一、胶质细胞源性神经营养因子在神经系统损伤后表达变化意义（论文文献综述）
尤荻[1]（2021）在《电刺激联合Cs-Au/GelMA水凝胶对臂丛神经损伤后神经病理性疼痛的疗效及机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景:臂丛神经损伤（brachial plexus injuries,BPI）后可能会遗留不同程度的运动和感觉功能障碍,其中神经节前颈根撕脱伤后会产生严重的神经病理性疼痛。由于同时累及中枢神经系统和周围神经系统,涉及多种复杂的病理生理变化,如神经炎症、胶质细胞活化等,常规的镇痛药物治疗很难获得令人满意的临床疗效。目前临床用于治疗神经病理性疼痛的药物包括非甾体类抗炎药、抗癫痫药、抗抑郁药和类阿片药物,尽管有多种药物可以选择,甚至是联合应用,但临床满意率仍不足一半,而且还要受到不同程度副作用的影响。近年,很多研究人员致力于组织工程学的研究,希望获得更为满意的疗效。水凝胶是由一种可通过非侵入性的方式注入受损部位的组织工程材料,具有良好的生物相容性、生物降解性、可塑性,并通过搭载药物、细胞、纳米粒子等进行局部释放,强化治疗作用,在神经损伤后的功能恢复和神经再生领域具有良好的应用前景。可见光交联的可注射性甲基丙稀酸明胶（methylacrylic acid gelatin,Gel MA）水凝胶,含有精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸序列,对细胞粘附、分化、增殖均具有积极的促进作用,已广泛用于心脏、皮肤、骨骼等多领域的研究中,也被证明可以在脊髓损伤的研究中发挥重要的生理功能。为此,我们拟构建一种基于Gel MA水凝胶的生物支架体系,通过加入壳聚糖（chitosan,Cs）改性的金纳米粒子（Cs-Au NPs）,利用金纳米独特生物学性能,抑制胶质细胞的增殖与分化,抑制促炎症细胞因子的产生,通过抑制神经炎症的水平减轻臂丛神经损伤后的神经病理性疼痛,而且金纳米粒子具有良好的导电性。神经损伤后主要是神经电传导的破坏,而电刺激（electrical stimulation,ES）治疗被报告可以有效改善神经损伤后的神经功能恢复,可以干预神经传导的“闸门变化”,抑制胶质细胞的增殖和活化。综合考虑神经炎症在神经病理性疼痛的发生和发展中的重要作用,我们拟构建一种含有Cs-Au NPs的Gel MA水凝胶,并联合电刺激共同治疗臂丛神经损伤后的神经病理性疼痛。本研究将在4章构建Cs-Au/Gel MA水凝胶,并对其表征进行检测,在第5章通过动物模型检测Cs-Au/Gel MA水凝胶和电刺激对神经病理性疼痛的治疗作用。研究目的:研究BPI后,神经病理性疼痛的发生、发展规律,以及这一过程中胶质细胞、神经炎症水平的变化规律。应用组织工程学手段结合物理治疗——电刺激,治疗BPI后的神经病理性疼痛,构建一种具有潜在导电性能、生物学安全性良好、具有可降解性、亲水性的Cs-Au/Gel MA,选取合适的电刺激频率。分析神经电刺激、Cs-Au/Gel MA水凝胶及其联合应用,对大鼠BPI引起的神经病理性疼痛模型行为学变化、生化改变、细胞学变化的影响,评价其在神经病理性疼痛治疗中的作用及机制,推断其减轻神经病理性疼痛的机制,可能与抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的增殖、活化,降低促炎症细胞因子的产生,抑制神经炎症有关。研究方法:1.选定初始机械性刺激缩足阈值（mechanical withdrawal threshold,MWT）为4g的成年雌性SD大鼠,建立神经节前颈根撕脱伤（preganglionic cervical root avulsion,PCRA）模型（钝性撕脱C6-C8颈神经后根）,研究大鼠臂丛神经损伤后的行为学、细胞学、生化指标变化。2.通过与假手术组进行对比,在损伤后的第1、2、3、5和7天分别测量两组大鼠的MWT和热缩足反射潜伏期（thermal withdrawal latency,TWL）,每次进行行为学检测后,将大鼠处死切取大鼠脊髓组织进行免疫印迹检查,检查指标包括离子钙结合受体分子-1（Ionized calcium binding adaptor molecule 1,Iba-1）、胶质纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein,GFAP）、白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）、白介素-6（Interleukin-6,IL-6）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNFα）。3.制备Cs-Au/Gel MA水凝胶并进行表征检测,先合成Cs包裹的Cs-Au NPs,再通过细胞实验筛选最适的浓度用于合成Cs-Au/Gel MA水凝胶。4.使用明胶为原材料合成Gel MA水凝胶,并检测其固液转化性能,合成Cs-Au/Gel MA水凝胶检测其亲水性、降解性。5.通过细胞实验筛选最适合的电刺激频率后,应用于动物实验中。6.实验动物随机分为PCRA组（不给予治疗）、ES组（200 Hz电刺激治疗）、Cs-Au/Gel MA水凝胶组（损伤局部注射Cs-Au/Gel MA水凝胶）、联合治疗组（电刺激治疗+水凝胶局部注射）;治疗3日后,处死大鼠后取脊髓组织进行免疫荧光染色,检测星形胶质细胞和小胶质细胞含量,免疫印迹法检测Iba-1、GFAP、IL-1β、IL-6和TNFα含量;免疫荧光染色检测受累节段脊髓组织内脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）含量和超氧化物歧化酶-1（Superoxide dismutase-1,SOD1）、超氧化物歧化酶-2（Superoxide dismutase-2,SOD2）、氮氧化物-2（nitrous oxides-2,NOX2）、氮氧化物-4（nitrous oxides-4,NOX4）等氧化损伤指标;7.连续监测PCRA组、ES组、Cs-Au/Gel MA水凝胶组、联合治疗组大鼠造模后3周的行为学变化——MWT和TWL。研究结果:1.与假手术组比,PCRA模型大鼠术后的MWT和TWL明显降低,过程中可见假手术组虽然术后早期也会出现疼痛敏感,但很快可以自行恢复;而PCRA组术后早期疼痛敏感水平略有改善,但之后一直维持在一个疼痛敏感状态。2.与假手术组相比,PCRA模型鼠的脊髓组织中Iba-1和GFAP的表达均增加,即胶质细胞含量增加;IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平也均有升高,即促炎症细胞因子含量增加,并会在损伤后的第2、3日达到高峰,所以后续研究中我们选取术后前3日作为干预治疗的时间窗。3.Cs-Au NPs形态均匀,呈分散分布,浓度为0.05 mg/ml时神经干细胞的增殖情况最佳,并按此浓度制备Cs-Au/Gel MA水凝胶。4.0.05 mg/ml的Cs-Au/Gel MA水凝胶接触角约为81.2°,具有良好的亲水性;在大鼠皮下植入Cs-Au/Gel MA水凝胶后,术后1-5周进行取样发现均无明显的炎症反应、且水凝胶体积逐渐减小,表明其具有良好的生物安全性和可降解性。5.电刺激和Cs-Au/Gel MA水凝胶均可以一定程度上抑制胶质细胞的增生和促炎症细胞因子的产生,但电刺激的作用更为明显,疗效更为显着。损伤后3日,相较于PCRA组,Cs-Au/Gel MA组、ES组、联合治疗组Iba-1表达量均明显减少（P<0.01）;相较于PCRA组,ES组、联合治疗组GFAP表达量均明显减少（P<0.01）;6.相较于PCRA组,三个治疗组中的IL-1β、IL-6和TNF-α均明显下降,并具有统计学差异（P<0.01）。7.电刺激还可以有效抑制BDNF的产生,而Cs-Au/Gel MA水凝胶对氧化损伤抑制作用更为明显。二者的联合治疗,较单独任何一种都更为有效。研究结论:1.PCRA后会出现明显的神经病理性疼痛,且在早期不会自行好转。2.PCRA后大鼠脊髓内星形胶质细胞和小胶质细胞会发生增殖与活化,其中小胶质细胞在疼痛维持的过程中可能更为重要。3.PCRA后大鼠脊髓内IL-1β、IL-6、TNF-α等促炎细胞因子会增加,其峰值出现在损伤后的48-72 h。4.Cs-Au纳米粒子具有良好的生物相容性,但过高浓度反而可能抑制细胞的增殖。5.Cs-Au/Gel MA水凝胶是一种良好的组织工程支架,具有良好的塑性性、生物相容性、可降解性。6.ES和Cs-Au/Gel MA水凝胶均可抑制PCRA后的胶质细胞增殖与活化、减少促炎症细胞因子的产生、抑制神经病理性疼痛的发生和发展,且二者联合应用疗效可获得进一步的提高。
