一、3种诱导自身免疫性甲状腺炎动物模型的效果比较（论文文献综述）
沈鑫[1]（2021）在《桥本甲状腺炎不同中医证型的临床特点研究及芪龙散结方对桥本甲状腺炎大鼠免疫调节机制的研究》文中研究表明目的:研究不同证型的桥本甲状腺炎（Hashimoto thyroiditis,HT）患者甲状腺功能和甲状腺超声特点并比较差异性,为辨证治疗HT提供依据;根据益气养阴,活血化瘀,软坚散结原则组成芪龙散结方（QLSJ）,研究QLSJ治疗实验性自身免疫性甲状腺炎（experimental autoimmune thyroiditis,EAT）大鼠的药效作用和机制。方法:1.HT不同中医证型患者的临床特点研究:采用回顾性分析方法,收集符合纳入标准的临床确诊的73例HT患者的临床资料,将其分为不同证型,研究不同证型病人的甲状腺左右侧叶厚度和峡部厚度,甲状腺实质回声特点,甲功以及TPOAb和Tg Ab,分析不同证型患者的甲功和甲状腺超声的特点。2.基于益气养阴,活血化瘀,软坚散结原则,组建QLSJ,药味包括:黄芪30g,人参20g,三棱15g,莪术15g,薏苡仁15g,女贞子20g,制何首乌20g,甘草6g等。3.QLSJ对EAT大鼠的药效作用研究:6-8周龄的雌性Lewis大鼠分为对照组和模型组,适应性喂养一周后,从第二周开始,通过每日喂养0.064%高碘水和甲状腺球蛋白和完全弗氏佐剂皮下多点免疫注射的方法对模型组大鼠进行造模建立EAT模型,在第11周末,用甲状腺超声检查所有大鼠的甲状腺并用血清酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测大鼠血清TPOAb、Tg Ab、FT3、FT4表达,判断EAT模型是否成功。第12周将模型组大鼠分为:模型+蒸馏水组（EAT+WATER,12只）、模型+芪龙散结方低剂量组（EAT+QLSJ-L,16只）、模型+芪龙散结方中剂量组（EAT+QLSJ-M,16只）、模型+芪龙散结方高剂量组（EAT+QLSJ-H,18只）。从第13周开始,EAT+WATER组大鼠每日灌胃2m L蒸馏水,每日一次,连续12周;EAT+QLSJ-L组、EAT+QLSJ-M组和WAT+QLSJ H组每日按照0.15 g/Kg·d,0.30 g/Kg·d,0.60 g/Kg·d剂量给予QLSJ灌胃,每日一次,连续12周;再次对所有大鼠甲状腺进行超声检查,随后处死大鼠并取材,ELISA法测大鼠血清TPOAb、Tg Ab、FT3、FT4的水平。4.取大鼠的甲状腺组织进行称重,称量甲状腺的绝对重量和相对重量（甲状腺重量/大鼠体重）并通过H&E染色观察各组大鼠甲状腺组织病理情况。5.通过网络药理学方法预测QLSJ治疗自身免疫性甲状腺炎的机制。6.通过流式细胞术检测NC组、EAT+WATER组和EAT+QLSJ-H组外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）中CD4+IFN-γ+（Th1）,CD4+IL-4+（Th2）,CD4+IL-17A+（Th17）和CD4+CD25+FOXP3+（Treg）淋巴细胞亚群的表达。7.通过ELISA方法检测NC组、EAT+WATER组和EAT+QLSJ-H组中大鼠外周血细胞因子TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-17A、TGF-β1和IL-10的水平。结果:1.临床资料特点及分析:共纳入73例HT患者,（1）HT高发年龄为40-70岁,女性患病率较高。（2）HT主要分为气郁痰阻型、痰结血瘀型、肝郁脾虚型、气阴两虚型和脾肾阳虚兼血瘀型五种证型。（3）五种证型病人的甲状腺左右侧叶和峡部的厚度存在差异（P<0.05）,痰结血瘀型和气阴两虚型厚度最大,而气郁痰阻型、肝郁脾虚型和脾肾阳虚兼血瘀型甲状腺厚度较小;（4）五种证型甲状腺实质超声特点存在差异（P<0.05）,五种证型的回声均以弥漫性减低为主,其中痰结血瘀型患者主要以弥漫性回声减低无线状强回声为主,脾肾阳虚兼血瘀型以弥漫性回声减低有线状强回声为主;（5）五种证型的甲功分布存在差异（P<0.01）,气郁痰阻和痰结血瘀组中甲功以正常为主,气阴两虚组的甲功以甲亢为主,肝郁脾虚和脾肾阳虚组中甲功以甲减为主;（6）五种证型之间的血清FT3和FT4存在差异（P<0.05）,血清TPOAb和Tg Ab滴度没有统计学差异（P>0.05）。2.EAT大鼠模型评价:在第11周末,与NC组比较,各模型组治疗前血清FT3、FT4、Tg Ab水平和甲状腺体积均升高（P<0.01）,说明造模成功。各模型组血清TPOAb水平与正常对照组比较没有统计学差异（P>0.05）。3.QLSJ药效作用研究:治疗前后Tg Ab改变的比较:EAT+QLSJ-L组大鼠的Tg Ab在治疗前后无变化（P>0.05）,EAT+QLSJ-M组和EAT+QLSJ-H组大鼠灌胃后Tg Ab均下降（P<0.01）,但两组之间相比没有统计学意义（P>0.05）。治疗前后大鼠甲状腺体积减少的比较:QLSJ各个剂量组大鼠的甲状腺体积在治疗后均减小（P<0.05或者P<0.01）,效果呈剂量依赖性,EAT+QLSJ-H组较EAT+QLSJ-M组大鼠甲状腺体积缩小更明显,两组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。各组大鼠的血清FT3、FT4和TPOAb在治疗前后无变化（P<0.05）。治疗后甲状腺重量:相比于EAT+WATER组,QLSJ L组的绝对重量和相对重量均无明显变化（P>0.05）;与QLSJ M组相比,QLSJ H组的甲状腺绝对重量无统计学意义改变,但是相对重量降低（P<0.05）。治疗后甲状腺H&E切片:NC组为正常甲状腺组织,EAT+WATER组大鼠甲状腺中可见大量炎性细胞浸润,说明造模成功。EAT+QLSJ-L组大鼠甲状腺组织滤泡大量破坏,滤泡腔内和间质可见大量淋巴细胞浸润;EAT+QLSJ-M、EAT+QLSJ-H组中甲状腺淋巴细胞浸润范围明显缩小,程度明显减轻。4.网络药理学分析结果:QLSJ是一种多成分多靶点的中药复方,可能通过调节免疫发挥治疗作用。5.大鼠PBMCs中Th1,Th2,Th17和Treg淋巴细胞亚群的表达:EAT+WATER大鼠的Th1表达相比于NC组大鼠显着升高（P<0.01）,Treg表达下降（P<0.01）;EAT+QLSJ-H组大鼠的Th1水平显着下降（P<0.05）,Treg水平升高（P<0.05）。6.EAT组大鼠血清中TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-17A水平显着高于NC组（P<0.01）,TGF-β1、IL-10表达水平显着下降（P<0.01）;QLSJ治疗后TNF-α、IL-6、IFN-γ、IL-17A表达水平显着下调（IL-6、IL17A为P<0.01;TNF-α和IFN-γ为P<0.05）,IL-10、TGF-β1表达水平提高（P<0.05）。结论:1.不同证型的HT患者的甲状腺超声特征和甲功存在差异,桥本甲状腺炎病程中存在病机转化,疾病过程中及时干预可能阻止病机进展;痰结血瘀、气阴两虚患者患病率高,甲状腺厚度大,针对该两种证型治疗可能具有重要的临床意义。2.根据益气养阴,活血化瘀,软坚散结原则组建QLSJ,QLSJ 0.15 g/Kg·d,0.30g/Kg·d和0.60 g/Kg·d呈剂量依赖性降低甲状腺体积,0.30 g/Kg·d和0.60 g/Kg·d可显着降低EAT大鼠血清Tg Ab水平,甲状腺重量,减轻甲状腺内炎细胞浸润。3.QLSJ调节大鼠PBMCs中的Th1和Treg淋巴细胞亚群水平,调控血清中TNF-α、IL-6、IL-17A、TGF-β1和IL-10水平,发挥免疫调节和抗炎的作用。4.益气健脾,兼以养阴、化痰散结法对EAT大鼠模型具有治疗作用和免疫调节作用。
李祎楠[2]（2021）在《基于“神形统一观”探讨逍遥散加味治疗桥本病的临床疗效及机制研究》文中提出目的:本研究包括临床研究、动物实验和理论探讨三个部分。临床研究是辽宁省中医药临床学（专）科能力建设项目课题——经方逍遥散加味治疗慢性淋巴细胞甲状腺炎亚临床期的多中心、随机对照研究的一部分,基于张兰教授研制的具有疏肝健脾功效的中药复方——逍遥散加味,从主客观评价该药治疗桥本甲状腺炎亚临床期患者的疗效,并通过动物实验建立EAT肝郁脾虚模型,从mi RNA326调控Th17细胞分化角度探讨逍遥散加味的疗效机制。理论部分以神形统一观为基础,提出神形失和即肝郁脾虚是桥本甲状腺炎亚临期的病机核心,以疏肝健脾为法通过调神养形达到神形统一。为桥本病亚临床期的治疗提供科学依据及治疗药物,丰富了中医既病防变理论在临床应用的指导作用。方法:1临床研究:本课题临床研究采用随机、阳性药对照方法,针对HT亚临床期、辨证为肝郁脾虚证的桥本甲状腺炎患者,随机分为治疗组和对照组,在限制含碘食物摄入,戒烟、限制饮酒、增加运动量、调整饮食结构、控制体重生活干预的基础上,治疗组予逍遥散加味颗粒剂,一次二袋（一袋约15g）,一日3次开水冲服;对照组予金水宝片,一次4片,一日3次口服。两组的疗程均为12周。首先,通过两组临床试验数据,观察逍遥散加味对HT亚临床期患者甲状腺自身抗体滴度下降率和中医症状指数等判定标准的影响,评价逍遥散加味治疗肝郁脾虚型桥本甲状腺炎患者的疗效;其次,研究110例患者治疗前TGAb滴度值（应变量）,与年龄、BMI、T细胞亚群及相关细胞因子、血细胞簇分化抗原及中医症状积分等多个自变量之间的多重回归关系,分析其相关性;最后,研究根据甲状腺双抗体滴度下降率的疗效判定标准,将TGAB或TPOAB滴度下降率≥30%的患者视为有效病例,划入有效病例组,TGAB或TPOAB滴度下降率<30%的患者则为无效病例,划入无效病例组。分别比较两组患者治疗前各个指标的差异。