一、蓝猪耳再生系统的建立（论文文献综述）
高龙[1]（2018）在《蓝猪耳和拟南芥早期胚胎发生中线粒体DNA水平的变化》文中进行了进一步梳理线粒体DNA（mtDNA）是线粒体的遗传物质,与核基因共同调控线粒体的活动。在哺乳动物卵细胞发育过程中,mtDNA会发生超量复制而达到>105个拷贝。这些mtDNA在数量上约为普通体细胞的100倍,能够保证早期胚胎在没有mtDNA复制的情况下亦能正常发育至囊胚时期。然而,在被子植物中,卵细胞仅包含与体细胞相似的mtDNA含量,并没有像哺乳动物卵细胞那样含有大量的mtDNA。这些研究结果暗示:在被子植物早期胚胎发生过程中,mtDNA在数量上可能有异于哺乳动物早期胚胎中mtDNA的变化规律。然而由于被子植物早期胚胎细胞分离较困难,其内的mtDNA在数量变化上的规律并未被研究过。利用蓝猪耳和拟南芥作为实验材料,我们探索了它们早期胚胎发生过程中mtDNA数量的变化规律。实时荧光定量PCR结果显示:蓝猪耳晚期合子和成熟卵细胞分别包含154.2±36.9和78.0±22.7个线粒体DNA拷贝,表明在合子发育过程中mtDNA发生了数量加倍。我们也定量了早期基、顶细胞中的mtDNA数量（103.0±26.1和33.4±10.5）,早期基、顶细胞是成熟合子的分裂产物,那么成熟合子包含136.4个mtDNA拷贝,进而再次揭示mtDNA在合子发育过程中发生了数量加倍。为了提供mtDNA加倍的细胞学证据,我们构建了标记卵细胞及合子线粒体的蓝猪耳proDD45:Mt-GFP转基因植株,该转基因有利于我们用DAPI染色来区分线粒体拟核（mtDNA和蛋白的复合物）和质体拟核。荧光显微技术定量研究表明:在蓝猪耳合子发育过程中,线粒体数量、线粒体拟核数量、和线粒体拟核荧光都发生了加倍（线粒体数量从317.3±28.3增加到了584.3±26.5,线粒体拟核数量从220.0±29.2增加到了412.7±13.5,线粒体拟核荧光从3.2±0.5×104增加到了7.2±1.5×104）,因而确认了mtDNA在合子发育过程中数量加倍的结论。利用荧光定量显微技术,我们也探索了拟南芥转基因系proDD45:Mt-GFP合子发育过程中的mtDNA数量变化。不同于蓝猪耳合子,拟南芥mtDNA的加倍并没有发生在合子发育过程中（拟南芥成熟合子和成熟卵细胞分别包含355.4±31.8和326.2±28.1个线粒体,253.8±20.0和254.0±33.8个线粒体拟核,3.1±0.3×104和3.7±0.5×104线粒体拟核荧光）,其mtDNA的数量增多起始于两细胞胚的发育时期（拟南芥早期顶细胞和晚期顶细胞分别包含132.8±21.4和211.7±20.8个线粒体、99.3±18.6和183.3±11.5个线粒体拟核、1.4±0.2×104和2.6±0.2×104线粒体拟核荧光）。这些研究结果表明mtDNA在蓝猪耳和拟南芥早期胚胎发育过程中发生了数量加倍,揭示mtDNA在被子植物及哺乳动物早期胚胎发生过程中存在不同的数量变化规律。我们还探索了蓝猪耳和拟南芥成熟合子中的mtDNA分布。利用假想的分裂板,我们将成熟合子于细胞核中央处分为基部和顶部,并统计了其内的线粒体拟核数量、及线粒体拟核荧光。