吴子健[2]（2021）在《通腑逐瘀法指导下抵当汤加减调控AQP4表达治疗大鼠急性脊髓损伤的作用机制研究》文中研究指明目的 本次研究结合急性脊髓损伤（acute spinal cord injury,ASCI）的研究现状和热点,基于导师的临床经验,以通过抑制水通道蛋白4（aquaporin 4,AQP4）的表达从而减轻ASCI后脊髓水肿为切入点,旨在探讨通腑逐瘀法治则指导下抵当汤加减治疗ASCI的可能作用机制,以期为推广通腑逐瘀法治疗ASCI提供理论依据。方法 第一部分:10周龄SD大鼠30只,按随机数字表法随机分为假手术组（A组）、自制打击器2cm组（B1组）、自制打击器4cm组（B2组）、NYU组1.25cm组（C1组）、NYU组2.5cm组（C2组）,每组各6只。除Sham组外,其余各组采用改良Allen’s法造模。B1、B2组将9g打击杆分别从2cm、4cm处自由坠落撞击T10脊髓,C1、C2组使用NYU打击器分别从1.25cm、2.5cm处撞击T10脊髓。各组造模完成后分别于1、3、5、7d进行BBB评分和Reuter评分,7d后行灌注取材,石蜡包埋切片,尼氏染色,观察各组组织受损程度和神经元存活率。第二部分:10周龄SD大鼠60只按随机分配方法随机分为假手术组（Sham）、模型组（Model）、抵当汤组（DDD）、TGN-020组（TGN-020）和抵当汤联合TGN-020组（DDD+TGN-020）,每组各12只。Sham组仅打开椎板暴露脊髓但不损伤脊髓;其余各组均采用自制脊髓打击器从40mm高度对脊髓进行打击。Sham组和Model组术后不予任何治疗措施干预,DDD组于术后3d予以抵当汤加减每日灌胃,持续3d,根据大鼠与人用药剂量体表面积换算法,DDD组大鼠每日用药剂量为5.04g/kg,采用蒸馏水进行稀释一定比例配制后予以灌胃处理,每日早晚各1次。TGN-020组处理方法:腹腔注射给药,每日用药剂量为5mg/kg,给药时间为3d。DDD+TGN-020组处理方法:予TGN-020腹腔注射给药,随后给予DDD灌胃处理。干预结束后进行行为学评价（BBB评分、斜板实验及Reuter评分）观察大鼠神经功能恢复情况,取材后进行脊髓组织大体观察和含水率检测、HE染色观察组织受损程度,尼氏染色观察神经元形态,免疫荧光检测各组脊髓组织AQP4、GFAP共表达的阳性细胞个数,Western Blot法检测各组脊髓组织中AQP4、GFAP、CSPG、PCNA、NGF、BDNF、GAP-43蛋白的表达量,q PCR法检测各组脊髓组织中CSPG、PCNA基因的表达量,电镜下观察各组髓鞘和神经元组织形态,高尔基染色观察树突和树突棘形态。第三部分:8周龄SD大鼠40只随机分为空白血清组和含药血清组,含药血清组给予5.04g/kg DDD灌胃,持续3d,空白血清组予等剂量超纯水灌胃,持续3d,干预结束后提取血清备用。每次取胚胎大鼠8-12只,通过机械-酶消化法提取星形胶质细胞（Astrocytes,AS）,细胞采用10%的高糖培养基培养,观察细胞传代至第3代进行后续实验。首先,免疫荧光鉴定细胞中GFAP含量,随后进行实验分组:空白组（Control group,CG）、模型组（Model group,MG）、空白血清组（Blank serum group,BSG）、DDD含药血清组（DDD）、TGN-020干预组（TGN-020）、DDD联合TGN-020组（DDD+TGN-020）,除MG外,其余各组均以划痕法进行造模,造模完成后DDD予以含药血清干预,BSG予以等剂量空白血清干预,TGN-020予以100nm TGN-020干预,DDD+TGN-020先予TGN-020干预后再予DDD干预。MTT法检测DDD含药血清干预AS的安全干预浓度、最佳干预时间和干预浓度,MTT法检测各组对RAS活性的影响,免疫荧光染色法检测RAS中AQP4和GFAP共表达的细胞数,Western Blot法检测各组RAS中AQP4、GFAP和NGF、BDNF、GAP-43蛋白的表达量,镜下观察DDD含药血清对RAS迁移率的影响。统计学方法:实验所得数据均使用SPSS21.0软件进行统计学处理,计量资料以均值±标准误（`X±S）表示,所得数据均经过正态性分布检测,若符合正态分布,则采用单因素方差分析,方差齐则采用LSD法,方差不齐则采用Games-Howell法;若不符合正态分布,则采用非参检验。以P<0.05提示差异具有统计学意义。结果 第一部分:自制脊髓打击器与NYU打击器建立脊髓损伤模型研究1.各组脊髓外观形态比较A组T10节段处硬脊膜完整,脊髓组织呈均匀乳白色,形态饱满圆润;B1、B2、C1、C2组T10节段处硬脊膜均完整,颜色呈不同程度的鲜红色或暗红色,损伤处可见水肿、瘀血及瘢痕组织增生,相对于B1、C1组,B2、C2组水肿更严重、瘀血范围更广、颜色更深、瘢痕组织更多。2.行为学评分比较BBB评分结果显示,A组术后除因手术致运动量减少外,未出现双下肢功能异常的表现,评分为21分;其余各组均出现不同程度的运动功能障碍,具体表现为:B2与B1、C2与C1相比,BBB评分显着降低,差异具统计学意义（P<0.05）;B1与C1、B2与C2相比,BBB评分无显着差异（P>0.05）。Reuter评分结果显示,A组术后未发现感觉功能异常现象;其余各组术后均出现不同程度的感觉功能异常现象,具体表现为B2、C2组术后1d牵张反射消失,肌力、肌张力减弱或消失,疼痛回缩反射迟钝,背部感觉存在或消失;B1、C1组术后1d除肌力消失外,牵张反射、肌张力、疼痛回缩反射、背部感觉均存在,术后3d肌力开始恢复。B2与B1、C2与C1相比,Reuter评分显着降低,差异具统计学意义（P<0.05）。B1与C1、B2与C2相比,Reuter评分无显着差异（P>0.05）。3.尼氏染色尼氏染色结果显示,A组脊髓组织结构完整,灰白质边界清晰,神经元细胞形态规则、胞核大、核仁清晰可见、数量多,胞质内可见斑块样尼氏体。相比A组,其余各组结构破坏更严重,灰白质结构不清,组织空白间隙更大,损伤处可见细胞呈空泡样改变或细胞皱缩、体积减小,神经元数量减少,尼氏体模糊或消失。4.脊髓受损面积比结果表明,A组未见受损区域,比值为0,其余各组均高于A组,差异具有统计意义（P<0.05）;相对于B1和C1,B2和C2损伤面积比值明显升高,差异具有统计意义（P<0.05）;B1与B2、C1与C2损伤面积比值差异不具有统计意义（P>0.05）。5.各组脊髓前、后角神经元损伤程度比较通过分析前、后角神经元阳性细胞数结果显示,A组神经元数目多,尼氏体含量多,其余各组均少于A组,差异具有统计意义（P<0.05）;相对于B1和C1,B2和C2神经元阳性细胞数明显减少,差异具有统计意义（P<0.05）;B1与B2、C1与C2神经元阳性细胞数差异不具有统计意义（P>0.05）。第二部分:抵当汤加减调节AQP4表达对SCI大鼠脊髓水肿的作用研究1.各组脊髓组织的大体观察从大体观察上来看,Sham组脊髓组织颜色鲜白,组织完整,未见瘀血部位和水肿;Model组在打击损伤部位可见明显的瘀血区域,瘀血颜色深红,瘀血范围较大,并可见明显脊髓水肿;DDD组在打击损伤部位可见较小的瘀血区域,瘀血部位颜色淡红,可见轻度水肿;DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组大体观察相似,肉眼见无显着差异。2.各组脊髓组织含水率与Sham组相比,其余各组脊髓组织含水率均显着增高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组脊髓组织含水率均显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组组间比较,脊髓组织含水率没有显着差异（P>0.05）。3.行为学观察结果各组大鼠BBB评分、斜板实验结果以及Reuter评分显示,与Sham组相比,其余各组BBB评分和斜板实验得分均显着降低（P<0.05）,Reuter评分均显着升高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组BBB评分均显着升高（P<0.05）,Reuter评分均显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组组间比较无显着差异（P>0.05）。4.HE染色Sham组组织结构完整,神经元等细胞形态结构良好,未见瘢痕组织或空洞形成,未见瘀血区域或炎性物质渗出。Model组损伤部位可见组织结构离乱,大量瘢痕组织和脊髓空洞的形成,可见明显的瘀血区域,并伴有大量的炎性细胞浸润,神经元等细胞皱缩,数量减少。其余三组可见组织形态结构较完整,可见少量脊髓空洞的形成,瘀血区域范围较小,炎性细胞清润较少,神经元等细胞形态结构较完整。使用Image J软件对各组空洞面积进行定量分析,结果显示,与Sham组相比,Model组脊髓空洞面积显着增加（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组脊髓空洞面积显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组脊髓空洞面积组间比较不具有显着差异（P>0.05）。5.尼氏染色观察各组神经元形态Sham组脊髓形态结构完整,灰质呈蝴蝶状,灰白质界限清晰,可见较多的神经元分布,神经元胞质内可见染色清晰的斑块状尼氏体,神经元胞体饱满,细胞核大,核仁明显。Model组脊髓组织破坏严重,结构不完整,灰、白质界限不清,可见大量的炎性细胞浸润,神经元皱缩、液化、坏死,形成较多的空泡,尼氏体较小或消失。相对Model组,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组脊髓结构较完整,隐约可见灰白质界限,神经元仍可见,数量较多,空泡样改变减少,尼氏体数量较多、较饱满。但相对于Sham组,神经元仍存在固缩,胞浆减少,核变小,尼氏体减少等病理改变。6.免疫荧光检测各组AQP4、GFAP的阳性细胞表达量AQP4阳性细胞表达呈绿色,GFAP阳性细胞表达呈红色,DAPI染色呈深蓝色,AQP4+/GFAP+细胞表达呈黄色树枝状,各组染色背景干净,表达清晰,细胞核数量无显着差异（P>0.05）,具有可比性。Sham组少见或未见明显的AQP4+/GFAP+细胞,Model组可见较多的AQP4+/GFAP+细胞,且细胞亮度高,胞体肿胀程度严重。与模型组相比,DDD组、TGN-020组以及DDD+TGN-020组细胞数量较少,亮度较低,细胞肿胀程度减轻。对各组的AQP4+/GFAP+细胞进行计数和统计,与Sham组相比,其余各组AQP4与GFAP的阳性细胞占比均显着增高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组AQP4与GFAP的阳性细胞占比显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组间相比较,AQP4与GFAP的阳性细胞占比无显着差异（P>0.05）。7.Western Blot法检测各组AQP4、GFAP、PCNA、CSPG、NGF、BDNF、GAP-43的蛋白表达量各组蛋白条带背景清晰,无杂带现象,蛋白表达量趋势明显,具有可比性。与Sham组相比,各组脊髓组织中AQP4、GFAP、PCNA、CSPG蛋白的灰度值显着增高（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白的灰度值显着降低（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组脊髓组织中AQP4、GFAP、PCNA、CSPG蛋白的灰度值显着降低（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白的灰度值显着增高（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组组间比较结果显示,各组脊髓组织中AQP4、GFAP、PCNA、CSPG、NGF、BDNF、GAP-43蛋白的灰度值差异不具有统计学意义（P>0.05）。