为了进一步检验有差异的观察指标与是否有效之间的相关性,寻求它们之间的关系,我们选择二元logistic回归模型,将是否有效作为因变量（赋值无效为1,有效为0）,将有差异的指标作为自变量,进行二元logistic回归分析。通过logistic回归统计方法分析影响逍遥散加味治疗肝郁脾虚型HT疗效的因素,初步明晰其作用靶点。2动物实验:以SPF级大鼠为载体,通过高碘诱发结合异源性甲状腺抗原免疫法诱导EAT大鼠模型,在EAT大鼠模型基础上,采用慢性束缚应激+过度疲劳+饮食失节的方法复制出类中医肝郁脾虚证的大鼠模型,建立EAT肝郁脾虚大鼠模型,造模成功后的大鼠随机分为三组,分别为模型组、逍遥散组及金水宝片组,并与正常SPF级大鼠（正常组）比较,采用HE染色法观察各组大鼠甲状腺组织的变化,采用酶联免疫吸附法测定各组大鼠外周血FT3、FT4、TSH、TGAb、TPOAb,采用RT-PCR检测法检测各组大鼠甲状腺组织mi R326、IL-4m RNA、IL-17m RNA、IFN-γm RNA基因表达,采用Wes法检测各组大鼠甲状腺组织中蛋白Ets-1的表达水平,运用流式细胞技术检测大鼠脾组织中的CD4+IFN-γT细胞、CD4+IL-4 T细胞、CD4+IL-17 T细胞的分泌情况。所有实验数据用SPSS.22软件进行统计学处理。3理论探讨:根据HT亚临床期肝郁脾虚的病机核心,试从“神形统一观”为切入点,结合现代医学阐述从肝脾肾论治桥本病亚临床期的理论内涵,为临床防治HT提供新思路。结果1临床试验结果:（1）治疗前两组一般性资料比较,性别、年龄、BMI等指标组间差异均无统计学意义（P>0.05）,即两组基线资料一致,具有可比性。（2）治疗组与对照组药物治疗前后外周血FT3、FT4和TSH的比较:两组组内比较,治疗后血清FT3、FT4、TSH较治疗前无统计学差异（P>0.05）;组间与对照组比较结果示,治疗组患者血清TGAb、TPOAb较对照组差异无统计学意义（P>0.05）。（3）治疗组与对照组药物治疗前后外周血TGAB、TPOAb及下降幅度的比较:两组组内比较,治疗后血清TGAb、TPOAb较治疗前显着下降（P<0.01）;组间与对照组比较结果示,治疗组患者血清TGAb、TPOAb较对照组下降显着（P<0.01）。与对照组相比,治疗组患者血清TGAb下降幅度显着（P<0.01）,而其血清TPOAb下降幅度与对照组相当（P>0.05）。（4）治疗组与对照组药物治疗前后单项中医症状积分及中医症状积分统计比较:治疗前两组受患者的单项中医症状评分和中医症状积分均无明显差异（P>0.05）,具有可比性。治后两组内比较,治疗组在甲状腺肿大、周身乏力、胸胁胀满、情绪不宁、便溏、舌象、脉象等临床症状方面和中医症状积分较治疗前均显着改善（P<0.01）;对照组单项症状在除周身乏力以外均有改善,且差异具有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。两组间比较,治疗组单项中医症状积分的改善程度及中医症状积分较对照组改善明显（P<0.01）,具有统计分析上的意义。（5）TGAB、TPOAb滴度下降率疗效判定结果的比较:治疗组总有效率为74.55%,对照组总有效率52.73%,治疗组疾病总有效率明显高于对照组（P<0.05）。（6）两组单项中医症状疗效评定结果的比较由表3-2可知,治疗组在改善肝郁脾虚主症“便溏”和“舌象”的疗效与对照组有差异,且差异有统计学意义（P<0.05）;而在改善甲状腺肿大、周身乏力、胸胁胀满、情绪不宁、脉象等症状的有效率分别为81.82%、89.09%、78.18%、87.27%和85.45%,明显高于对照组的65.22%、52.17%、50.00%、64.71%、64.00%和71.43%,两组差异具有统计学意义（P<0.01）。（7）两组中医症状综合疗效评定结果的比较:表3-3示治疗组总体有效率为93.36%,对照组总体有效率30.91%,经卡方检验,治疗组中医症状积分总有效率明显高于（P<0.01）对照组。提示逍遥散加味改善中医症状的疗效优于金水宝片。（8）110例患者治疗前血清TGAb与各指标的多重线性回归:治疗前110例患者血清TGAb滴度值与Th17、CD4+T细胞百分比、CD16+CD56+NK细胞百分比、CD19+B细胞百分比、中医症状积分5个指标与血清TGAB滴度间存在相关关系（P<0.05）,其中Th17、CD4+T细胞百分比、CD19+B细胞百分比、中医症状积分与治疗前TGAb间呈正相关（r>0,P<0.05）,CD16+CD56+NK细胞百分比与治疗前TGAb间存在负相关（r<0,P<0.05）,其余指标与治疗前TGAb间无明显相关性（P>0.05）。（9）治疗组55例患者不同疗效组别间治疗前各指标比较:治疗组55例患者不同疗效组别间各指标比较,有效病例和无效病例两组间Th17、CD19+B细胞百分比、CD16+CD56+NK细胞百分比、中医症状积分4个指标差异有统计学意义（P<0.05）,且无效组Th17、CD4+T细胞百分比、中医症状积分显着高于有效组,无效组CD16+CD56+NK细胞百分比显着低于有效组。其余指标的两组间比较差异均无统计学意义（P>0.05）。Logistic回归结果显示,治疗组患者血清Th17表达水平与无疗效之间存在显着正相关关系（P<0.05）;CD16+CD56+NK细胞百分比与有无疗效之间存在负相关关系（P<0.05）,二者均是影响疗效的独立危险因素（OR>1）,即血清Th17水平越高、CD16+CD56+NK细胞百分比越低,患者治疗后无效的概率越高。而CD19+B细胞百分比和中医症状积分与疗效之间无显着相关性（P>0.05）。（10）不良反应事件:治疗组与对照组在临床观察中,治疗前后心电图、血尿常规、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血肌酐等肝肾功能指标均未出现异常,两组均无不良事件的发生。2动物实验结果（1）成功构建EAT模型:造模8周时测定大鼠血清甲功五项,与正常组相比,造模组大鼠TSH表达水平明显降低（P<0.01）,提示大鼠处于亚临床甲亢期;TGAb、TPOAb的表达水平显着升高,且升高水平大于正常组均值的2倍,提示EAT造模成功。36只大鼠中有3只鼠的甲状腺自身抗体小于正常组抗体均值的2倍,遂予剔除。造模组与正常组FT3、FT4表达水平无统计学差异（2）成功构建脾虚模型大鼠:与正常组比较,造模组大鼠体质量增长率显着下降（P<0.01）。摄食量显着降低（P<0.01）,粪便含水率显着升高（P<0.01）,提示大鼠存在脾虚症状。（3）成功构建肝郁模型大鼠:造模8周后,与正常组相比,造模组大鼠5min运动总距离和中央穿格数差异具有显着统计学差异（P<0.01）;造模组大鼠中央区运动总距离、中央区停留时间与正常组差异无统计学意义（P>0.05）,但大鼠中央区运动总距离较正常组降低,停留时间较正常组延长,提示大鼠肝郁模型成功。（4）以上结果表明有33只大鼠成功构建成EAT肝郁脾虚模型,成模率达91.67%。进一步对33只EAT肝郁脾虚模型大鼠随机分成模型组、逍遥散组和金水宝组进行药物干预。药物干预阶段5只大鼠死亡,其中逍遥散加味组死亡3只,金水宝片组死亡2只。对死亡大鼠进行尸检发现除肺部有残留药物,其余组织未见明显异常。8周后进行后续药效与机制的实验研究。（5）对实验各组大鼠一般行为观察发现,正常组进食饮水正常,大鼠毛色亮泽,精神状态良好,行动灵敏,大便色深量多且颗粒饱满,外观行为未见异常;模型组大鼠造模前束缚时性情暴躁、易怒,挣扎反抗并伴有嘶叫声,束缚解除后迅速躲避、背毛竖立。模型组大鼠造模后期出现外界刺激反应迟缓表现,挣扎持续时间明显减少,喜扎堆聚集,同时伴并懒动、眯眼倦怠等症状,毛色无光泽,食少,大便色浅质软,颗粒变小,甚至便溏。灌胃治疗后,逍遥散加味组和金水宝组大鼠一般状况较模型组大鼠进食情况,情绪、毛色等一系列外观行为明显改善。（6）通过8周治疗,各组大鼠血清FT3、FT4表达水平无统计学差异。经检测模型组血清TSH的表达与正常组相比显着降低（P<0.01）,给予药物治疗后,逍遥散组大鼠血清TSH表达水平明显上调,与模型组相比具有统计学意义,而金水宝组大鼠血清TSH表达水平却无显着变化,且逍遥散组大鼠血清TSH的表达明显高于金水宝组且具有统计学意义。与正常组相比,模型组大鼠血清TGAb和TPOAb表达水平显着升高（P<0.01）;给予逍遥散或金水宝治疗后,血清TGAb和TPOAb表达水平显着下降,与模型组相比具有统计学意义（P<0.01）,且逍遥散组大鼠血清TGAb和TPOAb表达水平与金水宝组相比虽不具有统计学意义,但有下调的趋势。以上结果均表明逍遥散加味可以显着升高大鼠TSH表达水平,同时可以显着降低TGAb、TPOAb水平,且治疗效果优于金水宝片。（7）通过8周药物治疗后,分别对各组大鼠甲状腺组织mi R326的表达和IL-4、IL-17以及IFN-γm RNA的表达进行检测,发现模型组大鼠mi R326的表达以及IL-17 m RNA的表达明显高于正常组,且具有统计学意义（P<0.01）。给予逍遥散加味或金水宝片后mi R326的表达和IL-17 m RNA的表达显着下调,且逍遥散组mi R326的表达和IL-17m RNA的表达明显低于金水宝组。而各组大鼠甲状腺组织的IL-4和IFN-γm RNA表达水平无统计学差异。以上结果表明逍遥散加味可以显着降低mi R326的表达以及IL-17m RNA的表达水平,且逍遥散加味的药效明显优于金水宝片。（8）T淋巴细胞异常是自身免疫性疾病的原因之一。自身免疫相关的效应T细胞包括Th1,Th2和Th17细胞,它们分别分泌细胞因子IFN-γ,IL-4和IL-17。为了确定逍遥散加味是否可以对效应T细胞有影响,我们测量了大鼠脾脏Th1,Th2和Th17细胞的比例。