蓝猪耳成熟合子基、顶部线粒体拟核比例是2.96:1、线粒体拟核荧光比例是3.00:1,拟南芥成熟合子基、顶部线粒体拟核、线粒体拟核荧光的比例分别是1.68:1、1.64:1,因此mtDNA在蓝猪耳和拟南芥合子中的分布是不同的。由于合子的基、顶部在合子分裂后分别形成基、顶细胞,这些研究结果也首次暗示合子中的mtDNA在蓝猪耳及拟南芥基、顶细胞中将分别按照3.00:1及1.64:1进行分配。有趣的是,这种mtDNA分布暗示蓝猪耳和拟南芥顶细胞将包含数量相似的mtDNA,而基细胞却包含数量明显不同的mtDNA。该现象背后的生物学意义目前并不清楚,还需要进一步探究。综上所述,这些发现不仅首次揭示了被子植物早期胚胎发育过程中的mtDNA数量变化,还首次发现了不同物种的成熟合子有着不同的mtDNA分布,使我们更好的理解被子植物早期胚胎发育。
于金金,成诚,王雅英,张亚楠,田惠桥[2]（2012）在《蓝猪耳离体受精初试》文中研究表明用体内-体外方法分离了蓝猪耳精细胞。用酶解和解剖方法分离了其成熟卵细胞。分离的精、卵细胞用电融合介导尝试了体外诱导融合。在合适的渗透压（6%甘露醇）和合适的氯化钙（0.04%CaCl2·2H2O）溶液中,用交流电场为30～35V,10～25s使精、卵细胞排队;用直流电场400～600V,45～50μs的脉冲穿孔条件可诱导30%的精、卵细胞融合和70%以上的卵细胞之间的融合。尝试了人工合子的单细胞培养但未获成功。诱导蓝猪耳精、卵细胞融合的条件与玉米和水稻不同。
李德明,张秀娟,李科[3]（2009）在《蓝猪耳的繁殖及其在荆州园林应用的调查分析》文中研究表明以蓝猪耳（Torenia fournieri）为试验材料,研究了近年来其在华中地区（以荆州市为代表）的繁育及园林应用可行性状况。结果表明,蓝猪耳在荆州的生长状态良好,单株花朵数可达147朵左右,花期长达133 d,结实率达到41.89%。通过对荆州市典型小区（油院小区,城南春天,悉尼印象,荆州花园）、重点街道（江津路,北京路）和典型性公共园林绿地（沙隆达广场）的园林植物进行应用性评估,发现当地的园林植物应用存在系列问题,如植物造景材料老化、园林绿化所选用的植物与建筑风格不符以及绿化未能与时俱进等缺陷。采用典型绿地实地考察与模拟应用相结合的形式,对蓝猪耳在荆州园林绿地的应用效果及前景进行了可行性分析。总体而言,蓝猪耳在荆州的园林绿化中可以大规模引进和采用。
李德明,张秀娟,董婷婷[4]（2009）在《蓝猪耳研究概况》文中指出概述了蓝猪耳（Torenia fourniri Lind.）在形态特征、遗传育种及发育生物学等方面的研究进展,并简要介绍了其栽培技术方面的研究。
龙海涛,李洪清,李玲[5]（2008）在《根癌农杆菌介导蓝猪耳转化的影响因素研究》文中认为研究了根癌农杆菌介导蓝猪耳转化的影响因子。结果表明,以蓝色花类型蓝猪耳5～6周的叶片为外植体,在OD600为0.5～0.6的活化菌液中浸染5～10min,暗培养4d后,在愈伤组织诱导培养基（MS+BA1.0mg/L+2,4-D0.1mg/L）上生长14d,获得抗性愈伤组织;经芽诱导培养基（1/2MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L）培养28d得到抗性芽;生根培养基（1/2MS）上培养14d得到抗性植株。经PCR检测证实外源基因已整合到蓝猪耳基因组中,转化率达13%～14%。Cef和Hyg浓度对转化影响较大,转化的不同阶段其适宜浓度不同。