8.各组脊髓组织中PCNA和CSPG基因表达量各组基因检测的扩增曲线变化平稳,溶解曲线为平滑的单峰形态,说明引物设计好,模板未见污染,实验结果具有可比性。各组目的基因相对表达量结果显示,与Sham组相比,各组脊髓组织中PCNA、CSPG基因的表达量显着增高（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组脊髓组织中PCNA、CSPG基因的表达量显着降低（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组组间比较结果显示,各组脊髓组织中PCNA、CSPG基因的表达量差异不具有统计学意义（P>0.05）。9.透射电子显微镜观察髓鞘和神经元组织形态Sham组脊髓组织在透射电镜下可见髓鞘外形规则,厚薄均一,形似同心圆状,结构完整,未见破裂、缺失等改变,板层结构均匀致密,胞内线粒体丰富,胞浆饱满,清晰可见。Model组髓鞘结构不规则,部分髓鞘断裂缺失,厚薄不一,局部可见褶皱卷曲,板层结构松散、融合,线粒体肿胀,甚至部分溶解消失;DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组可见髓鞘结构较完整,形态部分不规则但较Model组改善,部分髓鞘可见卷曲、厚薄不一,板层结构较均匀,虽有部分缺失,但松散程度相对Model组较轻,仍可见清晰的线粒体,但数量较Sham组少,胞体较小。10.电镜观察树突和树突棘形态各组脊髓经高尔基染色后结果显示:Sham组脊髓树突结构完整、形态规则、长度较长,树突上密布树突棘,树突棘分布整齐、均匀致密、数量较多;Model组脊髓树突形态不规则,部分断裂缺失,长度较短,较为纤细,树突棘数量少,稀疏分布,排列紊乱;与Model组相比,DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组脊髓树突形态有所改善、树突较长、结构较完整、周经较粗,树突棘数量较多,排列更为规则、整齐。对各组脊髓树突长度及树突棘进行定量分析,结果显示,与Sham组相比,Model组树突长度明显降低（P<0.05）,树突棘数量明显减少（P<0.05）;与Model组相比,DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组树突长度明显增加（P<0.05）,树突棘数量显着增多（P<0.05）;DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组组间相比,差异不具有统计学意义（P>0.05）。第三部分:抵当汤加减含药血清对反应性星形胶质细胞的活化、迁移及神经生长相关细胞因子分泌的作用1.原代AS镜下观察原代细胞培养2d,镜下可见AS细胞呈不规则形状散在分布,部分细胞形似星形,细胞核大、呈椭圆形,细胞胞浆丰富,从胞体向四周发出长而有分支的突起;将原代细胞传代至第三代可见细胞生长状态良好,适宜进行后续实验。2.AS鉴定免疫荧光染色结果显示,GFAP染色呈阳性,阴性对照组未见任何阳性染色,提示GFAP呈特异性表达,所提取的细胞为AS。3.DDD含药血清对AS的安全干预浓度,以及干预RAS的最佳干预时间和最佳干预浓度DDD含药血清干预AS的安全浓度范围为:0-15%,DDD含药血清干预RAS最佳的干预浓度为10%,最佳干预时间为48h。4.DDD含药血清对RAS活性的影响MTT结果显示,与CG组相比,其余各组RAS活性均降低（P<0.05）;与MG相比,BSG组RAS活性无显着差异（P>0.05）,DDD、TGN-020和DDD+TGN-020组RAS活性均显着下降（P<0.05）;DDD、TGN-020和DDD+TGN-020组间比较无显着差异（P>0.05）。5.DDD含药血清对RAS迁移率的影响损伤24h后,各组RAS与对侧细胞完全分离,中间形成一条空白的划痕区域,划痕区未见或少见RAS;48h后部分细胞开始向对侧延伸突触,划痕区域出现部分肥大的RAS,细胞胞浆丰富,胞体呈球形,发亮,细胞加速分裂;72h后划痕区域缩小,部分RAS与对侧RAS突触交织,划痕开始愈合。在整个愈合过程中,24h各组划痕区域面积比无显着差异（P>0.05）;自48h开始,与MG组相比,BSG划痕区域面积比无显着差异,其余各组均明显较大（P<0.05）。DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组组间比较无显着差异（P>0.05）。72h后,MG组与BSG组划痕区域面积比无显着差异（P>0.05）。与MG组相比,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组划痕区域面积比明显较大（P<0.05）,组间比较无显着差异（P>0.05）。以上划痕区域面积比的改变反映了RAS在损伤发生后向受损区域的迁移速率。6.各组对RAS中AQP4、GFAP荧光表达量的影响使用免疫荧光染色法对RAS中AQP4、GFAP和细胞核进行了标记。染色结果显示,AQP4+细胞呈绿色,GFAP+细胞呈红色,细胞核呈蓝色,荧光双标的细胞呈黄色的不规则树枝状。其中,CG组仅见12个零星分布的AQP4+/GFAP+细胞;MG组和BSG可见较多的AQP4+/GFAP+细胞,亮度较高,细胞肿胀程度严重;DDD组、TGN-020组、DDD+TGN-020组可见较少的AQP4+/GFAP+细胞,亮度较低,细胞肿胀程度较轻。对AQP4+/GFAP+细胞进行计数统计,结果表明,与CG相比,其他各组阳性细胞占比显着增多（P<0.05）;与MG相比,除BSG组无显着差异外（P>0.05）,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组阳性细胞占比显着减少（P<0.05）;DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组阳性细胞占比组间相比无显着差异（P>0.05）。7.各组对RAS中AQP4、GFAP和NGF、BDNF、GAP-43蛋白表达量的影响结果显示,与CG组相比,其余各组AQP4和GFAP蛋白表达量均显着增高（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白表达量均显着降低（P<0.05）;与MG组相比,除BSG组无明显差异外（P>0.05）,DDD组、TGN-020组和DDD+TGN-020组AQP4和GFAP蛋白表达量均显着降低（P<0.05）,NGF、BDNF、GAP-43蛋白表达量均显着增高（P<0.05）,3组组间比较无显着差异（P>0.05）。结论 1.自制简易脊髓打击器从20mm、40mm高处垂直撞击脊髓组织具有和NYU打击器从12.5mm、25mm处打击脊髓损伤程度相似的脊髓损伤动物模型,自制简易脊髓打击器安全性高,稳定性好,操作简便,价格低廉,可供科研工作者参考。2.通腑逐瘀法治则指导下抵当汤加减可有效消除SCI大鼠损伤处水肿,促进神经功能康复。其具体的作用机制为:通过抑制AQP4的表达可抑制反应性星形胶质细胞活化,减少胶质瘢痕形成,提高神经营养因子、神经生长因子及细胞膜生长相关蛋白的表达,促进神经功能康复。3.DDD含药血清能通过抑制AQP4的表达,有效减轻RAS水肿,减少RAS活化和减缓RAS迁移,促进RAS中神经营养因子的分泌。
朱业淘[3]（2021）在《联用神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响研究》文中研究说明背景:重型颅脑创伤是目前世界上导致青年人死亡和残疾的主要原因之一,重型颅脑创伤后常导致神经功能废损,而传统治疗方法的效果往往难以令人满意;因此如何改善重型颅脑创伤的预后一直是医疗界的难题。早些年已有相关研究证实在重型颅脑创伤后,损伤脑组织中有部分新生神经细胞生成,但数量极为有限,并不能使受损的神经功能得到充分的改善。神经因子作为一类对神经细胞营养作用且能够调节神经细胞存活的蛋白质,已经被多项研究证实可以在体外促进神经细胞的增殖和抗神经细胞凋亡以改善受损的神经功能,并且在神经缺血性和退行性疾病的邻域已经得到了较为宽泛的研究,在治疗颅脑创伤的研究方面,则少见有研究神经因子对重型颅脑创伤后大鼠神经细胞的影响,而将神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子联用应用观察对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能影响的研究更是罕见。目的:探索联合应用不同的神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响,观察不同实验组大鼠肢体功能恢复差异,探索外源性神经因子治疗重型颅脑创伤的合适策略及机制。方法:将48只SD大鼠随机分为四个组,即神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组、联用神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子组以及对照组。颅脑创伤模型参照改良Feeney法制作,在造模一天后,对照组通过脑室注射途径注射生理盐水,各个实验组分别由脑室途径注入相应的神经因子。采用免疫组化法、免疫荧光法比较各组大鼠脑内损伤皮层、室管膜下区、海马齿状回以及损伤对侧相应区域阳性细胞的表达;采用前肢放置实验和平衡实验观察大鼠的肢体功能情况,比较各组大鼠肢体功能恢复情况的差异。结果:（1）在造模3 d、7d、14d后神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组、联合组相应区域的神经元、神经胶质细胞数量明显多于对照组,差异有显着性意义（P<0.05）,同时神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组神经元、神经胶质细胞明显少于联合组（P<0.05）,而神经生长因子组和碱性成纤维细胞生长因子组对应的各个区域阳性细胞数量没有明显差异;（2）在造模5天后,行为学实验评分对比中,对照组评分均高于神经生长因子组、碱性成纤维细胞生长因子组以及联合组,差异具有统计学意义（P<0.05）,且联合组评分低于碱性成纤维细胞生长因子组、神经生长因子组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:联合应用外源性神经生长因子和碱性成纤维细胞生长因子较单用二者之一更能促进神经细胞的增殖和大鼠肢体功能的恢复。