CD4+IFN-γ+T细胞,CD4+IL-4+T细胞和CD4+IL-7+T细胞分别代表Th1细胞,Th2细胞和Th17细胞。模型组大鼠脾组织Th1和Th17细胞的比例明显高于正常组,且差异有统计学意义（P<0.01）,这也与IL-17 m RNA水平升高一致,而IFN-γm RNA水平各组则没有差异。Th2细胞的比例在各组间也没有差异,这与IL-4 m RNA在各组之间的表达水平一致。以上结果表明了Th17细胞可能参与了桥本甲状腺炎疾病的发病机制。经给予金水宝进行治疗后虽然减少了Th1细胞的比例,但没有统计学意义。而给予逍遥散加味药物治疗后,大鼠脾组织Th1和Th17细胞的比例显着下降（P<0.01）,且逍遥散组Th17细胞的比例明显低于金水宝组（P<0.01）。以上结果表明逍遥散加味可以通过调节Th17细胞对桥本甲状腺炎有治疗作用,且对Th17细胞的调控作用明显优于金水宝片。（9）采用Wes法检测四组大鼠甲状腺Ets-1蛋白的表达情况,与正常组相比,模型组大鼠Ets-1蛋白的表达显着下调,且具有统计学意义（P<0.01）。给予逍遥散加味或金水宝片治疗后Ets-1蛋白的表达明显升高,且与金水宝组相比,逍遥散组对Ets-1蛋白的表达的上调作用更为显着（P<0.01）。以上结果表明逍遥散加味可上调mi R326下游靶蛋白Ets-1表达水平。（10）为了检测逍遥散加味对EAT肝郁脾虚模型大鼠甲状腺病理形态的影响,我们对四组大鼠甲状腺组织切片进行了HE染色。正常组大鼠甲状腺结构完整,滤泡大小及形态规则,无明显淋巴浸润;模型组甲状腺组织结构不完整,大量滤泡萎缩,滤泡腔及间质组织可见大量淋巴细胞浸润;逍遥散加味组大鼠甲状腺组织滤泡腔扩大,部分滤泡结构破坏,滤泡腔内及周围有少量淋巴细胞浸润,程度较模型组轻;金水宝片组大鼠甲状腺组织结构不完整,病理形态与逍遥散加味组类似,其淋巴细胞浸润程度重于逍遥散加味组。以上结果表明逍遥散加味可减少EAT肝郁脾虚模型大鼠甲状腺组织的炎症反应,并对甲状腺组织具有保护作用。3理论探讨:（1）“神形”涵义之源流考;（2）形神失和与肝郁脾虚关系的阐述;（3）以“神形统一观”从肝脾肾论治桥本病的理论内涵。结论:1逍遥散加味可有效降低HT患者甲状腺相关自身免疫性抗体的滴度,减轻患者中医症状积分,可能参与减轻炎症反应,调节患者免疫功能。外周血中Th17表达水平和CD16+CD56+NK细胞百分比是逍遥散加味早期干预肝郁脾虚HT临床患者的独立疗效预测指标。临床早期应用于辨证干预HT的中药复方—逍遥散加味具有良好的有效性和安全性。2逍遥散加味散可通过降低EAT肝郁脾虚大鼠甲状腺组织中mi R326的表达,上调靶蛋白Ets-1的表达,从而抑制Th17细胞的分化,减少IL-17 m RNA的表达,降低炎症反应,最终对甲状腺组织产生保护作用。3“神”紊乱参与了HT的发病,并且可能是诱发HT患者肝气郁结的潜在病因。脾肾不足导致“形”的损伤,可能是HT发病的基础。最后,从疏肝健脾为主治疗角度诠释“神形统一观”的理论内涵。
张程斐[3]（2021）在《基于转录组测序研究甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠的机制影响》文中提出目的:通过观察甲炎康泰复方颗粒对自身免疫性甲状腺炎（AIT）大鼠的保护作用,并基于转录组对大鼠甲状腺组织测序,探讨甲炎康泰对甲状腺组织起保护作用的相关靶点及通路,为临床应用提供实验依据。方法:高碘饮水诱导和猪甲状腺球蛋白佐剂注射Lewis大鼠建立AIT模型大鼠40只,造模成功后,按血清TPOAb浓度随机分为模型组、甲炎康泰低（0.708g/kg）、中（1.417g/kg）、高（2.834g/kg）剂量组,每组10只。正常组与模型组大鼠给予1ml/100g的双蒸水,甲炎康泰三剂量组给予中药复方颗粒剂连续灌胃给药8周。药物干预结束后取材,检测大鼠血清中T3、T4、FT3、FT4、TSH、TGAb、TPOAb及TRAb的浓度;超低温取单侧甲状腺组织放入4%多聚甲醛中固定,用于HE染色与免疫组化检测,另一侧甲状腺组织迅速放入液氮中,待提取RNA,行转录组测序与RT-PCR检测;LC/MS检测甲炎康泰组分;RT-PCR检测甲状腺组织内Jak2、STAT3和HIF-1α mRNA的表达水平;免疫组化检测甲状腺组织中p-Jak2、p-STAT3和HIF-1α IOD/Area值的变化。细胞实验采用雌性lewis大鼠20只,按体重随机分为:正常组（给予双蒸水）和甲炎康泰组（高剂量颗粒剂2.834g/kg）,每组10只。连续给药7天后麻醉取血获得含药血清。IFN-γ干预Nthy-ori 3-1细胞24h建立自身免疫性甲状腺炎细胞损伤模型,含药血清干预后,CCK-8法检测细胞活性;免疫荧光与Western blot法分别检测p-Jak2、p-STAT3和HIF-1α的荧光强度以及蛋白表达情况,验证动物实验结果。结果:1.LC/MS检测:甲炎康泰组分结果得到代谢产物10122个,其中负离子数1870个,正离子数8252个。Score评分得到了最高的10个代谢物。2.甲功检测:与正常组相比,模型组T3,T4,FT3,FT4均显着性升高（P<0.01）,TSH降低（P<0.01）。经甲炎康泰干预后,与模型组相比:低剂量组T3,T4,FT3,FT4下降及TSH上升但无明显差异;中剂量组T3（P<0.0 5）,FT3（P<0.01）,FT4（P<0.01）下调明显但TSH上升无统计学差异;高剂量组T3,T4,FT3,FT4下降以及TSH上升均具有显着性差异（P<0.01）。3.抗体检测:与正常组相比,模型组TGAb、TPOAb及TRAb均显着性升高（P<0.01）。经甲炎康泰干预后,与模型组相比:低、中剂量组TGAb、TPOAb均明显降低（P<0.01）;高剂量组TGAb、TPOAb及TRAb均降低,且具有统计学差异（P<0.01）。4.形态学检测:正常组可见大量完整甲状腺滤泡,大小适中,腔内红色胶质充盈均匀,滤泡上皮细胞完整;模型组甲状腺滤泡间质呈弥漫性淋巴细胞浸润,大量滤泡腔被破坏或变小,腔内胶质分布不均或减少,滤泡壁变薄、破坏;3个治疗组甲状腺滤泡间质内淋巴细胞浸润较模型组明显减少,滤泡上皮细胞较为完整,胶质含量略减少,但较模型组轻微,滤泡结构完整。高剂量组略好于低、中剂量组。5.转录组检测:通过测序得出甲炎康泰可对自身免疫性甲状腺炎大鼠产生49个差异表达基因,其中16个下调基因,33个上调基因。GO富集分析中得到两个免疫相关差异表达基因:Dnase113和JAK3,甲炎康泰可能通过上调Dnase113和下调JAK3在甲状腺组织中的表达,以缓解了甲状腺组织内的炎症反应以及相关免疫反应。KEGG富集分析中,缺氧诱导因子HIF-1信号通路在甲炎康泰组下调趋势中富集得分最高且具有明显差异。除此之外,Jak-STAT信号通路,表皮生长因子受体信号通路,原发性免疫缺陷以及坏死性凋亡都与自身免疫性甲状腺炎具有一定的相关性。6.PT-PCR检测:与正常组比较,模型组Jak2、STAT3和HIF-1αmRNA相对表达量皆显着性上调（P<0.01）;与模型组比较,甲炎康泰高剂量组Jak2（P<0.05）、STAT3（P<0.01）和 HIF-1α（P<0.05）均下调。7.免疫组化检测:比较各组平均光密度值IOD/Area,与正常组比较,模型组大鼠甲状腺组织内有较多p-Jak2、p-STAT3和HIF-1α蛋白表达（P<0.01）。与模型组比较,p-Jak2、p-STAT3和HIF-1α蛋白于甲炎康泰高剂量组表达降低（P<0.05）。8.甲状腺细胞免疫荧光和Western blot检测结果:甲炎康泰组甲状腺细胞活性较模型组显着升高;免疫荧光和Western blot显示,与正常组比较,模型组p-Jak2/Jak2,p-STAT3/STAT3以及HIF-1 α/β-actin表达值均显着性上调（P<0.01）以及其对应的荧光强度也有增加（P<0.01）;与模型组比较,甲炎康泰组p-Jak2/Jak2,p-STAT3/STAT3以及HIF-1α/β-actin表达值均有下调（P<0.05或P<0.01）以及其对应的荧光强度也有下降（P<0.05 或P<0.01）。结论:1.甲炎康泰可一定程度上纠正甲状腺功能和缓解甲状腺结构损伤,可能与其降低循环TGAb、TPOAb及TRAb浓度有关。2.甲炎康泰可能通过上调Dnase113和下调JAK3 mRNA在甲状腺组织中的表达,以缓解了甲状腺组织内的炎症反应以及相关免疫反应;同时,甲炎康泰可能下调HIF-1α信号通路、Jak-STAT信号通路、原发性免疫缺陷信号通路以及坏死性凋亡信号等通路在甲状腺中的表达,以缓解AIT的发展。3.甲炎康泰可能抑制了甲状腺组织中Jak2/STAT3/HIF-1α通路进而缓解了 AIT的发展。4.甲炎康泰对甲状腺细胞具有一定保护作用,可能通过下调p-Jak2/Jak2,p-STAT3/STAT3以及HIF-1α/β-actin的表达及其对应的荧光强度有关,提示甲炎康泰对Jak2/STAT3/HIF-1 α通路有确切的抑制作用。