侯雷平,李梅兰[6]（2008）在《蓝猪耳研究进展》文中研究表明由于特殊的花器官结构和开花习性,蓝猪耳成为一种理想的适于进行科学研究的观赏花卉。介绍了蓝猪耳组织培养和遗传转化国内外研究的概况,并详细论述了利用蓝猪耳为材料进行授粉受精机理和花色代谢研究的一些最新成果。
龙海涛,李洪清,李玲[7]（2008）在《蓝猪耳启动子捕获系统的建立》文中认为为了分离基因启动子,构建了陷阱植物表达载体pHAHCA,用农杆菌介导的无启动子GUS方法转化蓝猪耳,经抗性筛选和PCR检测,获得82株转基因植株,转化率达12.5%。12株GUS染色呈阳性,其中10株GUS在叶脉表达,2株在茎和叶脉表达。对转基因植株进行盐胁迫处理,有1株根部出现GUS染色蓝色斑点。通过TAIL-PCR扩增和测序,获得5个T-DNA侧翼序列。
杨延红[8]（2007）在《蓝猪耳精、卵细胞，中央细胞，助细胞以及原胚细胞的分离》文中研究表明高等植物的雌性配子细胞深藏在子房内的胚珠体细胞组织中,形成了对高等植物受精机理研究的障碍。而将高等植物的精、卵细胞和其他雌配子体细胞分离出来,在体外诱导精、卵细胞的融合以及对人工合子和其他分离得到的雌配子细胞体外进行细胞学和分子生物学的研究可克服这种障碍,达到研究高等植物受精机理的目的。分离的雌、雄配子、合子以及早期胚细胞结合分子生物学方法研究这些细胞的结构和功能已成为一个新的研究领域。蓝猪耳（Toreniafournieri）具有胚囊半裸露的特点,近几年来逐渐成为研究植物受精生物学的一种模式植物。在我们的实验中,我们分离了一定数量具有生活力的精、卵细胞、中央细胞、助细胞、以及二胞原胚中的顶细胞与基细胞。1.蓝猪耳精细胞分离:蓝猪耳成熟花粉是二胞型。我们采用活体-离体技术培养了蓝猪耳的花柱使其长出花粉管,然后用渗透压冲击法促使花粉管尖端破裂,释放出一对与营养核相连的精细胞。通过对45对精细胞直径大小进行单因素方差分析发现,蓝猪耳的一对精细胞在体积上呈显着差异,具有二型性。并首次发现,爆破出的两个精细胞的生活力也是有所差异的,经FDA染色时发现,和营养核相连大的精细胞（Svn）的荧光明显弱于小的精细胞（Sua）。对大小两个精细胞进行了群体的收集。2.蓝猪耳卵细胞和合子分离:在准确掌握了蓝猪耳胚囊发育的时期和授粉至受精时间的基础上,分离出大量生活状态良好的卵细胞与合子;观察了体内卵细胞与助细胞受精前后的一些细胞学变化;对于体内合子从受精起始到分裂为二胞原胚的一系列变化也进行了观察。同讨还发现花粉管进入胚囊后,在蓝猪耳胚珠内部形成了一条淀粉粒带,而在受精前的胚珠中完全不存在这条淀粉粒条带,这是由受精引起的雌性器官内部营养物质的变化。我们首次对高等植物分离后的卵细胞与合子进行电泳,发现卵细胞与合子表面都带正电荷。在电场作用下,细胞的移动速度主要取决于其表面电荷的多少。在实验中,合子的移动速度比卵细胞快,暗示受精后,合子所带的表面电荷增加。卵细胞与合子的大量分离为高等植物受精机理的研究创造了条件。3.蓝猪耳中央细胞和助细胞分离:在对以上分离技术不断完善和改进的基础上,我们分离出了受精前后的中央细胞以及不同时期的助细胞。结果发现,受精前后的中央细胞在体积与细胞状态均有很大差异,受精前的中央细胞体积较小,含有很多大液泡,且细胞内部的淀粉粒较少;而受精后的中央细胞体积变大,液泡减少,细胞内部充满了淀粉粒。