詹琼琼[4]（2021）在《双相情感障碍患者血清氧化应激指标及胶质细胞源性神经营养因子水平的研究》文中提出目的:探讨氧化应激指标及胶质细胞源性神经营养因子（Glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF）在双相情感障碍（Bipolar disorder,BD）患者中治疗前后的水平变化以及与患者症状和认知功能的相关性。方法:连续入组2018年2月～2020年2月收治的70例BD躁狂相患者作为观察组,并选取70例健康体检者作为对照组。观察组均接受4周的抗精神病药物及心境稳定剂治疗,如出现焦虑、激越可联合使用苯二氮卓类药物,收集患者治疗前后的血清。采用杨氏躁狂评定量表（Young manic rating scale,YMRS）对观察组治疗前后进行症状评估;采用数字划消测验、Stroop色-词测验以及连线测验A和B对患者神经认知功能进行评估。采用酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）对观察组治疗前后和对照组的血清GDNF浓度进行检测。采用TBA法和WST法对观察组治疗前后和对照组的血清氧化应激指标丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、外周血超氧化物歧化酶（Serum superoxide dismutase,SOD）浓度进行检测。结果:（1）治疗前,观察组血清MDA浓度为（6.22±0.35）nmol/ml,SOD浓度为（943.83±28.13）U/mL 显着高于正常对照组 MDA 浓度（4.19±0.31）nmol/ml（P<0.01）、SOD浓度（506.21±28.43）U/mL（P<0.01）。观察组 GDNF 浓度为（108.39±26.13）ng/ml显着低于对照组（527.88±29.65）ng/ml,且差异有统计学意义（P<0.01）。（2）经过4周治疗后,观察组血清MDA、SOD浓度降低,分别为（4.28±0.28）nmol/ml、（512.97±30.45）U/mL,而 GDNF 浓度升高至（490.46±26.42）ng/ml,与治疗前相比差异有统计学意义（P<0.01）。治疗后观察组的MDA、SOD水平与对照组相比,差异无明显的统计学意义（P>0.05）,而GDNF浓度仍低于正常组,差异有统计学意义（P<0.01）。（3）治疗前,观察组YMRS评分为（34.89±6.04）,经过治疗4周后,YMRS评分显着降低,平均分数为（6.64±2.63）,治疗前后差异具有明显统计学意义（P<0.01）。（4）认知功能测试:治疗前,观察组和对照组在数字划消测试完成时间（221.60±50.72）s vs.（172.33±14.75）s、数字划消测试错划个数（0.97±2.01）个 vs.（0.39±1.07）个、Stroop色-词测验[单词总数为（84.16±5.96）个vs.（103.08±4.36）个、颜色总数为（56.26±5.03）个 vs.（71.25±4.15）个、色-词总数为（32.17±3.71）个 vs.（44.80±3.95）个]、TMT-B 测试完成时间为（187.10±12.03）s vs.（119.43±5.30）s、TMT-A 完成时间（80.16±4.94）s vs.（47.56±5.15）s,观察组的各种认知功能评定均低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;观察组治疗前后数字划消完成时间为（221.60±50.72）s vs.（184.53±20.67）s、数字划消测试划错个数为（0.97±2.01）个vs.（0.42±0.84）个、Stroop 色-词测验中[单词总数为（84.16±5.96）个 vs.（87.31±2.37）个、颜色总数为（56.26±5.03）个 vs.（62.64±4.63）个、色/词总数为（32.17±3.71）个 vs.（39.92±3.96）个]、TMT-B 测试完成时间为（187.10±12.03）s vs.（143.43±17.31）s、TMT-A完成时间为（80.16±4.94）s vs.（64.79±6.90）s,观察组治疗前后的认知功能评定差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。观察组治疗后的各种认知功能量表评定均低于对照组,除数字划消测试错划个数评定外,余认知功能评定差异均有统计学意义（P<0.05）。（5）相关性分析发现,治疗前MDA浓度与治疗前YMRS评分呈正相关（r=0.648,P<0.01）;SOD浓度与治疗前YMRS评分呈正相关（r=0.436,P<0.01）;GDNF浓度与治疗前YMRS评分呈负相关（r=-0.520,P<0.01）。以治疗前数字划消完成时间及错划个数、Stroop色-词测验、TMT-B完成时间、TMT-A完成时间作为认知功能评分为认知功能的评分。经相关性分析,治疗前MDA、SOD浓度与数字划消完成时间、错划个数、TMT-B完成时间和TMT-A完成时间呈正相关（P<0.01）,与Stroop色-词测验单词总数、颜色总数、色/词总数呈负相关（P<0.01）。GDNF浓度与数字划消完成时间、错划个数、TMT-B完成时间和TMT-A完成时间评分呈负相关（P<0.01）,与Stroop色-词测验单词总数、颜色总数、色/词总数呈正相关（P<0.01）。治疗前患者的YMRS评分与认知功能的相关性分析发现,YMRS评分与数字划消的完成时间、错划个数、TMT-B完成时间、TMT-A完成时间呈正相关,但差异无统计学意义（P>0.05）,与Stroop色-词测验的单词总数、颜色总数、色-词总数呈负相关,但差异无统计学意义（P>0.05）。（6）将MDA、SOD、GDNF作为自变量,同时控制性别、年龄、教育年限、病程等混杂因素,对观察者治疗前的YMRS评分进行多因素线性回归分析,结果发现MDA（P<0.05）、SOD（P<0.05）和GDNF（P<0.05）浓度对YMRS评分仍然有显着性的影响。结论:（1）治疗前,BD患者血清MDA、SOD浓度明显高于对照组,而GDNF浓度明显低于对照组。经治疗后随着症状的改善,患者血清的MDA、SOD浓度显着下降,而GDNF浓度明显上升。（2）治疗前,观察组血清MDA、SOD、GDNF浓度与患者的疾病严重程度和认知功能存在相关性。（3）本研究提示双相情感障碍患者存在明显的氧化应激状态和神经营养因子水平的异常,而MDA、SOD和GDNF可能与双相情感障碍疾病严重程度、认知功能水平和临床疗效之间存在一定的关联性。
瞿源[5]（2021）在《脂多糖诱导小鼠形成免疫耐受后对缺血性脑中风的影响》文中认为小胶质细胞作为中枢神经系统的常驻固有免疫细胞,在脑中风发生过程中起着不可或缺的作用。目前最新研究报道指出,小胶质细胞可被诱导形成免疫耐受。然而,脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导小鼠形成免疫耐受后对缺血性脑中风的影响,以及处于耐受状态下小胶质细胞糖酵解与氧化磷酸化水平的变化尚不清楚。在本实验中,我们首先通过腹腔注射的方式连续4天向小鼠体内注射0.5mg/kg的LPS构建LPS诱导的免疫耐受模型。在小鼠建立免疫耐受后的第4天,我们采用化学光敏剂Rose bengal对耐受后的小鼠构建了急性缺血性脑中风模型,同时应用Nissl染色法、Fluoro-Jade C染色法和免疫荧光染色法分别对梗死体积、退行性神经元以及细胞因子的变化进行检测。在体外实验中,我们通过培养原代小胶质细胞以及BV-2细胞,来检测LPS诱导小胶质细胞形成免疫耐受后对小胶质细胞迁移、吞噬、炎症和增殖的影响。与此同时,我们对免疫耐受处理后的小胶质细胞进行氧糖剥夺再灌注,同样观察小胶质细胞迁移、吞噬、炎症和增殖的影响。最后,我们分别应用D-2-脱氧葡萄糖（2-DG）以及干扰素-γ（IFN-γ）来调节处于耐受状态小胶质细胞的糖酵解以及氧化磷酸,以此探究小胶质细胞免疫耐受与代谢水平变化之间的关系。实验研究结果发现,在体内LPS诱导的免疫耐受降低了中风后小鼠梗死体积、退行性神经元数量、小胶质细胞的激活数量以及促炎因子的表达,但增强了抑炎因子的表达。在体外实验中,LPS诱导的小胶质细胞免疫耐受,使得小胶质细胞迁移能力、促炎因子的表达、细胞增殖以及细胞吞噬能力降低。在氧糖剥夺再灌注过程中处于免疫耐受状态的小胶质细胞迁移能力、促炎因子的表达和细胞增殖水平仍处于抑制状态,但吞噬能力在氧糖剥夺再灌注后却显着上升。最后,通过2-DG和IFN-γ分别抑制糖酵解以及增强氧化磷酸化,发现促炎因子表达上调、细胞迁移能力上升、细胞增殖水平上调以及吞噬能力下降,以上现象表明LPS诱导的小胶质细胞免疫耐受被打破。以上结果表明,LPS诱导的免疫耐受可以减轻缺血性脑中风带来的损伤,这可能与小胶质细胞免疫功能的改变息息相关,而抑制糖酵解或增强氧化磷酸化可以打破小胶质细胞的免疫耐受状态。这些结果为小胶质细胞代谢状态与免疫功能间关系的研究提供新的见解,并为缺血性脑中风的治疗提供新的思路。