牧亚峰[4]（2021）在《基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨芪箭消瘿方对AIT大鼠肠道菌群及肠黏膜屏障的影响》文中进行了进一步梳理目的:1.通过建立自身免疫性甲状腺炎（AIT）动物模型,研究芪箭消瘿方对AIT大鼠TLR4/My D88/NF-κB信号通路及甲状腺炎症损伤的作用。2.以肠道为切入点,探讨芪箭消瘿方对AIT大鼠肠道菌群及肠黏膜屏障的影响。方法:采用猪甲状腺球蛋白与弗氏佐剂皮下免疫注射联合高碘水喂养制备AIT大鼠模型,并随机分为对照组、模型组、硒酵母组及芪箭消瘿方低、中、高剂量组。自实验第7周开始,各组大鼠每天灌胃给药,连续给药6周,于实验第12周结束后行标本采集。H&E染色观察各组大鼠甲状腺组织的病理改变和结肠组织肠黏膜形态的病理改变;透射电镜观察结肠上皮细胞超微结构;ELISA检测各组大鼠血清FT3、FT4、TGAb、TPOAb、TNF-α、IFN-γ、IL-10水平及结肠组织s Ig A含量变化;RT-PCR技术检测各组大鼠甲状腺组织TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA表达;Western blotting检测各组大鼠甲状腺组织TLR4、My D88、IKKβ、p IKKβ、NF-κB p65蛋白表达以及结肠组织ZO-1、Occludin蛋白表达;16S r RNA高通量测序技术检测及分析各组大鼠肠道菌群的变化。结果:1.实验一芪箭消瘿方对自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺炎症损伤的影响1.1 ELISA结果显示:模型组大鼠血清FT3、FT4、TGAb、TPOAb、TNF-α、IFN-γ含量增加。与模型组相比,硒酵母组及芪箭消瘿方低、中、高剂量组大鼠血清FT3、FT4、TGAb、TPOAb、TNF-α、IFN-γ水平下降,说明各药物能够抑制AIT大鼠甲状腺功能,下调甲状腺自身抗体及促炎细胞因子水平。1.2 H&E染色结果显示:模型组大鼠甲状腺滤泡结构破坏,滤泡腔萎缩,可见淋巴细胞浸润,甲状腺组织炎症评分增高。经硒酵母及不同剂量芪箭消瘿方干预后,甲状腺滤泡结构完整性有不同程度恢复,淋巴细胞浸润程度减轻,甲状腺组织炎症评分也逐渐下降。结果表明芪箭消瘿方能够改善AIT大鼠甲状腺组织炎症损伤。2.实验二芪箭消瘿方对自身免疫性甲状腺炎大鼠TLR4/My D88/NF-κB信号通路的影响2.1 RT-PCR结果显示:模型组大鼠甲状腺组织TLR4 m RNA、My D88 m RNA、NF-κB p65 m RNA表达增加。与模型组相比,硒酵母组及芪箭消瘿方中、高剂量组甲状腺组织TLR4 m RNA、My D88 m RNA、NF-κB p65 m RNA表达减少,而芪箭消瘿方低剂量组表达虽然减少,但没有统计学差异。2.2 Western blotting结果显示:模型组大鼠甲状腺组织TLR4、My D88、IKKβ、p IKKβ、NF-κB p65蛋白表达增加。与模型组相比,硒酵母组及芪箭消瘿方中、高剂量组甲状腺组织TLR4、My D88、IKKβ、p IKKβ、NF-κB p65蛋白表达减少,而芪箭消瘿方低剂量组表达虽然减少,但没有统计学差异。3.实验三芪箭消瘿方对自身免疫性甲状腺炎大鼠肠道菌群的影响3.1物种多样性结果:模型组Shannon、Simpson、chao、ace指数上升,但统计学差异均不显着,表明AIT大鼠肠道菌群物种多样性增加、丰度升高,存在菌群过度生长。与模型组相比,硒酵母组Shannon、Simpson、chao、ace指数增加,而芪箭消瘿方低、中、高剂量组Shannon、Simpson、Chao、Ace指数下降。对照组和模型组在PC1水平上呈明显分开,硒酵母组及芪箭消瘿方低、中、高剂量组在PC1水平上偏离模型组的距离逐渐增大,说明各给药组大鼠肠道菌群组成结构发生显着变化。3.2门水平物种组成:在门水平（Phylum）上,各组大鼠肠道菌群主要包括厚壁菌门Firmicutes、拟杆菌门Bacteroidetes、变形菌门Proteobacteria、柔膜菌门Tenericutes及放线菌门Actinobacteria等主要门类,前3种为优势菌门。模型组大鼠厚壁菌门Firmicutes及厚壁菌门Firmicutes与拟杆菌门Bacteroidetes比值（F/B）比例升高,拟杆菌门Bacteroidetes比例下降。硒酵母组及芪箭消瘿方低、中、高剂量组厚壁菌门Firmicutes比例及F/B值下降,拟杆菌门Bacteroidetes比例上升。3.3属水平物种组成:在属水平（Genus）上,各组大鼠肠道菌群主要包括Muribaculaceae、瘤胃球菌属Ruminococcaceae、毛螺菌属Lachnospiraceae、乳酸杆菌属Lactobacillus、拟杆菌属Bacteroides、克里斯滕森菌属Christensenellaceae、普雷沃氏菌属Prevotellaceae、罗姆布茨菌属Romboutsia等,其中乳酸杆菌属Lactobacillus与普雷沃氏菌属Prevotellaceae组间变化显着。模型组大鼠乳酸杆菌属Lactobacillus和普雷沃氏菌属Prevotellaceae丰度下降。硒酵母组及芪箭消瘿方低、中剂量组乳酸杆菌属Lactobacillus丰度呈不同程度回升。而芪箭消瘿方高剂量组乳酸杆菌属Lactobacillus丰度呈下降趋势,但没有统计学差异。硒酵母组及芪箭消瘿方中、高剂量组普雷沃氏菌属Prevotellaceae丰度呈下降趋势,芪箭消瘿方低剂量组成上升趋势,均没有统计学差异。3.4代谢通路预测结果:各组大鼠肠道微生物代谢功能大体相似,除未知功能外,其余代谢功能主要有碳水化合物运输和代谢、氨基酸转运和代谢、翻译核糖体结构和生物发生、DNA复制重组和修复、能量生成和转化、无机离子运输和代谢、核苷酸转运和代谢、信号转导机制、辅酶运输和代谢等功能。4.实验四芪箭消瘿方对自身免疫性甲状腺炎大鼠肠黏膜屏障的影响4.1 ELISA结果显示:模型组大鼠血清IL-10及结肠组织s Ig A水平下降。与模型组相比,硒酵母组及芪箭消瘿方低、中、高剂量组大鼠血清IL-10及结肠组织s Ig A水平升高。4.2 H&E染色结果显示:模型组大鼠结肠黏膜上皮部分断裂、不完整,黏膜隐窝形态扭曲,伴有淋巴细胞浸润。经硒酵母及不同剂量芪箭消瘿方干预后,AIT大鼠结肠黏膜完整性有所恢复,淋巴细胞浸润明显减少。4.3透射电镜结果显示:模型组大鼠结肠黏膜上皮细胞间紧密连接出现部分断裂,连接开放、疏松,桥粒密度下降,微绒毛数量减少,且排列较紊乱。硒酵母组及芪箭消瘿方低、中、高剂量组大鼠结肠黏膜细胞间紧密连接连续性均有不同程度恢复,连接更加紧密,肠上皮微绒毛数量增加,排列较模型组整齐。4.4 Western blotting结果显示:模型组大鼠结肠组织ZO-1、Occludin蛋白表达减少。与模型组相比,硒酵母组及芪箭消瘿方低、中、高剂量组大鼠结肠组织ZO-1、Occludin蛋白表达增加。结论:1.芪箭消瘿方可能通过调控AIT大鼠TLR4/My D88/NF-κB信号通路关键蛋白的表达,减少促炎细胞因子的产生,改善甲状腺滤泡结构的炎症损伤,起到保护甲状腺的作用。2.芪箭消瘿方可能通过调节AIT大鼠肠道菌群多样性及组成结构,改善肠黏膜屏障损伤而起到治疗作用。
孟繁睿[5]（2021）在《自身免疫甲状腺炎患者与小鼠的肠道菌群和血清代谢物特征及关联分析》文中认为目的:自身免疫甲状腺炎（Autoimmune thyroiditis,AIT）是最常见的器官特异性自身免疫性疾病,患者约占世界人数的5%,其中以桥本甲状腺炎（Hashimoto’s thyroiditis,HT）最为常见。导致HT发生的潜在因素虽然尚未完全阐明,但现在病理上已经确定易感基因和环境因素的相互作用是导致疾病的主要原因。近年来,随着人类对肠道菌群的认识不断深入,肠道菌群在各种疾病中产生的重要作用逐渐被人们发现。肠道中存在着人体70%的免疫细胞,发挥着强大的免疫作用,其中更是潜藏着人体内最复杂的微生态系统。近来国内外学者发现肠道菌群对自身免疫疾病的影响,肠道菌群与AIT的联系也逐渐被受到关注。NOD.H-2h4小鼠是自发性的自身免疫甲状腺炎（Spontaneous autoimmune thyroiditis,SAT）经典动物模型,高碘喂养情况下,小鼠甲状腺组织免疫病理类型与HT相似,呈现淋巴细胞浸润与滤泡细胞破坏,并伴有血清中抗甲状腺球蛋白抗体（TgAb）滴度升高,碘的作用与AIT的发展密切相关,近些年也陆续有文章报导碘元素与肠道菌群之间的关系,但碘营养、肠道菌群与AIT之间是否互有联系,目前还没有人进行探讨。本研究的目的是通过菌群测序技术探讨在人群与动物模型中,肠道菌群与AIT之间的关系。在人群实验中,明确AIT人群的肠道菌群和血清代谢特征,探讨肠道菌群与人群甲状腺相关指标之间的关联。动物实验中,研究AIT模型小鼠的肠道菌群特征,探究甲状腺炎程度、碘营养等指标与肠道菌群之间的关联情况,为肠道菌群与甲状腺疾病的进一步研究提供基础与方向。研究方法:1、HT患者临床病例对照研究:本研究第一部分以HT患者为研究对象,纳入排除上严格按照肠道菌群研究的标准,收集了HT患者（n=28）及健康志愿者（n=25）。我们记录了所有参与者的基本信息与甲状腺功能等临床指标,按照流程采集所有参与者的粪便进行16S rDNA测序,采集血液样本进行非靶向代谢组学检测。我们整合了上述所有资料,进行生物信息学统计分析。2、AIT动物模型试验:使用高碘喂养的NOD.H-2h4小鼠构建AIT模型,同时设置NOD.H-2h4小鼠的高碘干预组（HI）,以及无干预组对照组（CT）。高碘干预从小鼠出生后6周开始,干预共持续10周。干预结束后,按标准留取各组小鼠尿液与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例显着低于CT组;HI组CD4+IL-17A+TH17细胞比例显着高于CT组;HI组CD4+IFNγ+TH1细胞比例显着高于CT组（所有P<0.05）。基于16S r DNA测序的结果,我们发现HI组与对照组共有OTU607个,HI组独有OTU243个,对照组独有OTU281个,提示两组肠道菌群组成存在差异;HI组肠道菌群的α多样性较CT组降低,但不具有统计学意义;PCo A分析存在分离趋势,提示两组受试者肠道菌群存在差异;经过Lefse分析与T检验,我们共发现6个组间差异菌属;将丰度较高的肠道菌群与临床指标进行Spearman相关性分析后,我们共发现8个菌属与甲炎评分呈显着相关、13个菌属与TgAb呈显着相关;17个菌属与尿碘浓度呈显着的相关。结论:AIT患者肠道菌群在其结果及功能方面有其特征,与正常人群存在显着差异。我们的研究发现HT患者肠道菌群的改变主要集中在毛螺菌科及其下游菌属以及科林氏菌等菌属。动物模型方面,碘的干预对肠道菌群造成了显着的影响,毛螺菌科下游菌属与尿碘、TgAb、甲炎评分等指标也呈显着正相关,与人群实验相似。这可能是碘在AIT致病中发挥作用的关键点。