通过比较不同发育时期的助细胞,发现两个助细胞只是在体积上略有差异,而在细胞状态上看不出任何差异。4.蓝猪耳二胞原胚的顶细胞和基细胞分离:随着对高等植物受精机理以及胚胎发生研究的不断深入,近几年来,高等植物早期的胚胎发生机制引起了一些学者很大的兴趣。顶细胞和基细胞的分化机制是一个非常有吸引力的研究领域,但目前还很少报道。因而,我们首次分离了蓝猪耳二胞原胚的顶细胞和基细胞,并收集到一定数量,为将来开展比较合子与二胞原胚的分子生物学研究打下了基础。
李淑华[9]（2007）在《蓝猪耳（Torenia fournieri Lind）育性的研究》文中指出蓝猪耳（Torenia fournieri Linden）是一种重要的热带、亚热带花卉植物，生长期短，盛花期比较长，而且具备裸露的胚囊，因此不仅是夏季花卉中的重要栽培品种，而且还是研究植物花器官发育和授粉受精过程的理想模式植物。本实验室在研究中发现，蓝猪耳转基因苗不能正常结实，为后代的遗传分析带来困难。针对转基因植株结实困难的问题，本文首先对室内蓝猪耳传粉机制进行研究，又进一步研究组织培养植株和转基因植株的繁殖与结实规律，以期发现蓝猪耳转基因苗不结实的原因，为进一步开展蓝猪耳基因转化和遗传分析提供基础。本论文主要结果如下：1．在对室内盆栽的蓝猪耳研究中发现，其花的外形比较鲜艳，具备异花传粉的外在特点，开花之后二长雄蕊存在翻转现象，这种雄蕊翻转和柱头打开相互配合的机制与促进异交有关。通过显微观察、扫描电镜、翻转过程照相、套袋、人工授粉以及室内的生理生化分析，研究了蓝猪耳开花特性、花粉的活力和柱头的可受性、柱头与雄蕊相对位置关系的变化等，证实蓝猪耳室内传粉机制为异交传粉。因此在室内自然状态下蓝猪耳不能自然结实，需人工授粉才可以结实。2．转基因蓝猪耳经过继代培养后移栽到花盆中。本实验中的9种转基因材料均能够正常开花，但是不能结实，花粉活力在9.8％到30.6％之间，经过扫描电镜观察，发现花粉出现了败育现象，但柱头的活力正常，此现象属于雄性不育。3．以无菌的对照苗叶片作为外植体再生植株。观察不同继代次数无菌苗的开花与繁殖能力。结果表明，第一代继代的植株与对照相比，花粉活力降低了约20％，部分花粉也出现了与转基因继代苗相似的败育现象。将继代后的转基因植株与野生型植株杂交，得到的F1代种子通过抗性筛得到抗性植株，发现84.6％-88.9％的F1代抗性植株的花粉活力得到恢复。以上实验结果，转基因苗花粉败育的原因是由于组织培养继代引起的，对继代的转基因苗不结实的原因进行了讨论。
王瑛华,陈刚,陈雄伟[10]（2007）在《蓝猪耳叶片高频率再生体系的建立》文中指出以蓝猪耳（Torenia fournieri Linden）叶片为外植体,研究多种因素对蓝猪耳不定芽诱导及不定根形成的影响,并进行了条件优化,建立了蓝猪耳叶片高频率离体再生体系.结果表明:芽诱导与基本培养基成分关系不大,而与植物生长物质的浓度和种类有关,其中以MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.2 mg/L状态最佳;不定根形成受到植物生长物质和培养基中离子浓度的共同影响,最佳生根条件为1/2 MS+IBA 0.2 mg/L.