刘振辉[6]（2021）在《仿生导电人工神经支架的研究》文中进行了进一步梳理目的:（1）制备具有导电功能的多微通道多壁碳纳米管琼脂糖导电支架,并对其进行表征,验证其生物相容性,利用支架进行细胞三维立体培养,研究电刺激对RSC96细胞生长的影响。（2）制备具有取向性纳米纤维的PLLA纤维膜,并对其进行表征,验证其生物相容性,研究纤维取向性对RSC96细胞信号蛋白的影响。（3）制备仿生导电人工神经支架,将支架植入大鼠坐骨神经缺损,探讨仿生导电人工神经支架对大鼠坐骨神经修复效果和机制。方法:（1）利用梯度冷冻和冷冻干燥技术制备出具有多微通道多壁碳纳米管琼脂糖导电支架。通过微结构、溶胀和脱溶涨、导电率、形状记忆功能、载药及药物释放性能、力学性能和生物相容性对制备的多微通道多壁碳纳米管琼脂糖导电支架进行表征,对三维立体培养的RSC96细胞进行组织学评价,观察不同培养条件下细胞生长行为。（2）利用静电纺丝技术制备出具有取向纳米纤维的PLLA纤维膜。通过扫描电镜、力学性能、降解性和生物相容性对制备的PLLA纤维膜进行表征。利用免疫荧光技术研究纤维取向性对RSC96细胞ERK、P38MAPK、MEK和LRP4蛋白的影响。（3）利用定制的模具制备多微通道导电支架,将第二部分制备的高取向PLLA纤维膜和定制的多微通道导电支架组合成仿生导电人工神经支架,并将神经支架植入到大鼠坐骨神经缺损处。将实验动物分为支架组（S）、支架联合电刺激组（S&E）和自体神经移植组（AT）,通过坐骨神经功能指数、神经电生理检测、肌肉组织学检测、再生神经的组织学检测来分析仿生导电神经支架对周围神经再生的影响。结果:（1）加入的多壁碳纳米管没有影响琼脂糖支架的孔隙组成比和形状记忆功能,但0.025%wt多壁碳纳米管提高了支架在溶胀平衡状态下的溶胀率和保水能力。多壁碳纳米管改变了琼脂糖支架的电导率、载药及药物释放能力和力学性能。高浓度多壁碳纳米管对RSC96细胞和PC12细胞的增殖有一定影响。电镜下PC12细胞在多壁碳纳米管琼脂糖支架上生长状态良好。多壁碳纳米管的加入未改变RSCs细胞的S100β表达量。当电刺激存在时,RSC96细胞层沿支架纵轴排列较好,0.025%MWCNT-琼脂糖支架和0.05%MWCNT-琼脂糖支架表现出更好的细胞黏附性。（2）制备的PLLA纤维膜为多孔结构,纤维大部分为取向排列,高取向纤维膜的纤维取向性更高,其表面光滑,粗细均匀,纤维间形成立体的三维孔隙并分布于整个纤维膜。取向PLLA纤维膜的拉伸强度为（59.06±2.49）MPa,取向PLLA纤维膜的拉伸强度为（56.82±2.80）MPa,两种纤维膜拉伸强度没有统计学差异;取向PLLA纤维膜的杨氏模量为（1037.07±133.30）MPa,高取向PLLA纤维膜的杨氏模量为（971.45±112.39）MPa,两种纤维膜杨氏模量没有统计学差异;取向PLLA纤维膜的断裂伸长率为364.48±53.79,高取向PLLA纤维膜的断裂伸长率为356.89±40.21,两种纤维膜断裂伸长率没有统计学差异。增加PLLA纤维膜的取向,并未明显改变纤维膜的拉伸强度、杨氏模量和断裂延伸率。改变纤维膜的纤维取向程度,对PLLA纤维膜的降解速率没有影响。取向PLLA纤维膜和高取向PLLA纤维膜对RSC96细胞的增殖均没有影响。和取向性纤维膜相比,高取向的PLLA纤维膜上的RSC96细胞呈现出现明显的丝状伪足,沿着排列整齐的纳米纤维延伸。和取向性PLLA纤维膜相比,高取向PLLA纤维增加了RSC96细胞ERK、P38 MAPK、MEK和LRP4蛋白表达量（P<0.01）。（3）制备的仿生导电人工神经支架跟大鼠坐骨神经匹配良好,植入神经缺损出未见异物反应。S&E组坐骨神经功能指数、神经电生理结果、肌肉组织学结果、轴突和髓鞘再生效果接近AT组,好于S组。术后12周时免疫组化结果显示,NF-H蛋白和S00-β蛋白表达,S&E组和AT组的高于S组（P<0.01）,而S&E组接近AT组。LRP4蛋白和P38MAPK蛋白表达,AT组高于S组（P<0.01）,但AT和S&E组,S&E组和S组相比均无差异无统计学意义。ERK蛋白和MEK蛋白表达情况,AT组高于S组和S&E组（P<0.01）,S&E组和S组两者相比差异无统计学意义。结论:（1）多壁碳纳米管琼脂糖支架具有高的孔隙率、一定的形状记忆功能、载药及药物释放能力、导电能力,良好的生物相容性。在电刺激存在时,具有导电性能的多壁碳纳米管琼脂糖支架对RSC96细胞生长具有引导作用。（2）和取向性的PLLA纤维膜相比,高取向性的PLLA纤维膜未改变其力学性能、降解性和生物相容性,但增加了ERK、P38 MAPK、MEK和LRP4蛋白的表达量,能引导RSC96细胞生长和迁移,这有利于其在周围神经再生中的应用。（3）仿生导电人工神经支架联合电刺激能够增强周围神经再生。电刺激可能通过ES通过与MAPK信号通路的激活促进周围神经再生,ERK、P38MAPK、MEK和LRP4可能参与周围神经再生。
刘洪雨[7]（2020）在《激活素A参与缺血性脑损伤小胶质细胞极化表型变化的研究》文中认为缺血性脑损伤具有复杂的病理生理过程,涉及多种损伤及修复机制。中枢神经系统中小胶质细胞对所处微环境、不同刺激信号产生差异应答,表现出不同的功能表型M1型、M2型,小胶质细胞这种极化行为在脑缺血损伤中发挥着“双刃剑”的作用,表型的极性可能加重损伤或促进修复。激活素A（activinA,Act A）作为转化生长因子-β（transforminggrowthfactor-β,TGF-β）超家族中成员之一,其受体和结合蛋白广泛分布于脑组织,缺血性脑损伤可引起Act A的表达上调,通过激活不同的信号通路,表现神经保护活性,参与神经元损伤后修复。Act A可能是调控小胶质细胞极化行为的重要因子,但其机制尚不清楚。本研究为探讨缺血性脑损伤小胶质细胞极化规律及Act A参与调节小胶质细胞极化的可能机制,通过体内实验进行大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）建立大鼠局灶性脑缺血损伤模型,体外实验建立小鼠小胶质细胞（BV2）氧糖剥夺/复氧（oxygenand glucose deprivation/repoxygenation,OGD/R）模型,根据缺血/缺氧不同时间点进行分组,检测Act A/Smads信号通路、小胶质细胞表型在缺血性脑损伤中的表达变化,并研究激活素A干预小胶质细胞极化的变化趋势。本研究包括以下内容:1.局灶性缺血性脑损伤中Act A/Smads信号通路的表达变化目的:检测不同缺血时间点Act A/Smads信号通路各位点活化情况。方法:应用Longa线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型（MCAO）,选取不同缺血时间点（0d、1d、3d、5 d、7 d及14 d）并进行随机分组,采用改良神经功能缺损严重程度量表（modifiedneurological severity score,mNSS）评价神经功能损伤程度,TTC染色法分析缺血性脑梗死区域体积,HE染色评价梗死后病理变化,实时荧光定量PCR、Western blot法检测脑组织内Act A/Smads通路相关跨膜受体（ActRⅡ）、受体下游因子（Smad2）基因及蛋白的表达水平。结果:MCAO局灶性脑缺血模型建立后,神经功能学评分提示存在明显的功能缺损,随缺血时间延长,评分逐渐降低;TTC染色可见明显的脑梗死病灶,随缺血时间延长,梗死脑组织体积逐渐降低;脑组织冠状位切片HE染色可见皮质梗死核心区大量神经元细胞坏死,细胞核固缩、核仁显示不清;Act A/Smads信号通路中Act A、Act AⅡ型受体及受体复合物中Smad2分别在基因及蛋白水平表达升高,随着缺血时间的延长,在缺血后3-5 d达到表达高峰,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:缺血性脑损伤可诱导Act A表达,上调Act A/Smads信号通路中跨膜受体、受体下游因子基因及蛋白水平的表达,Act A/Smads信号通路参与了缺血性脑损伤过程,缺血3-5 d表达达到高峰,为后续探讨Act A/Smads信号通路与小胶质细胞在缺血性脑损伤中的关系奠定了实验基础。2.局灶性缺血性脑损伤小胶质细胞表型变化研究目的:研究缺血性脑损伤不同缺血时间点小胶质细胞表型变化规律。方法:建立大鼠MCAO模型,选取不同缺血时间点（0d、1 d、3d、5 d、7d及14d）将实验大鼠进行随机分组,实时荧光定量PCR检测M1型小胶质细胞标志物（iNOS、CD86）、M2型小胶质细胞标志物（CD206、Arg-1）基因水平的表达;免疫组织化学法检测M1型标志物（iNOS、CD86）、M2型标志物（CD206、Arg-1）蛋白的原位表达,并计算阳性表达IOD的百分比。结果:实时荧光定量PCR结果显示缺血1 d组M1型小胶质细胞标志物（iNOS、CD86）及M2型小胶质细胞标志物（CD206、Arg-1）mRNA均处于低表达水平,iNOS基因表达水平从MCAO 3d开始逐渐升高,在缺血14d内保持升高的趋势;CD86基因表达水平在MCAO 5 d达到表达高峰后水平逐渐降低,MCAO 14 d时其表达水平接近缺血损伤初期表达水平;M2型小胶质细胞标志物CD206和Arg-1的基因表达趋势相同,二者均在MCAO 1-3 d内表达,在损伤3 d时达到表达高峰,随缺血时间延长,CD206、Arg-1表达水平逐渐降低;免疫组化结果与实时荧光定量PCR结果变化趋势基本一致。与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论:缺血性脑损伤可诱导小胶质细胞的极化,缺血早期以M2型为主,后期以M1型为主,提示了早期缺血诱导的小胶质细胞M2型极化,可能介导吞噬、抗炎作用,而后期M1型极化,可能介导慢性炎症损伤作用。3.Act A对局灶性缺血性脑损伤小胶质细胞表型变化的影响目的:研究Act A对缺血性脑损伤小胶质细胞极化趋势的影响。方法:建立大鼠MCAO模型,选取缺血损伤3d时间点,在MCAO造模6小时后侧脑室微量注射不同浓度的Act A,随机分为假手术组、MCAO 3 d组、MCAO 3 d+Act A2.5 μg/kg 组及 MCAO 3 d+Act A 7.5 μg/kg 组。