孙伯菊,吴丽丽,秦灵灵,张程斐,吴悠,秦帅,王明慧,刘铜华[6]（2020）在《桥本氏甲状腺炎实验模型构建研究进展》文中研究表明桥本氏甲状腺炎是一种自身免疫性疾病,临床检查以血清中TPOAb和TgAb的滴度显着增加为主,病理表现为淋巴细胞浸润、正常的甲状腺滤泡变小萎缩、间质纤维化。桥本氏甲状腺炎的实验模型构建是研究疾病的发病原因、病理机制和治疗方法的基础,本文主要从构建实验性桥本氏甲状腺炎的动物选择、动物模型构建方法、动物模型评价指标和细胞实验选择及相关机制验证方面进行综述,通过比较相关造模方式的优缺点,为相关工作者的基础研究提供参考和借鉴。
刘佳[7]（2020）在《实验性自身免疫性甲状腺炎肝郁脾虚证大鼠模型研究》文中研究表明目的:观察实验性自身免疫性甲状腺炎（EAT）肝郁脾虚病证结合模型构建过程中甲状腺功能的变化及高碘水对模型大鼠甲状腺功能的影响,并对EAT病证结合模型进行评价。材料与方法:本部分研究选取SPF级SD雌性大鼠,体重为180-220g,购买后适应性喂养1周,将大鼠随机分为正常组和模型组,正常组大鼠自然饲养,不予任何刺激。模型组大鼠采用“免疫介导+高碘水诱导联合慢性束缚应激+过度疲劳+饮食失节法”造模,从第8天开始除正常组大鼠喂养蒸馏水外,其余大鼠均饮用浓度为500mg/L的高碘水,第22天对大鼠进行初次免疫,背部多点皮下注射被完全弗氏佐剂（CFA）充分乳化的猪甲状腺球蛋白（Tg）,每只注射100μg Tg,每周注射两次。第29-56天进行加强免疫,背部多点皮下注射被不完全弗氏佐剂（IFA）充分乳化的Tg,每只注射100μg Tg,每周注射一次,同时每天上午8:00将大鼠放入束缚筒内束缚3小时,并于下午1:00将大鼠放入盛有温水的大塑料桶中游泳至力竭,且隔日禁食,隔日给足量食物。第57-84天予12只大鼠浓度为500mg/L的高碘水继续喂养,剩余大鼠予非高碘水进行喂养。造模过程中,分别于造模4周、6周、8周、10周、12周处死大鼠,检测以下指标:（1）甲状腺重量指数;（2）甲功五项;（3）肝郁脾虚相关指标。结果:1.血清甲功五项（FT3、FT4、TSH、TG-Ab、TPO-Ab）的变化:模型组大鼠血清TPOAb、TGAb水平在第4周、6周、8周、10周、12周高于正常组,差异有统计学意义（P<0.05）,且在第8周、10周、12周模型组大鼠血清TPOAb、TGAb水平明显高于正常组2倍以上,差异具有统计学意义（P<0.05）;模型组大鼠血清FT3、FT4水平在第4周时与正常组比较有升高趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;第6周时模型组大鼠FT3、FT4水平高于正常组,差异具有统计学意义（P<0.05）;第8周、10周、12周时模型组大鼠FT3、FT4水平明显高于正常组2倍以上,差异具有统计学意义（P<0.05）;模型组大鼠血清TSH水平在4周、6周、8周、10周、12周低于正常组,差异具有统计学意义（P<0.05）;EAT成模后第4周高碘水组大鼠血清FT3、FT4、TPOAb、TGAb水平明显高于非高碘水组,差异具有统计学意义（P<0.05）;而高碘水组大鼠血清TSH水平明显低于非高碘水组,差异具有统计学意义（P<0.05）。2.甲状腺重量指数的变化:模型组大鼠甲状腺重量指数持续升高,第4周高于正常组,但差异无统计学意义（P>0.05）,第6周、8周、10周、12周明显高于正常组,差异具有统计学意义（P<0.05）;EAT成模后第4周高碘水组大鼠甲状腺重量指数指数明显高于非高碘水组,差异有统计学意义（P<0.05）。3.肝郁脾虚相关指标:与正常组大鼠相比,模型组大鼠5min运动总距离和中央区穿格数、体重、摄食量、胃排空率明显小于正常组,差异具有统计学意义（P<0.05）;而粪便含水量明显大于正常组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.采用免疫介导+高碘水诱导联合慢性束缚应激+过度疲劳+饮食失节法造模第8周成功建立了EAT病证结合模型。2.EAT造模过程中第4周出现亚临床甲亢,持续到第8周时出现临床甲亢。3.成模之后继续喂养高碘水4周的大鼠与未继续喂养高碘水的大鼠比较,甲状腺功能损伤加重。
卢泽芬[8]（2020）在《AITD肾脏组织IP10的表达及盐酸吡格列酮对其作用的研究》文中指出目的:自身免疫性甲状腺病（AITD）是最常见的自身免疫性疾病之一,不仅造成甲状腺组织炎症细胞浸润、甲状腺功能异常,临床表现还涉及甲状腺外的多个组织、器官。肾脏病变是AITD较常见的器官损伤,常引起尿蛋白增加,严重病例会导致血清肌酐、尿素氮升高,被称为自身免疫性甲状腺疾病相关性肾病。但由于病变隐匿,AITD患者肾脏损伤的情况常常被忽视,针对AITD患者肾脏损伤的机制以及相关治疗的研究较少。本课题主要针对AITD肾脏损伤的炎症因子途径进行研究,探讨趋化因子IP10在AITD肾脏的表达情况,及应用盐酸吡格列酮干预对IP10在AITD小鼠肾脏的表达的作用,以期为AITD肾脏损伤的炎症因子途径以及药物治疗提供实验依据和理论支撑。方法:1.临床病例研究:收集肾内科进行肾脏穿刺的患者的病例,按照是否合并AITD分为AITD组和非AITD组,通过血清学检测对AITD组患者和非AITD组患者的甲状腺功能、甲状腺抗体、肾功能、白蛋白、24小时尿蛋白定量及血清补体C3、补体C4、Ig A、Ig M、Ig G进行比较,观察AITD是否对患者甲状腺功能以及肾脏功能产生影响,同时观察AITD对机体免疫系统的影响。利用免疫组织化学染色方法对患者肾脏穿刺组织染色,观察并对比两组患者肾脏组织趋化因子IP10及TPO染色情况。2.动物实验研究:应用异种蛋白——猪甲状腺球蛋白溶于完全弗氏佐剂,配置成2mg/m L的溶液,对6周龄C57BL/6小鼠腹部多点皮下注射进行免疫,并于2周、3周、4周、5周、6周时加强免疫。对照组小鼠给予生理盐水-完全弗氏佐剂于相同部位进行注射。6周后检验造模是否成功。将检验造模成功的AITD小鼠随机分成单纯AITD组（M组）、盐酸吡格列酮干预组（P组）,同时设置空白对照组（N组）,每组10只。实施干预方案:P组小鼠每只每日给予0.2ml 2.0mg/ml PIO羧甲基纤维素钠溶液灌胃,N组、M组小鼠每只每日给予0.2ml 5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃。干预4周后处死。应用间接酶联免疫吸附法（ELISA法）、苦味酸法、脲酶法等方法测定各组小鼠血浆甲状腺功能、甲状腺抗体、肌酐、尿素氮水平,观察各组小鼠血清学指标之间是否存在差异。应用免疫组织化学染色方法和Western blot检测各组小鼠肾脏组织IP10、TNF-α的表达,探索盐酸吡格列酮对小鼠肾脏炎症反应的作用。结果:1.与非AITD组患者相比,AITD组患者的24小时尿蛋白量显着较高（P<0.05）,其他肾脏功能指标在两组之间无明显差异（P>0.05）;2.与非AITD组患者相比,AITD组患者的血清补体C4水平较低（P<0.05）,血清Ig A、Ig M、Ig G显着升高（P<0.05）;3.与非AITD组患者相比,AITD组患者肾脏穿刺组织中TPO免疫组化染色阳性率显着较高（P<0.05）;4.与非AITD组患者相比,AITD组患者肾脏穿刺组织中IP10免疫组化染色阳性率显着较高（P<0.05）;5.对小鼠肾脏IP10、TNF-α免疫组化染色及Western blot蛋白表达检测发现,与N组相比,M组和P组IP10、TNF-α表达显着较高（P<0.05）,且P组显着低于M组,P<0.05。结论:1.TPO在AITD患者肾脏穿刺组织染色阳性,为肾脏组织遭受免疫复合物激发的免疫攻击提供了条件。2.趋化因子IP10在AITD组患者肾脏穿刺组织中染色阳性率较非AITD组显着增加,表明AITD患者肾脏组织炎症反应加剧。3.盐酸吡格列酮可有效抑制趋化因子IP10及炎症因子TNF-α在AITD小鼠肾脏的表达。