二、蓝猪耳再生系统的建立（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、蓝猪耳再生系统的建立（论文提纲范文）
（1）蓝猪耳和拟南芥早期胚胎发生中线粒体DNA水平的变化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 1.1 线粒体及线粒体DNA研究概况 |
| 1.1.1 线粒体 |
| 1.1.2 线粒体DNA |
| 1.1.3 哺乳动物线粒体DNA |
| 1.1.4 植物线粒体DNA |
| 1.2 蓝猪耳研究概况 |
| 1.2.1 蓝猪耳概述 |
| 1.2.2 蓝猪耳的生殖生物学研究 |
| 1.2.3 蓝猪耳遗传转化研究进展 |
| 1.3 研究目的及研究内容 |
| 1.3.1 研究目的 |
| 1.3.2 研究内容 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 蓝猪耳线粒体DNA的定量研究 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.2 转基因蓝猪耳的构建 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 转基因拟南芥ProDD45:MT-GFP的细胞学处理 |
| 2.4 蓝猪耳合子和卵细胞超微结构观察 |
| 2.4.1 实验材料 |
| 2.4.2 实验方法 |
| 第三章 结果分析 |
| 3.1 蓝猪耳细胞线粒体DNA定量分析 |
| 3.1.1 蓝猪耳精细胞线粒体DNA的定量研究 |
| 3.1.2 蓝猪耳胚囊内细胞的分离 |
| 3.1.3 胚囊内细胞线粒体DNA的实时定量 |
| 3.1.4 受精作用与合子线粒体DNA的复制 |
| 3.2 转基因材料结果分析 |
| 3.2.1 菌液检测 |
| 3.2.2 转基因蓝猪耳的构建 |
| 3.2.3 蓝猪耳合子及卵细胞线粒体拟核的观察 |
| 3.2.4 蓝猪耳合子及卵细胞线粒体结构观察 |
| 3.2.5 线粒体DNA复制通过受精作用激活的细胞学证据 |
| 3.2.6 拟南芥mtDNA在二胞原胚时期开始复制 |
| 3.2.7 拟南芥和蓝猪耳成熟合子中线粒体DNA的分配 |
| 3.2.8 拟南芥和蓝猪耳成熟合子线粒体DNA的顶偏与基偏分配 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 被子植物线粒体DNA在胚胎发生中进行了复制 |
| 4.2 合子线粒体DNA的分配与胚胎发育 |
| 4.3 转录组与细胞学活动 |
| 结论 |
| 参考论文 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
（2）蓝猪耳离体受精初试（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 分离精细胞 |
| 2.2 分离卵细胞 |
| 2.3 诱导精、卵细胞融合 |
| 2.4 人工合子培养 |
| 实验结果 |
| 1 精、卵细胞的分离和采集 |
| 1.1 精细胞分离和采集 |
| 1.2 卵细胞分离和采集 |
| 2 精、卵细胞融合 |
| 3 卵细胞与卵细胞的融合 |
| 4 人工合子的培养 |
| 讨论 |
（4）蓝猪耳研究概况（论文提纲范文）
| 1 组织培养技术及遗传育种研究 |
| 1.1 组织培养技术研究 |
| 1.2 遗传育种研究 |
| 2 发育生物学研究 |
| 3 栽培技术研究 |
（5）根癌农杆菌介导蓝猪耳转化的影响因素研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料与培养基 |
| 1.2 农杆菌菌株及转化 |
| 1.3 转化植株PCR检测 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 叶片再生途径对转化的影响 |
| 2.2 叶龄对抗性芽频率的影响 |
| 2.3 不同花色蓝猪耳对转化的影响 |
| 2.4 抗生素对转化的影响 |
| 2.5 转化植株PCR检测 |
| 2.6 适宜转化条件 |
| 3 讨论 |
（6）蓝猪耳研究进展（论文提纲范文）
| 1 蓝猪耳组织培养研究概况 |
| 2 蓝猪耳遗传转化研究进展 |
| 3 蓝猪耳在植物授粉受精研究中的应用 |
| 4 蓝猪耳在花色代谢研究中的应用 |