通过 mNSS 评价神经功能损伤程度,TTC染色法分析缺血性脑梗死区域体积,实时荧光定量PCR检测Act A/Smads信号通路中Smad3、ActRⅡ基因水平、M1型标志物iNOS、M2型标志物CD206基因水平的表达;免疫组织化学法检测M1型标志物iNOS、M2型标志物CD206蛋白的原位表达,并计算阳性表达IOD百分比;结果:mNSS评价缺血性脑损伤后神经功能缺损结果显示Act A干预组评分明显优于MCAO 3 d组,Act A7.5μg/kg组评分优于Act A2.5μg/kg组,组间差异有统计学意义（P<0.05）;TTC染色测定结果显示干预组脑梗死体积明显小于MCAO 3 d组,ActA7.5μg/kg组小于ActA2.5μg/kg组,组间差异有统计学意义（P<0.05）;实时荧光定量PCR结果显示,M1型标志物iNOS基因在MCAO 3 d组表达升高,Act A干预后表达水平降低,MCAO 3 d+Act A 7.5μg/kg 组<MCAO 3 d+Act A 2.5μg/kg 组<MCAO 3 d 组;M2 型标志物 CD 206 基因 MCAO 3 d 组表达高于假手术组,Act A干预后CD206基因表达水平升高,MCAO 3 d+Act A 7.5μg/kg 组>MCAO 3 d+Act A2.5μg/kg 组水平>MCAO 3 d 组;Smad 3、ActR Ⅱ基因表达结果显示干预组水平高于MCAO 3 d组,MCAO 3 d+Act A 7.5μg/kg组高于MCAO 3 d+ActA2.5μg/kg组。差异有统计学意义（P<0.05）。结论:局灶性缺血性脑损伤后不同浓度Act A的干预,可减轻神经功能损伤程度、缩小脑梗死体积,促进Act A/Smads信号通路的表达,上调M2型标志物CD206的表达,下调表M1型标志物iNOS的表达,效应与干预浓度具有正相关性。Act A/Smads信号通路的活化可诱导小胶质细胞表型从M1型向M2型转化,这种变化可能发挥抗缺血损伤作用,为缺血性脑损伤的治疗提供潜在的转化靶点。4.Act A对小胶质细胞体外OGD/R过程中M1、M2型表达的影响目的:研究小鼠小胶质细胞BV2细胞OGD/R过程中不同时间点M1、M2型标志物、信号通路关键靶点的表达情况及Act A干预对M1、M2型表达的影响。方法:BV2细胞复苏后常规培养（高糖DMEM培养基,37℃、5%CO2）传代至第3代,通过更换无糖DMEM培养基、三气培养箱低氧培养（94%N2、5%CO2、1%O2）,建立BV2细胞氧糖剥夺/复氧（OGD/R）模型,将细胞分为对照组、OGD 1 h/R0h、OGD 1 h/R3 h、OGD 1 h/R6h、OGD 1h/R12h五组,Western blot对M1型标志物iNOS、M2型标志物IL-10及Act A/Smads信号通路Smad2蛋白表达水平进行检测;选择OGD1 h/R6h时间点,给予不同浓度Act A预培养BV2 细胞,分为对照组、OGD 1h/R6h 组、OGD 1h/R6h+Act A30nM组及OGD 1 h/R6h+Act A30nM组共四组,进一步Western blot检测各组M1型标志物iNOS、M2型标志物IL-10的表达情况及Smad2蛋白水平的表达情况。结果:体外实验成功培养BV2细胞并建立BV2细胞OGD/R模型,WesterBlot结果显示随复氧时间的延长,Act A/Smads信号通路Smad2蛋白表达逐渐增加,M1型标志物iNOS蛋白表达逐渐增加,M2型标志物IL-10蛋白表达逐渐增加,与R6 h达到高峰后表达水平有所回落;Act A预处理BV2小胶质细胞后,与OGD 1h/R 6 h组比较干预组Smad2蛋白表达逐渐增加,OGD 1 h/R 6 h+Act A50nM组高于OGD 1 h/R 6 h+Act A30nM组;M1型标志物iNOS蛋白表达干预组低于OGD 1 h/R 6 h 组,OGD 1 h/R 6 h+Act A50nM 组低于 OGD 1 h/R 6 h+Act A30nM组;M2型标志物蛋白水平表达逐渐升高,干预组高于OGD 1 h/R6 h组,OGD 1 h/R 6 h+Act A50nM 组高于 OGD 1 h/R 6 h+Act A30nM 组。结论:Act A可通过上调Act A/Smads信号通路中下游因子Smad2蛋白水平的表达,从而发挥神经保护作用,这一过程也参与调控了氧糖剥夺条件下BV2细胞极化过程,提示了 Act A/Smads信号通路可能通过调控小胶质细胞表型变化从而影响神经元细胞在缺血性损伤中的转归。
汪瑶[8]（2020）在《基于基因组学探究AKBA对大鼠坐骨神经损伤的修复机制》文中进行了进一步梳理近年来,随着小动物临床医学的快速发展,小动物周围神经损伤的病例逐年增多,周围神经损伤治疗已成为兽医师关注的焦点。因此,寻找开发治疗周围神经受损后的修复药物成为小动物临床的迫切需求。本试验以活血化瘀药乳香的活性成分11-羰基-β-乙酰乳香酸（acetyl-11-keto-β-boswellicacid,AKBA）为试验药物,研究其对坐骨神经损伤的修复作用,为今后开发小动物周围神经损伤治疗药物提供新的思路和方法。试验选取180～220 g雄性SD大鼠,随机分为空白组、假手术组、模型对照组、AKBA用药组以及甲钴胺对照组。空白组,未对大鼠做任何处理;假手术组,采用外科手术暴露大鼠坐骨神经,但对坐骨神经不做任何处理;其他三组均采用外科手术,暴露坐骨神经,利用血管钳挤压坐骨神经,制作坐骨神经损伤模型。试验给药采取灌胃的方式,分别对空白组（生理盐水）、假手术组（生理盐水）、模型对照组（生理盐水）、AKBA用药组（10mg/kg）、甲钴胺对照组（1 mg/kg）,给药30 d。于试验开始的第10 d、20 d和30 d进行坐骨神经功能指数（sciatic functional index,SFI）的检测和脚趾夹捏测试。第30 d,将所有大鼠剖杀、取样,透射电镜观察其坐骨神经髓鞘损伤修复情况;罗克沙尔固蓝（Luxol fast blue,LFB）染色髓鞘,镀银染色神经纤维,观察其损伤修复;免疫组化法检测髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein,MBP）和神经元III类β微管蛋白（β3Tubulin,Tuj1）;利用二代基因测序技术对损伤的坐骨神经进行全转录组基因检测,采用Fast QC软件分析测序得到的原始测序序列,Trim Galore方法对raw reads检测到的数据进行过滤,HISAT2软件将过滤后得到的clean reads与大鼠基因组数据库进行比对。差异基因筛选采用Cuffdiff软件并采用2种标准进行差异基因的筛选。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time Quantitative polymerase chain reaction,q RTPCR）技术和免疫印迹（Western blot,WB）技术对基因组学结果进行验证,进而明确AKBA用药组大鼠坐骨神经损伤修复的相关机制。结果:大鼠坐骨神经功能指数显示,AKBA用药组和甲钴胺对照组坐骨神经功能逐渐恢复,但模型对照组坐骨神经功能恢复较差。脚趾夹捏痛觉试验结果显示AKBA用药组和甲钴胺对照组大鼠疼痛反应在第10 d、20 d和30 d均高于模型对照组。透射电镜结果显示,AKBA用药组和甲钴胺对照组与模型对照组相比,髓鞘数目明显增多,排列致密。坐骨神经的LFB染色显示,模型对照组有大量髓鞘溶解,形成大量脂质空泡,髓鞘形状不一,较空白组数目减少;AKBA用药组和甲钴胺对照组髓鞘形状规则,数量丰富,无脂质空泡。坐骨神经的镀银染色结果显示,模型对照组的神经纤维不完整,神经轴突紊乱,厚度不均且在断端处包含更多的分离轴突;而AKBA用药组和甲钴胺组神经纤维完整,神经轴突厚度均匀。MBP的免疫组化结果显示:与模型对照组相比,空白组、假手术组和AKBA用药组的MBP表达水平极显着增加（P<0.01）,而甲钴胺对照组的MBP表达水平显着增加（P<0.05）。β3Tubulin的免疫组化结果显示:与模型对照组相比,空白组和AKBA用药组的β3Tubulin表达水平极显着增加（P<0.01）,而假手术组的β3Tubulin水平表达显着增加（P<0.05）。基因组学结果显示:模型对照组与AKBA用药组相比上调基因189个,下调基因69个;AKBA用药组与假手术组相比上调基因194个,下调基因161个,模型对照组与假手术组相比上调基因171个,下调239个。对比这些差异表达基因在基因本体论（Gene Ontology,GO）分析中,AKBA用药组与假手术组GO分析中,AKBA用药组在生物进程（Biological process,BP）占的比重最重,为最主要的分类项;而AKBA用药组与模型对照组,假手术组与模型对照组分别的GO分析中,也是BP占的比重大,差异基因在它的表达中最多。在京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）通路分析中,AKBA用药组与模型对照组差异表达基因富集最多的通路是吞噬作用这一通路。神经生长因子信号通路中也有2个重要的基因发挥作用,分别是脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）和神经生长因子受体（Nerve growth factor receptor,NGFR）。根据基因组学的结果对坐骨神经损伤后相关的基因BDNF、NGFR、神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）及其吞噬途径中髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）进行q RTPCR验证,结果显示:与模型对照组相比,AKBA用药组及甲钴胺对照组的NGFR、NGF、BDNF基因表达水平显着增加（P<0.01）,而与模型对照组相比,AKBA用药组和甲钴胺对照组的MPO基因表达水平显着减少（P<0.01）。同时对这几个基因的蛋白水平也进行的检测,结果显示:与模型对照组相比,AKBA用药组在BDNF、NGFR、NGF的蛋白含量显着升高（P<0.05或P<0.01）,MPO蛋白含量显着降低（P<0.01）。结论:AKBA促进大鼠损伤坐骨神经运动功能和感觉功能的恢复,加速神经纤维、髓鞘损伤的修复。AKBA能够提高神经营养因子途径中的BDNF,NGFR,NGF的基因表达和蛋白的含量,也能够降低调控吞噬途径信号通路中的MPO的蛋白含量,促进大鼠坐骨神经损伤的修复。