华罗刚[9]（2020）在《重型再生障碍性贫血中TRAIL对CD8+细胞功能的影响及相关机制研究》文中认为目的通过重组可溶性小鼠肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（Tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL）干预治疗免疫介导的SAA模型小鼠,观察其对SAA小鼠模型疗效;探索并建立CD8+T细胞体外刺激培养体系,分析探讨重型再生障碍性贫血（Severe aplastic anemia,SAA）中TRAIL对CD8+T细胞功能的影响及相关机制,为SAA免疫发病机理的进一步完善及开辟新的靶点治疗SAA提供基础理论。方法第一部分:建立免疫介导的SAA小鼠模型,用重组可溶性小鼠TRAIL腹腔注射干预治疗,分正常小鼠组,SAA模型组,TRAIL治疗SAA模型组,于造模第17天收获小鼠,比较观察各组小鼠右侧股骨骨髓增生程度、外周血象及骨髓细胞计数;并采用ELISA法检测各组小鼠血浆IL-2、IL-12、TNF-a、IFN-γ的表达水平。第二部分:建立免疫介导的SAA小鼠模型,取SAA小鼠的骨髓细胞,免疫磁珠分选出纯化小鼠骨髓CD8+细胞,应用抗小鼠CD3/抗小鼠CD28单抗及重组小鼠IL-2因子联合刺激体外培养CD8+细胞。分medium组,CD3/CD28刺激组,CD3/CD28+重组小鼠TRAIL干预组。采用流式细胞术（FCM）法检测SAA模型小鼠骨髓中CD8+T细胞表面功能分子CD25表达水平及CD8+T细胞的凋亡情况。第三部分:取SAA患者的骨髓细胞,免疫磁珠分选出纯化SAA患者骨髓CD8+T细胞,应用抗人CD3/抗人CD28单抗及重组人IL-2联合刺激体外培养CD8+T细胞。分medium组,CD3/CD28刺激组,CD3/CD28+重组人TRAIL干预组体外培养,FCM法检测各组培养CD8+T细胞的CD69,HLA-DR,CD25等功能活化分子表达水平,穿孔素、颗粒酶表达水平,磷酸化ZAP70分子表达水平,凋亡水平。ELISA法测定各组培养上清中IL-2、IL-12、TNF-a、IFN-γ浓度。结果第一部分:1,正常对照小鼠骨髓有核细胞增生程度90%,SAA模型小鼠骨髓有核细胞增生程度20%,TRAIL治疗组小鼠骨髓有核细胞增生程度（40%）。2,正常对照小鼠组外周血WBC,PLT,RBC分别为（4.49±0.60）×109/L、（585.4±23.8）×109/L、（9.76±0.21）×1012/L。SAA模型小鼠组分别为（0.24±0.06）×109/L、（49.4±14.34）×109/L、（4.74±0.67）×1012/L。TRAIL治疗小鼠组分别为（0.6±0.05）×109/L、（163.1±43.9）×109/L、（6.07±0.53）×1012/L。TRAIL治疗组外周血WBC,PLT,RBC数明显高于SAA模型小鼠组（P值均<0.001）。3,正常对照小鼠组、SAA模型小鼠组、TRAIL治疗组骨髓细胞计数分别为（6.185±0.3188）×107/L、（2.03±0.1317）×107/L、（2.994±0.1151）×107/L。TRAIL治疗组骨髓细胞计数明显高于SAA模型小鼠组（P<0.0001）。4,SAA模型小鼠组外周血浆IFN-γ,TNF-α,IL-2,IL-12浓度分别为（41.79±0.7982）pg/ml、（141.8±7.429）pg/ml,（25.5±0.5597）pg/ml,（90.04±2.452）pg/ml。TRAIL治疗组浓度分别为（29.52±0.7205）pg/ml、（85.93±2.781）pg/ml,（18.52±0.807）pg/ml,（77.92±1.89）pg/ml,TRAIL治疗组IFN-γ,TNF-α,IL-2,IL-12浓度明显低于SAA模型组（P均<0.01）。第二部分:1,SAA模型鼠骨髓CD8+细胞培养中CD3/CD28刺激培养组CD8+T细胞的CD25分子表达率为（18.43±1.892）%,CD3/CD28+TRAIL干预组为（6.94±0.31）%,medium组为（0.52±0.11）%。CD3/CD28刺激培养组明显高于CD3/CD28+TRAIL干预组（P<0.001）。2,CD3/CD28刺激培养组CD8+T细胞的凋亡率为（16.80±1.10）%,CD3/CD28+TRAIL干预组为（16.78±1.35）%,medium组为（0.21±0.006）%。CD3/CD28刺激培养组与CD3/CD28+TRAIL干预组比较无差异统计学意义（P=0.9817）。第三部分:1,SAA患者骨髓CD8+细胞培养中anti-CD3/CD28刺激培养组CD8+T细胞的CD69,HLA-DR,CD25分子表达率分别为（40.8±1.68）%、（71.55±1.99）%、（50.9±3.06）%。CD3/CD28+TRAIL干预组分别为（30.2±1.78）%、（59.33±2.27）%、（39.05±3.18）%。CD3/CD28刺激培养组明显高于CD3/CD28+TRAIL干预组（P均<0.01）。2,CD3/CD28刺激培养组CD8+细胞的凋亡率为（30.78±1.33）%,CD3/CD28+TRAIL干预组为（30.18±1.51）%,比较无差异统计学意义（P=0.4827）。3,CD3/CD28刺激培养组CD8+T细胞的穿孔素表达率（28.42±1.71）%,明显高于CD3/CD28+TRAIL干预组（15.53±2.29）%,（P<0.0001）。4,CD3/CD28刺激培养组CD8+T细胞的颗粒酶平均荧光强度（8465±211.6）%明显高于CD3/CD28+TRAIL干预组（7722±74.99）%,（P<0.0001）。5,CD3/CD28刺激培养组CD8+T细胞的p-ZAP70分子表达平均荧光强度（418800±16140）明显高于CD3/CD28+TRAIL干预组（302200±9796）,（P<0.0001）。6,CD3/CD28刺激组骨髓CD8+T细胞培养上清IFN-γ,TNF-α,IL-2,IL-12浓度分别为（447.7±26.61）pg/ml、（1126±40.4）pg/ml、（2434±259.5）pg/ml、（1020±54.32）pg/ml。anti-CD3/CD28+TRAIL干预组浓度分别为（281.4±21.82）pg/ml、（641.7±26.1）pg/ml、（1499±130.8）pg/ml、（768.7±28.46）pg/ml。CD3/CD28+TRAIL干预组明显低于anti-CD3/CD28刺激组（P均<0.01）。结论1,建立免疫介导SAA小鼠模型成功。与SAA模型组相比,TRAIL治疗SAA小鼠组外周血细胞及骨髓细胞数均有明显升高,TRAIL治疗SAA小鼠组血浆中IL-2、IL-12、TNF-a、IFN-γ水平较SAA模型组减低,提示重组小鼠TRAIL因子可以减轻SAA小鼠的炎症反应程度,且对再障小鼠的血象和骨髓象恢复有一定的治疗作用。2,体外扩增培养小鼠骨髓CD8+T细胞需加入anti-CD3/CD28单抗刺激。TRAIL因子可在体外下调重型再生障碍性贫血小鼠骨髓中CD8+T细胞表面CD25的表达,从而可能对CD8+T细胞功能亢进具有抑制作用,而TRAIL对于重型再生障碍性贫血小鼠骨髓中CD8+T细胞的凋亡水平并无明显影响。3,细胞体外培养实验中,重组人TRAIL因子在体外对SAA患者CD8+T细胞表面穿孔素和颗粒酶的表达水平有一定的下调作用。能一定程度上抑制CD8+细胞IL-2、IL-12、TNF-a、IFN-γ等细胞因子的分泌。对CD8+细胞的磷酸化ZAP70分子的表达水平有抑制作用,但对CD8+细胞的凋亡水平并无明显影响。4,TRAIL在SAA中可下调CD8+T淋巴细胞的ZAP-70分子磷酸化水平,抑制CD8+T淋巴细胞活化,减低其功能活化分子CD69,HLA-DR,CD25的表达水平,从而减少其分泌穿孔素,颗粒酶,IFN-γ,TNF-α,IL-2,IL-12水平。本研究揭示了重组TRAIL很可能是治疗SAA的一种富有前景的新药物,并为此新疗法提供了一定的理论基础。
柳田田[10]（2020）在《桥本甲状腺炎对妊娠小鼠额叶谷氨酸及其转运体的影响》文中研究指明目的桥本甲状腺炎（HT）是一种自身免疫性甲状腺疾病（AITD）,其特征是血清中存在高滴度的自身甲状腺抗体（TPOAb、Tg Ab）。HT常见情绪异常表现,焦虑和抑郁多见。妊娠期女性血清TPOAb抗体水平与情绪障碍有明显关系。额叶是影响情绪行为的关键大脑区域。谷氨酸（glutamic acid,Glu）是中枢神经系统要的神经递质,对焦虑与抑郁发病机制起重要作用。Glu主要依赖Glu转运体来调节维持神经细胞外的低浓度。因此,本研究拟通过建立妊娠HT动物模型,观察额叶Glu及其转运体的变化,试图探讨小鼠在妊娠状态下,HT对额叶Glu及其转运体水平的影响。方法适应性饲养50只清洁级健康NOD雌性小鼠（6周龄）1周后,随机分为两组,即正常对照组（CON组）20只、桥本甲状腺炎组（HT组）30只。将猪甲状腺球蛋白（p Tg）于HT组小鼠尾根部皮下注射制备HT小鼠模型。具体操作步骤如以下所述:在生理盐水中溶入p Tg试剂（100μl生理盐水溶解25μg p Tg粉末）,分别在一次性注射器中吸入等量弗氏完全佐剂（CFA）与p Tg溶液,接通三通管,冰浴条件下研磨至完全乳化,即将白色乳液滴于冷水中,能浮于液体表面长时间不散开。固定HT组小鼠,在小鼠尾根部1 cm处用一次性注射器皮下注射乳状剂0.1 ml。同样于CON组小鼠尾根部1 cm处注射等量不含p Tg的CFA乳化剂。14 d后将CFA替换成弗氏不完全佐剂（IFA）,与p Tg制备成乳化剂,同样操作方法在每只HT组小鼠尾根部1 cm处皮下注射0.1 ml乳化剂,在CON组注射等量不含p Tg的IFA乳化剂。造模周期49 d。造模成功后,将各组雌鼠与健康NOD雄鼠按2:1比例合笼,采取观察阴栓的方式确定妊娠模型。采用酶联免疫吸附法检测孕鼠血清促甲状腺激素（TSH）水平;电化学发光免疫分析法测定血清甲状腺激素三碘甲状腺原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）水平和甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）、甲状腺球蛋白抗体（Tg Ab）水平;制备甲状腺大体标本、HE染色法镜下观察小鼠甲状腺组织形态;通过酶联免疫吸附法检测妊娠小鼠额叶Glu浓度;Western blot法检测孕鼠额叶中囊泡谷氨酸转运体VGLUT 1和兴奋性谷氨酸转运体EAAT 2的蛋白表达水平;RT-q PCR观察孕鼠额叶VGLUT 1,EAAT 2m RNA水平的表达。结果1.两组孕鼠甲状腺抗体与激素水平:HT组血清甲状腺抗体水平（Tg Ab、TPOAb）较CON组升高（P<0.05）,两组血清甲状腺激素（T3、T4、TSH）水平差异无统计学意义;2.两组孕鼠额叶谷氨酸水平:相较于CON组,HT组孕鼠额叶谷氨酸浓度水平升高（P<0.05）;3.两组孕鼠甲状腺标本叙述及HE染色结果:较CON组而言,HT组孕鼠甲状腺标本肉眼可见其颜色加深,体积增大,质地触之较韧;甲状腺HE染色结果:HT组孕鼠甲状腺内可见部分甲状腺滤泡破坏及大量淋巴细胞浸润,CON组孕鼠甲状腺内滤泡相对完整。4.两组孕鼠额叶内谷氨酸转运体蛋白表达情况:HT组孕鼠额叶VGLUT1蛋白表达水平较CON组降低（P<0.05）,两组孕鼠额叶EAAT2的蛋白表达水平差异无统计学意义。5.两组孕鼠额叶谷氨酸转运体m RNA表达情况:与CON组相比,HT组孕鼠额叶VGLUT 1的m RNA表达降低（P<0.05）,两组孕鼠额叶内EAAT 2 m RNA表达水平差异无统计学意义。结论HT可导致孕鼠额叶Glu浓度升高,谷氨酸转运体VGLUT 1蛋白表达下降,提示了HT可导致额叶Glu代谢紊乱。