| 5 展望 |
（8）蓝猪耳精、卵细胞，中央细胞，助细胞以及原胚细胞的分离（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1 雌、雄性细胞分离的意义及研究进展 |
| 1.1 精细胞的研究进展 |
| 1.2 卵细胞的研究进展 |
| 1.3 中央细胞的研究进展 |
| 1.4 助细胞的研究进展 |
| 1.5 卵细胞受精前后的变化和合子基因的激活 |
| 1.6 二胞胚的研究进展 |
| 2 有关蓝猪耳的研究 |
| 2.1 体内受精的研究 |
| 2.2 体外受精的研究 |
| 3 本论文的研究内容及意义 |
| 第二章 蓝猪耳雄配子体发育以及精细胞的分离 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 小孢子的发生和雄配子体发育 |
| 2.2 花粉管的半离体培养 |
| 2.3 精细胞的分离 |
| 2.4 精细胞群体的收集 |
| 2.5 精细胞的二型性 |
| 3 讨论 |
| 3.1 小孢子的发生和雄配子体发育 |
| 3.2 有关花粉管半离体培养以及精细胞的分离 |
| 第三章 蓝猪耳卵细胞、合子的分离 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 卵细胞与助细胞体内发育与分离 |
| 2.2 合子的分离 |
| 2.3 卵细胞以及合子群体的收集 |
| 2.4 不同渗透压和酶浓度对卵细胞分离的影响 |
| 2.5 合子在体内的发育变化 |
| 2.6 受精后助细胞的变化 |
| 2.7 花粉管进入胚囊后淀粉粒带的形成 |
| 2.8 卵细胞与合子电泳 |
| 3 讨论 |
| 3.1 卵细胞以及合子分离与其群体的收集 |
| 3.2 卵细胞受精前后的变化 |
| 3.3 卵细胞和合子电泳 |
| 3.4 受精后胚囊营养物质的变化 |
| 第四章 助细胞与中央细胞的分离 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同渗透压对不同时期助细胞分离的影响 |
| 2.2 不同酶浓度对不同发育阶段的助细胞分离的影响 |
| 2.3 助细胞群体的收集 |
| 2.4 不同的渗透压对中央细胞分离的影响 |
| 2.5 不同的酶成分以及浓度对中央细胞分离的影响 |
| 2.6 受精前后中央细胞群体的收集 |
| 3 讨论 |
| 3.1 助细胞 |
| 3.2 中央细胞 |
| 第五章 二胞原胚分离 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 二胞胚在体内的发育 |
| 2.2 不同渗透压对二胞胚分离的影响 |
| 2.3 不同的酶浓度及成分对分离的影响 |
| 2.4 酶解时间对二胞原生质体形成的影响 |
| 2.5 顶细胞以及基细胞群体的收集 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 在学期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（9）蓝猪耳（Torenia fournieri Lind）育性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩写词表 |
| 目录 |
| 1. 研究背景 |
| 1.1 蓝猪耳遗传转化研究进展 |
| 1.2 植物的繁育系统 |
| 1.3 植物败育的原因 |
| 1.3.1 内在机制 |
| 1.3.2 外在影响因素 |
| 1.4 本研究的目的意义 |
| 2. 材料与方法 |
| 2.1 蓝猪耳室内传粉的研究 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.1.2.1 单花花期、单花物候的观察 |
| 2.1.2.2 花粉量、胚珠数和花粉/胚珠比率的测定 |
| 2.1.2.3 花粉组织化学的检测 |
| 2.1.2.4 柱头可受性与花粉活性的测定 |
| 2.1.2.5 花药和柱头的位置关系 |
| 2.1.2.6 繁育系统的检测 |
| 2.2 组织培养和转基因蓝猪耳繁殖能力与结实规律的研究 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.1.1 材料培养 |
| 2.2.1.2 种子表面消毒及无菌苗播种 |
| 2.2.1.3 无菌苗移栽 |