刘矿嫔[9]（2020）在《IncRNA-Malat1及相关转录因子参与调控背根节卫星胶质细胞转分化的作用及机制研究》文中指出[目 的]有研究表明,外周神经系统的背根神经节（Dorsal root ganglion,DRG）中存在神经发生的现象,这种现象与感觉神经元周围一类特殊的胶质细胞-卫星胶质细胞（Satellite glial cells,SGCs）有关。前期研究发现SGCs具有可塑性,具有多向分化潜能,条件具备时可转分化为神经元。通过高通量测序筛选的lncRNA表达谱,通过lncRNA Database功能注释结合GO和KEGG富集分析,初步预测lncRNA-Malatl参与调控SGCs的转分化过程,且与proBDNF负调控信息有关。因此本研究探讨lncRNA-Malatl及相关转录因子在调控背根节内卫星胶质细胞的转分化过程中的作用及可能机制。[方法]通过前期高通量测序分析及Q-PCR验证确定与本研究相关的lncRNA后,本研究继续进行DRG-SGCs的培养,通过从新生小鼠中提取背根神经节组织,并继续培养至原代卫星胶质细胞从组织中迁出,然后将所培养的SGCs分为正常组和Anti-proBDNF干预组（干预剂量4ug/ml）,在这6个时间点（24h、3d、7d、14d、21d、28d）收集SGCs进行如下实验:Q-PCR、Elisa、细胞免疫荧光、体外lncRNA-Malatl过表达及干扰实验。[结果]1.背根神经节卫星胶质细胞（原代）培养成功。2.通过Anti-proBDNF血清对卫星胶质细胞以及大鼠单侧坐骨神经损伤模型进行干预,Q-PCR验证前期相关靶基因并预测相关转录因子,与测序情况一致。3.通过Elisa试剂盒发现SGCs能够自分泌malat1、proBDNF/BDNF及其受体,并在转分化过程中表达水平发生变化,SGCs中malat1的表达可能影响胶质细胞表型变化,在SGCs转分化过程中malat1表达受到内源性anti-proBDNF分泌影响。4.构建转染实验载体,分别为过表达载体与干扰载体进行预实验,预实验说明试剂盒内的提供的慢病毒滴度与剂量可用于作为实验中的最适值。正式转染实验结果与预实验一致。5.免疫荧光结果鉴定,发现过表达及过表达后通过anti-proBDNF的干预,可以在一定程度上逆转malat1对于细胞促凋亡的作用,使细胞数量在一定程度上恢复;而干扰malat1后,低表达的malat1可能与anti-proBDNF协同调控细胞转分化。6.Q-PCR验证结果显示转染实验前后BDNF信号通路相关因子及其受体及转录因子 AKT1、NKX2.2、CTNNB1、FZD6 存在差异表达。[结论]1.经过lncRNA表达谱分析及生物信息学分析筛选出LncRNA-malat1及其相关的转录因子可能与SGC转分化过程有关,并且可能通过BDNF信号通路发挥作用。2.在正常的背根神经节组织和卫星胶质细胞中存在malat1、BDNF/proBDNF及其受体TrkB/p75NTR,它们的表达水平受到内源性抗proBDNF影响。3.敲低/过表达malat1可能通受到proBNDF/P75NTR和BDNF/TrkB信号调控来影响背根节卫星胶质细胞转分化。
申雪飞[10]（2020）在《神经损伤体外模型构建与机理研究及新型修复单元初探》文中指出由外伤（如车祸等）造成的脑创伤损伤可以引发死亡和长期致残,一直受世界范围的关注,根据脑创伤程度的不同会引起头痛、记忆减退、创伤性脑卒中等中枢神经疾病。其病理机制十分复杂,从分子、神经元到神经元网络各层次的变化都有涉及,特别是对创伤性中枢神经损伤整体网络病理变化目前尚不明确,而对创伤性神经元网络损伤的修复措施也比较单一。本课题一方面从体外构建创伤性中枢神经多点损伤模型出发,研究损伤后神经元网络整体病理变化;另一方面从综合多种有效神经修复措施设计理念出发,制备面向神经修复的新型纳米结构植入式神经单元。本论文主要的研究工作和取得的成果如下:1.研究了创伤性神经损伤体外模型构建及神经元网络形态变化。介绍了一种基于准分子激光加工结合注塑技术快速制备图形化结构微流控阵列芯片的办法,制备了底面光滑的微流控阵列芯片,在制备的阵列芯片上培养了不同密度的生物神经网络构建创伤性神经多点损伤体外模型,与玻璃片开放空间培养的生物神经网络进行比较,对神经元网络的生长形态进行了分析,结果表明阵列芯片（病理模型）和玻璃片开放空间形成的神经元网络都能正常生长,但是相同培养天数下,芯片上神经元密度低于开放空间中神经元密度,芯片上神经元突起平均长度低于相同培养天数下开放空间神经元平均长度;从结果上看微柱阵列在制约了部分突起生长的同时,也促进了一部分延微柱边缘的神经突起的生长,由此表明损伤区域附近的神经元轴突和突起生长异常,导致整网形态发生改变,进而影响信号传输。2.研究了创伤性神经损伤体外模型构建及神经元网络功能连接性变化。用微流控阵列芯片体外构建创伤性神经损伤体外模型,并用微电极阵列（MEAs）进行病理模型的放电信息采集,用交叉协方差分析和图论分析的方法对所记录的电生理数据进行分析。研究发现,阵列芯片培养（病理模型）和开放空间上培养的神经网络的放电率、簇发放电率、网络簇发放电率、连接强度随着培养天数的增加而增加,但相同培养时间下,按病理模型培养的神经网络与开放空间上培养神经网络相比,网络密度和小世界属性都有所提高。结果表明病理模型下神经元网络功能连接性发生了改变,与其网络形态变化相对应。3.研究导电神经修复单元及其性能。研究了多壁碳纳米管/丝素蛋白膜共混法和表面沉积法制备,以及在此基础上通过激光辐照使碳纳米管周围丝素蛋白发生碳化形成网络碳微米管（PCMTs）,制备了多壁碳纳米管/多孔网络碳微米管/丝素蛋白植入式神经修复单元,利用扫描电子显微镜、拉曼光谱仪等对复合材料进行了表征分析,发现神经修复单元为孔隙率和机械性性能优异的多孔网络结构,能够用于改善神经损伤环境,及药物和营养因子缓释。通过三电极测试体系对多壁碳纳米管/多孔网络碳微米管/丝素蛋白电极的循环伏安特性、电化学交流阻抗和最大安全注入电荷量(Qinj)进行了测试分析。结果表明多壁碳纳米管/多孔网络碳微米管/丝素蛋白电极展现出了优异的电化学性能,Qinj可达到5.7m C/cm2,可以安全的用于电刺激修复神经损伤。为后续开展促进神经网络生长和修复的有效措施探索研究打下基础。
二、胶质细胞源性神经营养因子在神经系统损伤后表达变化意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、胶质细胞源性神经营养因子在神经系统损伤后表达变化意义（论文提纲范文）
（1）电刺激联合Cs-Au/GelMA水凝胶对臂丛神经损伤后神经病理性疼痛的疗效及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 第2章 综述 |
| 2.1 神经病理性疼痛的概述 |
| 2.2 神经病理性疼痛的调节机制 |
| 2.2.1 神经胶质细胞在神经病理性疼痛中的调节机制 |
| 2.2.2 脑源性神经营养因子在神经病理性疼痛中的调节机制 |
| 2.2.3 促炎症细胞因子在神经病理性疼痛中的调节机制 |
| 2.2.4 趋化因子在神经病理性疼痛中的调节机制 |
| 2.3 神经病理性疼痛的治疗 |
| 2.4 神经病理性疼痛的动物模型 |
| 2.4.1 脊神经选择性结扎模型 |
| 2.4.2 脊神经根切断模型 |
| 2.4.3 坐骨神经轴索切断模型 |
| 2.4.4 坐骨神经慢性压缩性损伤 |
| 2.4.5 坐骨神经半结扎模型 |
| 2.4.6 坐骨神经分支损伤模型 |
| 2.4.7 臂丛神经损伤模型 |
| 2.5 总结 |
| 第3章 臂丛神经损伤后病理性神经痛产生的病理生理基础 |
| 3.1 研究背景 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 仪器耗材 |
| 3.2.2 药品试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 实验动物 |
| 3.3.2 手术造模 |
| 3.3.3 机械性刺激缩足阈值(MWT)检测 |
| 3.3.4 热缩足反射潜伏期(TWL)检测 |
| 3.3.5 免疫印迹实验 |
| 3.3.6 统计分析 |
| 3.4 研究结果 |
| 3.4.1 机械性刺激缩足阈值(MWT)行为学改变 |
| 3.4.2 热缩足反射潜伏期(TWL)行为学改变 |
| 3.4.3 PCRA术后大鼠脊髓组织中小胶质细胞的变化 |
| 3.4.4 PCRA术后大鼠脊髓组织中星形胶质细胞的变化 |
| 3.4.5 PCRA术后大鼠小脊髓组织中促炎症细胞因子的变化 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 CS-Au/GelMA水凝胶的制备与表征 |
| 4.1 研究背景 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 仪器耗材 |
| 4.2.3 药品试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 神经干细胞的提取和培养 |
| 4.3.2 神经干细胞滴片培养 |
| 4.3.3 免疫荧光染色法鉴定神经干细胞 |
| 4.3.4 Gel MA水凝胶的合成 |
| 4.3.5 Cs-Au纳米粒子的制备 |
| 4.3.6 Cs-Au纳米粒子的表征 |
| 4.3.7 Cs-Au纳米粒子生物安全性的检测 |
| 4.3.8 Cs-Au/Gel MA水凝胶的制备与表征 |
| 4.3.9 Cs-Au/Gel MA水凝胶的体内降解 |
| 4.4 研究结果 |
| 4.4.1 神经干细胞的提取与鉴定 |
| 4.4.2 Gel MA水凝胶的制备 |
| 4.4.3 Cs-Au纳米粒子的表征 |
| 4.4.4 Cs-Au纳米粒子生物安全性的检测 |
| 4.4.5 Cs-Au/Gel MA水凝胶的亲水性和机械性能 |
| 4.4.6 Cs-Au/Gel MA水凝胶的体内降解 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第5章 CS-Au/GelMA水凝胶联合电刺激治疗在PCRA后神经病理性疼痛中的作用及机制 |
