的属间杂交 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 属间杂交结实性 |
| 2.2 花粉萌发 |
| 2.3 幼胚拯救 |
| 2.4 植株形态学鉴定 |
| 2.5 细胞学鉴定和杂种后代的GISH分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 菊花脑与菊蒿属间杂交障碍 |
| 3.2 菊属与菊蒿属亲缘关系 |
| 第五章 南京野菊与太行菊的属间杂交 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 属间杂交结实性 |
| 2.2 花粉萌发 |
| 2.3 雌配子体、幼胚发育和幼胚拯救 |
| 2.4 植株形态学鉴定 |
| 2.5 细胞学鉴定和杂种后代的GISH分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 南京野菊与太行菊属间杂交障碍 |
| 3.2 菊属与太行菊属亲缘关系 |
| 第六章 栽培菊花与属间杂种F_1杂交研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 杂交结实与后代出苗状况 |
| 2.2 杂交后代的形态特征 |
| 2.3 细胞学鉴定 |
| 2.4 双色GISH分析 |
| 3 讨论 |
| 全文讨论 |
| 1 菊属与近缘属植物远缘杂交 |
| 2 菊属与近缘属植物亲缘关系 |
| 3 近缘属植物在菊花育种中的地位和作用 |
| 全文结论 |
| 创新之处 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的相关论文 |
| 致谢 |
（5）柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊和子孢子差异表达基因的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 鸡球虫病的危害、防治现状与需求 |
| 1.2 鸡球虫病疫苗的研究现状及进展 |
| 1.2.1 活疫苗 |
| 1.2.2 重组疫苗 |
| 1.2.3 新型佐剂的研究 |
| 1.2.4 展望 |
| 1.3 鸡球虫入侵相关分子的研究 |
| 1.3.1 微线蛋白 |
| 1.3.2 蛋白激酶 |
| 1.3.3 热激蛋白 |
| 1.3.4 糖酵解酶 |
| 1.3.5 展望 |
| 1.4 抑制性消减杂交(SSH)技术及其在寄生虫学中的应用 |
| 1.4.1 抑制性消减杂交技术的原理 |
| 1.4.2 抑制性消减杂交技术的优缺点及关键点 |
| 1.4.3 抑制性消减杂交技术的研究进展 |
| 1.4.4 抑制性消减杂交技术(SSH)在寄生虫学研究中的应用 |
| 1.4.5 展望 |
| 第二章 柔嫩艾美耳球虫孢子发育阶段虫体消减cDNA文库的构建 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验虫株 |
| 2.2.3 主要试剂 |
| 2.2.4 主要仪器 |
| 2.2.5 E.tenella未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子的制备 |
| 2.2.6 E.tenella未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子总RNA的提取 |
| 2.2.7 E.tenella未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子mRNA的分离 |
| 2.2.8 E.tenella孢子发育阶段虫体cDNA消减文库的构建 |
| 2.2.9 E.tenella孢子发育阶段虫体cDNA消减文库重组比率及插入片段长度分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 E.tenella未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子的收集和纯化 |
| 2.3.2 E.tenella未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子总RNA的提取 |
| 2.3.3 双链cDNA的合成和RsaI酶切效率的分析 |
| 2.3.4 接头连接效率的检验 |
| 2.3.5 消减cDNA文库重组率及插入片段长度分析 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 cDNA微阵列技术分析柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊和子孢子差异表达基因 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验虫株 |
| 3.2.3 主要仪器 |
| 3.2.4 主要试剂 |
| 3.2.5 E.tenella未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子的收集 |
| 3.2.6 引物合成及微阵列的制作和分析 |
| 3.2.7 用于芯片制备的消减杂交克隆的筛选 |
| 3.2.8 cDNA微阵列的制作 |
| 3.2.9 芯片杂交实验 |
| 3.2.10 芯片扫描及数据处理 |
| 3.2.11 差异表达基因杂交数据的在线分析 |
| 3.2.12 差异表达基因的测序和分析 |
| 3.2.13 差异表达基因的实时定量PCR验证 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 cDNA微阵列的构建 |
| 3.3.2 差异表达基因芯片杂交结果 |
| 3.3.3 基因芯片杂交数据的聚类分析 |
| 3.3.4 差异表达基因的测序及生物信息学分析 |
| 3.3.5 差异表达基因的实时定量PCR验证 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊和子孢子阶段虫体差异表达新基因全长cDNA的克隆与分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法: |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验虫株 |
| 4.2.3 主要试剂 |
| 4.2.4 主要仪器 |
| 4.2.5 EST来源 |
| 4.2.6 RACE引物 |
| 4.2.7 全长cDNA扩增的引物 |
| 4.2.8 E.tenella未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子的收集 |
| 4.2.9 E.tenella未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子Total RNA的提取 |
| 4.2.10 新基因的3’和5’RACE扩增: |
| 4.2.11 PCR产物的回收 |
| 4.2.12 回收产物pGEM-T-easy Vector连接转化 |
| 4.2.13 阳性克隆的鉴定及测序 |
| 4.2.14 全长序列的拼接 |
| 4.2.15 新基因全长cDNA序列的扩增 |
| 4.2.16 新基因全长cDNA的克隆和测序 |
| 4.2.17 新基因全长cDNA编码蛋白的生物信息学分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 E.tenella孢子化卵囊和子孢子差异表达新基因全长cDNA的获得 |
| 4.3.2 差异表达新基因全长cDNA序列的生物信息学分析 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 柔嫩艾美耳球虫新基因在大肠杆菌中的表达 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 实验方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 重组原核表达质粒的构建 |
| 5.3.2 重组蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化 |
| 5.3.3 重组表达蛋白抗原性的鉴定 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 柔嫩艾美耳球虫重组蛋白免疫保护效果的初步研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.2.1 材料 |
| 6.2.2 方法 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 增重 |
| 6.3.2 卵囊产量 |
| 6.3.3 肠道病变记分 |
| 6.4 讨论 |
| 第七章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
四、Synthesis of [AG] Complex Genome and the Tri-species Hybrid with[A,D,G]（论文参考文献）
- [1]基于G-Triplex/Hemin DNAzyme的比色法灵敏检测核酸[D]. 李瑞英. 陕西师范大学, 2019(06)
- [2]天然异源四倍体甘蓝型油菜中亚基因组的分离及互作[D]. 朱斌. 华中农业大学, 2016(12)
- [3]新型芥菜型油菜的创建及遗传多样性分析[D]. 明佳熠. 西南大学, 2016(02)
- [4]菊属与四个近缘属植物远缘杂交研究[D]. 汤访评. 南京农业大学, 2009(06)
- [5]柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊和子孢子差异表达基因的研究[D]. 韩红玉. 中国农业科学院, 2007(05)