二、3种诱导自身免疫性甲状腺炎动物模型的效果比较（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、3种诱导自身免疫性甲状腺炎动物模型的效果比较（论文提纲范文）
（1）桥本甲状腺炎不同中医证型的临床特点研究及芪龙散结方对桥本甲状腺炎大鼠免疫调节机制的研究（论文提纲范文）
| 提要 |
| abstract |
| 第一部分 桥本甲状腺炎不同中医证型的甲状腺功能和甲状腺超声特点研究 |
| 引言 |
| 研究对象与方法 |
| 结果和分析 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 芪龙散结方治疗实验性自身免疫性甲状腺炎的药效作用研究 |
| 引言 |
| 实验材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 芪龙散结方治疗自身免疫性甲状腺炎大鼠的网络药理学研究 |
| 引言 |
| 研究方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第四部分 芪龙散结方通过调节CD4~+T淋巴细胞亚群治疗自身免疫性甲状腺炎大鼠的实验研究 |
| 引言 |
| 实验材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 查新报告 |
| 论文着作 |
（2）基于“神形统一观”探讨逍遥散加味治疗桥本病的临床疗效及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 经方逍遥散加味治疗桥本甲状腺炎亚临床期的随机对照临床研究 |
| 材料与方法 |
| 试验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 基于miRNA326调节Th17细胞探讨逍遥散加味干预EAT肝郁脾虚大鼠炎症反应的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 基于“神形统一观”从肝脾肾论治桥本甲状腺炎亚临床期 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附表 |
| 综述 mircoRNA靶向调控相关免疫细胞功能在自身免疫性疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（3）基于转录组测序研究甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠的机制影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一: 自身免疫性甲状腺炎的中医药研究进展 |
| 1 自身免疫性甲状腺炎的中医概念 |
| 2 自身免疫性甲状腺炎的中医病因病机 |
| 3 自身免疫性甲状腺炎的辨证分型及分期分型 |
| 4 自身免疫性甲状腺炎的中医治疗 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二: 自身免疫性甲状腺炎的研究进展 |
| 1 发病诱因 |
| 2 发病机制 |
| 3 诊断与治疗 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 综述三: STAT3/HIF1α通路在自身免疫性甲状腺炎中的研究进展 |
| 1 STAT3在免疫细胞中的作用 |
| 2 HIF1α在免疫细胞中的作用 |
| 3 STAT3/HIF1α通路在AIT中的作用 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 实验一: LC/MS分析甲炎康泰成分并对其药效进行观察 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 5 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二: 转录组分析甲炎康泰对AIT大鼠甲状腺组织的机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 5 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三: 甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠STAT3/HIF1α信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 5 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四: 甲炎康泰对Nthy-ori-3-1细胞STAT3/HIF1α信号通路的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 小结 |
| 5 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 致谢 |
（4）基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨芪箭消瘿方对AIT大鼠肠道菌群及肠黏膜屏障的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 芪箭消瘿方研究基础 |
| 1 芪箭消瘿方的历史源流 |
| 参考文献 |
| 2 芪箭消瘿方的组方分析 |
| 参考文献 |
| 3 芪箭消瘿方的各药研究 |
| 参考文献 |
| 4 芪箭消瘿方的药效依据 |
| 参考文献 |
| 第二章 实验研究 |
| 实验一 芪箭消瘿方对自身免疫性甲状腺炎大鼠甲状腺炎症损伤的影响 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 6.参考文献 |
| 实验二 芪箭消瘿方对自身免疫性甲状腺炎大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 6.参考文献 |
| 实验三 芪箭消瘿方对自身免疫性甲状腺炎大鼠肠道菌群的影响 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 6.参考文献 |
| 实验四 芪箭消瘿方对自身免疫性甲状腺炎大鼠肠黏膜屏障的影响 |
| 1.材料 |
| 2.方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 6.参考文献 |
| 结语 |
| 1.结论 |
| 2.创新点 |
| 3.不足之处 |
| 附录 |
| 附录一 文献综述 肠道菌群与自身免疫性甲状腺疾病 |
| 参考文献 |
| 附录二 攻读学位期间发表的论文及科研成果 |
| 附录三 中药配方颗粒检验报告单 |
| 附录四 甲状腺冰冻切片组织评分标准 |
| 致谢 |
（5）自身免疫甲状腺炎患者与小鼠的肠道菌群和血清代谢物特征及关联分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:自身免疫甲状腺炎患者肠道菌群与代谢组学分析 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.2 临床研究对象的确定 |
| 2.3 标本的采集与保存 |
| 2.4 人尿液碘浓度测定 |
| 2.5 甲状腺功能及甲状腺自身抗体检测 |
| 2.6 肠道菌群基因检测 |
| 2.7 人血清代谢组学检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 研究对象的基本情况 |
| 3.2 肠道菌群检测结果 |
| 3.3 代谢组学结果分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:高碘影响AIT小鼠肠道菌群的实验研究 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 2.1 主要实验试剂与仪器 |
| 2.2 实验动物的分组及模型建立 |
| 2.3 标本采集 |
| 2.4 血清中TgAb的测定 |
| 2.5 石蜡切片HE染色与定量形态学分析 |
| 2.6 鼠尿碘含量测定 |
| 2.7 流式细胞术检测小鼠脾脏Th1/Th2/Th17/Treg分群比例 |
| 2.8 小鼠肠道菌群基因检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 小鼠甲状腺相对重量 |
| 3.2 小鼠甲状腺炎情况 |
| 3.3 小鼠血清TgAb滴度 |
| 3.4 小鼠尿碘浓度 |
| 3.5 小鼠脾细胞流式结果 |