| 2.2.1.4 培养条件 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.2.1 花粉活力计数 |
| 2.2.2.2 人工授粉 |
| 2.2.2.3 扫描电镜观察 |
| 2.2.2.4 不同组培继代次数的花粉活力的测定 |
| 2.2.2.5 转基因苗的筛选与鉴定 |
| 2.2.2.5.1 Hyg 抗性筛选 |
| 2.2.2.5.2 GUS 染色检测 |
| 2.2.2.5.3 转基因植株的分子生物学鉴定 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 室内蓝猪耳传粉机制的研究 |
| 3.1.1 开花物候的观察 |
| 3.1.1.1 开花物候特性 |
| 3.1.1.2 光周期对蓝猪耳现蕾的影响 |
| 3.1.2 蓝猪耳开花之后雄蕊和柱头的变化过程 |
| 3.1.3 花粉活性和柱头的可受性 |
| 3.1.4 单花花粉量、胚珠数及花粉/胚珠比率 |
| 3.1.5 花粉组织化学分析 |
| 3.1.6 繁育系统 |
| 3.2 组织培养和转基因蓝猪耳繁殖能力与结实规律的研究 |
| 3.2.1 转基因继代苗结实规律研究 |
| 3.2.1.1 转基因继代苗后代无法结实 |
| 3.2.1.2 转基因植株花粉粒、柱头的形态结构以及花粉长度测量 |
| 3.2.1.3 花粉和柱头进行鉴定 |
| 3.2.1.4 不同转基因苗继代后花粉活力 |
| 3.2.2 组织培养苗结实规律研究 |
| 3.2.2.1 不同继代次数组织培养苗花粉活力 |
| 3.2.3 杂交后代的纯化及分子生物学鉴定 |
| 3.2.3.1 杂交 |
| 3.2.3.2 Hyg 抗性植株的筛选 |
| 3.2.3.3 鉴定 |
| 3.2.3.3.1 PCR 鉴定 |
| 3.2.3.3.2 GUS 染色检测 |
| 3.2.3.3.3 F_1 代抗性植株花粉活力 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 蓝猪耳的传粉机制决定室内不结实 |
| 4.2 蓝猪耳转基因继代苗后代不结实的原因 |
| 4.2.1 出现雄性不育 |
| 4.2.2 组培苗继代对花粉活力的影响 |
| 4.2.3 转基因继代苗出现雄性不育的原因 |
| 4.2.3.1 植物激素与雄性不育关系 |
| 4.2.3.2 生长素与雄性不育 |
| 4.2.3.3 细胞分裂素与雄性不育 |
| 4.2.3.4 激素的平衡与雄性不育 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 图版 |
| 致谢 |
（10）蓝猪耳叶片高频率再生体系的建立（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同浓度植物生长物质组合对不定芽的分化及其生长状况的影响 |
| 2.2 不同培养基生根效果比较 |
| 2.2.1 IBA对生根的影响 |
| 2.2.2 MS培养基中离子浓度对生根的影响 |
| 2.3 植株移栽 |
| 3 讨论 |
四、蓝猪耳再生系统的建立（论文参考文献）
- [1]蓝猪耳和拟南芥早期胚胎发生中线粒体DNA水平的变化[D]. 高龙. 西北大学, 2018(01)
- [2]蓝猪耳离体受精初试[J]. 于金金,成诚,王雅英,张亚楠,田惠桥. 植物生理学报, 2012(10)
- [3]蓝猪耳的繁殖及其在荆州园林应用的调查分析[J]. 李德明,张秀娟,李科. 湖北农业科学, 2009(09)
- [4]蓝猪耳研究概况[J]. 李德明,张秀娟,董婷婷. 长江大学学报(自然科学版)农学卷, 2009(01)
- [5]根癌农杆菌介导蓝猪耳转化的影响因素研究[J]. 龙海涛,李洪清,李玲. 亚热带植物科学, 2008(02)
- [6]蓝猪耳研究进展[J]. 侯雷平,李梅兰. 山西农业科学, 2008(05)
- [7]蓝猪耳启动子捕获系统的建立[J]. 龙海涛,李洪清,李玲. 北方园艺, 2008(05)
- [8]蓝猪耳精、卵细胞，中央细胞，助细胞以及原胚细胞的分离[D]. 杨延红. 厦门大学, 2007(08)
- [9]蓝猪耳（Torenia fournieri Lind）育性的研究[D]. 李淑华. 华南师范大学, 2007(06)
- [10]蓝猪耳叶片高频率再生体系的建立[J]. 王瑛华,陈刚,陈雄伟. 肇庆学院学报, 2007(02)