| 3.6 肠道菌群检测结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 创新性自我评价 |
| 综述 肠道菌群与自身免疫甲状腺炎研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）桥本氏甲状腺炎实验模型构建研究进展（论文提纲范文）
| 1 模型动物选择 |
| 1.1 雌性Lewis大鼠[16] |
| 1.2 雌性SD大鼠[17] |
| 1.3 雌性NOD小鼠[12] |
| 1.4 雌性C57小鼠[13] |
| 2 构建实验性HT模型的方法 |
| 2.1 动物模型诱导 |
| 2.1.1 免疫佐剂结合碘剂诱导 |
| 2.1.2 单纯性碘剂诱导 |
| 2.1.3 单纯性免疫佐剂诱导 |
| 2.1.4 质粒转染 |
| 2.2 细胞实验模型 |
| 3 实验模型评价指标 |
| 4 讨论 |
（7）实验性自身免疫性甲状腺炎肝郁脾虚证大鼠模型研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述一 桥本甲状腺炎的中西医研究进展 |
| 综述二 桥本甲状腺炎肝郁脾虚证动物模型的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（8）AITD肾脏组织IP10的表达及盐酸吡格列酮对其作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、IP10在AITD肾脏穿刺组织中的表达情况研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 诊断标准 |
| 1.1.3 研究方法 |
| 1.1.4 检测方法 |
| 1.1.5 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 肾脏活检患者中AITD的患病率 |
| 1.2.2 AITD组患者与非AITD组患者性别分布特点 |
| 1.2.3 AITD组患者与非AITD组患者年龄分布特点 |
| 1.2.4 AITD组与非AITD组血清免疫指标的比较 |
| 1.2.5 AITD组与非AITD组血清甲状腺功能指标比较 |
| 1.2.6 AITD组与非AITD组甲状腺特异性抗体检测结果比较 |
| 1.2.7 AITD组与非AITD组生化指标的比较 |
| 1.2.8 AITD组与非AITD患者肾脏穿刺活检病理类型比较 |
| 1.2.9 AITD组与非AITD组患者肾脏活检组织免疫组化染色结果比较 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 AITD对免疫系统的影响 |
| 1.3.2 AITD对甲状腺功能的影响 |
| 1.3.3 AITD对肾脏的影响 |
| 1.4 小结 |
| 二、PIO 对 AITD 小鼠肾脏组织 IP10 及 TNF-α作用的研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 材料与仪器 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.1.3 统计学处理 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 猪甲状腺球蛋白注射诱导AITD小鼠模型 |
| 2.2.2 AITD模型组(M组)和对照组(N组)小鼠血清TSH和甲状腺相关抗体TGAb比较 |
| 2.2.3 两组小鼠甲状腺组织切片HE染色 |
| 2.2.4 三组小鼠T3、T4、TSH、TGAb、TPOAb、肌酐、尿素比较 |
| 2.2.5 各组小鼠肾脏TNF-α、IP10 免疫组化染色 |
| 2.2.6 各组小鼠肾脏TNF-a、IP10 Western blot结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 实验动物模型建立 |
| 2.3.2 IP10在AITD肾脏损伤中的作用 |
| 2.3.3 盐酸吡格列酮对肾脏炎症反应的抑制作用 |
| 2.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 沧州市人民医院患者肾脏穿刺知情告知书 |
| 综述 自身免疫性甲状腺病与多器官损害 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）重型再生障碍性贫血中TRAIL对CD8+细胞功能的影响及相关机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、TRAIL治疗重型再生障碍性贫血小鼠模型效果观察 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 主要试剂与仪器 |
| 1.1.3 研究方法 |
| 1.1.4 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 SAA模型各组小鼠血象、骨髓细胞计数、骨髓病理 |
| 1.2.2 SAA模型小鼠外周血浆炎性细胞因子水平 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、TRAIL对重型再生障碍性贫血模型小鼠CD8~+T细胞功能的影响 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 主要试剂与仪器 |
| 2.1.3 研究方法 |
| 2.1.4 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 免疫磁珠分选SAA模型小鼠骨髓CD8~+T细胞并检测其纯度 |
| 2.2.2 各组小鼠骨髓CD8~+T培养细胞表面功能分子CD25表达水平比较 |
| 2.2.3 各组小鼠骨髓CD8~+T培养细胞凋亡率水平 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、TRAIL对重型再生障碍性贫血患者CD8~+T细胞功能的影响及相关机制 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 研究对象 |
| 3.1.2 主要试剂与仪器 |
| 3.1.3 研究方法 |
| 3.1.4 统计学方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 免疫磁珠分选SAA患者骨髓CD8~+T细胞并检测其纯度 |
| 3.2.2 SAA患者骨髓CD8~+T细胞活化功能分子CD25、CD69、HLA-DR表达水平比较 |
| 3.2.3 各组SAA患者骨髓CD8~+T培养细胞凋亡水平比较 |
| 3.2.4 SAA患者CD8~+T培养细胞穿孔素、颗粒酶表达水平比较 |
| 3.2.5 SAA患者CD8~+T细胞磷酸化ZAP70 分子表达水平比较 |
| 3.2.6 SAA患者CD8~+T细胞培养上清炎性细胞因子水平比较 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 泛素系统调控适应性免疫应答研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）桥本甲状腺炎对妊娠小鼠额叶谷氨酸及其转运体的影响（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 个人简历 |
| 致谢 |
| 综述 谷氨酸在中枢神经系统健康和疾病中的作用 |
| 参考文献 |
四、3种诱导自身免疫性甲状腺炎动物模型的效果比较（论文参考文献）
- [1]桥本甲状腺炎不同中医证型的临床特点研究及芪龙散结方对桥本甲状腺炎大鼠免疫调节机制的研究[D]. 沈鑫. 山东中医药大学, 2021
- [2]基于“神形统一观”探讨逍遥散加味治疗桥本病的临床疗效及机制研究[D]. 李祎楠. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [3]基于转录组测序研究甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠的机制影响[D]. 张程斐. 北京中医药大学, 2021(01)
- [4]基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨芪箭消瘿方对AIT大鼠肠道菌群及肠黏膜屏障的影响[D]. 牧亚峰. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [5]自身免疫甲状腺炎患者与小鼠的肠道菌群和血清代谢物特征及关联分析[D]. 孟繁睿. 中国医科大学, 2021(02)
- [6]桥本氏甲状腺炎实验模型构建研究进展[J]. 孙伯菊,吴丽丽,秦灵灵,张程斐,吴悠,秦帅,王明慧,刘铜华. 世界科学技术-中医药现代化, 2020(07)
- [7]实验性自身免疫性甲状腺炎肝郁脾虚证大鼠模型研究[D]. 刘佳. 辽宁中医药大学, 2020(02)
- [8]AITD肾脏组织IP10的表达及盐酸吡格列酮对其作用的研究[D]. 卢泽芬. 天津医科大学, 2020(06)
- [9]重型再生障碍性贫血中TRAIL对CD8+细胞功能的影响及相关机制研究[D]. 华罗刚. 天津医科大学, 2020(06)
- [10]桥本甲状腺炎对妊娠小鼠额叶谷氨酸及其转运体的影响[D]. 柳田田. 安徽医科大学, 2020(02)
标签：甲状腺论文; 肠道菌群论文; 甲状腺球蛋白抗体论文; 慢性甲状腺炎论文; 健康论文;