| 5.1 研究背景 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 仪器耗材 |
| 5.2.3 药品试剂 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 神经干细胞的提取和培养 |
| 5.3.2 细胞实验筛选电刺激频率 |
| 5.3.3 手术造模及分组治疗 |
| 5.3.4 免疫印迹实验 |
| 5.3.5 免疫荧光实验 |
| 5.3.6 机械性刺激缩足阈值(MWT)检测 |
| 5.3.7 热缩足反射潜伏期(TWL)检测 |
| 5.3.8 统计分析 |
| 5.4 研究结果 |
| 5.4.1 电刺激对神经干细胞 |
| 5.4.2 PCRA术后大鼠脊髓组织中小胶质细胞的变化 |
| 5.4.3 PCRA术后大鼠脊髓组织中星形胶质细胞的变化 |
| 5.4.4 PCRA术后大鼠小脊髓组织中促炎症细胞因子的变化 |
| 5.4.5 机械性刺激缩足阈值(MWT)行为学改变 |
| 5.4.6 热缩足反射潜伏期(TWL)行为学改变 |
| 5.4.7 脑源性神经营养因子变化 |
| 5.4.8 氧化损伤标志物变化 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 小结 |
| 第6章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）通腑逐瘀法指导下抵当汤加减调控AQP4表达治疗大鼠急性脊髓损伤的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 自制脊髓打击器与NYU打击器建立脊髓损伤模型研究 |
| 1.目的 |
| 2.材料和方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.小结 |
| 6.不足和展望 |
| 第二部分 抵当汤加减调节AQP4 表达对SCI大鼠脊髓水肿的作用研究 |
| 1.目的 |
| 2.材料 |
| 3.方法 |
| 4.实验结果 |
| 5.讨论 |
| 6.小结 |
| 7.不足与展望 |
| 第三部分 抵当汤加减含药血清对反应性星形胶质细胞的活化、迁移及神经生长相关细胞因子分泌的作用 |
| 1.目的 |
| 2.材料 |
| 3.实验方法 |
| 4.实验结果 |
| 5.讨论 |
| 6.小结 |
| 7.不足和展望 |
| 本研究的创新点 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 附件1 自制简易打击器与NYU打击器 |
| 附件2 脊髓打击损伤模型 |
| 附录3 BBB评分 |
| 附录4 Reuter评分 |
| 附录5 综述 水通道蛋白在急性脊髓损伤中的作用机制 |
| References |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（3）联用神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 神经因子对重型颅颅脑创伤后神经保护的研究进展 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（4）双相情感障碍患者血清氧化应激指标及胶质细胞源性神经营养因子水平的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 1 对象和方法 |
| 1.1 对象 |
| 1.2 研究工具和方法 |
| 1.3 观察指标 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组一般资料对比 |
| 2.2 两组受试者外周血清MDA、SOD、GDNF对比 |
| 2.3 观察组患者治疗前后YMRS评分对比 |
| 2.4 治疗前后认知功能对比 |
| 2.5 观察组血清MDA、SOD、GDNF浓度与治疗前YMRS评分相关性分析 |
| 2.6 观察组治疗前YMRS评分的多因素线性回归分析 |
| 2.7 观察组血清MDA、SOD、GDNF浓度与治疗前认知功能评分相关性分析 |
| 2.8 YMRS评分与治疗前认知功能相关性分析 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 氧化应激指标及胶质细胞源性神经营养因子在双相情感障碍中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（5）脂多糖诱导小鼠形成免疫耐受后对缺血性脑中风的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 急性缺血性脑中风对中枢神经系统的影响 |
| 1.1.1 缺血性脑中风诱导神经元凋亡的机制 |
| 1.1.2 小胶质细胞与缺血性脑中风 |
| 1.1.3 星形胶质细胞与缺血性脑中风 |
| 1.1.4 少突胶质细胞与缺血性脑中风 |
| 1.1.5 急性缺血性脑中风的治疗策略 |
| 1.2 小胶质细胞的激活 |
| 1.2.1 缺血脑中风与小胶质细胞的激活 |
| 1.2.2 缺血脑中风中小胶质细胞与炎症因子的相互关系 |
| 1.2.3 缺血脑中风中小胶质细胞与趋化因子的相互作用 |
| 1.2.4 小胶质细胞的极化 |
| 1.2.5 缺血性脑中风发生时小胶质细胞与神经元间的相互作用 |
| 1.2.6 小胶质细胞的吞噬功能 |
| 1.3 LPS介导免疫耐受的研究概况 |
| 1.3.1 免疫记忆 |
| 1.3.2 小胶质细胞与免疫记忆 |
| 1.3.3 LPS诱导小胶质细胞形成免疫训练与免疫耐受 |
| 1.3.4 小胶质细胞形成免疫记忆的表观遗传学机制 |
| 1.3.5 炎症因子调控小胶质细胞的免疫记忆状态 |
| 1.4 D-2-脱氧葡萄糖与代谢重编程 |
| 1.5 IFN-γ与代谢重编程 |
| 1.6 本课题研究的目的及意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 BV-2细胞系 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.1.4 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 LPS诱导小鼠免疫耐受模型构建 |
| 2.2.2 小鼠急性缺血性脑中风模型构建 |
| 2.2.3 小鼠灌流与取材 |
| 2.2.4 尼氏染色 |
| 2.2.5 Fluoro-jade C(FJC)染色 |
| 2.2.6 免疫荧光染色 |
| 2.2.7 原代小胶质细胞的培养 |
| 2.2.8 BV-2细胞的培养 |
| 2.2.9 LPS诱导小胶质细胞免疫耐受模型构建 |
| 2.2.10 氧糖剥夺与再灌注模型的建立 |
| 2.2.11 实时荧光定量PCR对炎症因子表达量的检测 |
| 2.2.12 细胞吞噬能力的测定 |
| 2.2.13 细胞迁移能力的测定 |
| 2.2.14 Brd U染色法测定细胞增殖 |
| 2.3 数据统计与分析 |
| 2.3.1 小鼠脑梗塞体积的统计 |
| 2.3.2 FJC阳性细胞数目的统计 |
| 2.3.3 免疫荧光染色细胞数目的统计 |
| 2.3.4 实验数据的分析 |
| 第三章:实验结果 |
| 3.1 LPS诱导小胶质细胞形成免疫耐受后对缺血性脑中风的影响 |
| 3.1.1 急性缺血性脑中风模型的构建 |
| 3.1.2 梗死体积的变化 |
| 3.1.3 梗死边界区退行性神经元的密度变化 |
| 3.1.4 梗死边界区小胶质细胞的激活情况 |
| 3.1.5 梗死边界区iNOS的表达量 |
| 3.1.6 梗死边界区ARG-1的表达量 |
| 3.2 体外诱导小胶质细胞形成免疫耐受后其生理状态的变化 |
| 3.2.1 原代小胶质细胞的培养与纯化 |
| 3.2.2 LPS处理原代小胶质细胞后细胞因子表达量随时间的变化 |
| 3.2.3 LPS诱导BV-2细胞形成免疫耐受 |
| 3.2.4 BV-2细胞形成免疫耐受后对其形态的影响 |
| 3.2.5 BV-2细胞形成免疫耐受后对细胞吞噬能力的影响 |
| 3.2.6 BV-2细胞形成免疫耐受后对迁移能力的影响 |
| 3.2.7 BV-2细胞形成免疫耐受后对细胞增殖能力的影响 |
| 3.3 体外诱导小胶质细胞形成免疫耐受后对氧糖剥夺再灌注的影响 |
| 3.3.1 原代培养小胶质细胞炎症因子在m RNA水平表达量变化 |
| 3.3.2 BV-2细胞炎症因子在m RNA水平表达量变化 |
| 3.3.3 BV-2细胞形态发生的变化 |
| 3.3.4 BV-2细胞吞噬能力的变化 |
| 3.3.5 BV-2细胞迁移能力的变化 |
| 3.3.6 BV-2细胞增殖水平的改变 |
| 3.4 LPS诱导小胶质细胞形成免疫耐受后代谢状态的变化 |
| 3.4.1 抑制糖酵解对BV-2细胞炎症因子表达的影响 |
| 3.4.2 抑制糖酵解对BV-2胞吞噬能力的影响 |
| 3.4.3 抑制糖酵解对BV-2细胞迁移能力的影响 |
| 3.4.4 抑制糖酵解对BV-2细胞增殖能力的影响 |
| 3.4.5 增强氧化磷酸化对BV-2细胞炎症因子表达的影响 |
| 3.4.6 增强氧化磷酸化对BV-2细胞吞噬能力的影响 |
| 3.4.7 增强氧化磷酸化对BV-2细胞迁移能力的影响 |
| 3.4.8 增强氧化磷酸化对BV-2细胞增殖能力的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 LPS诱导的小鼠形成免疫耐受后对缺血性脑中风的影响 |
| 4.2 小胶质细胞形成免疫耐受后进行氧糖剥夺再灌注对小胶质细胞生理功能的影响 |
| 4.3 糖酵解与氧化磷酸化小胶质细胞免疫状态的影响 |
| 第五章:结论 |
| 5.1 研究结论 |
| 5.2 研究展望 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词表 |
| 在学期间的研究成果 |
| 致谢 |
（6）仿生导电人工神经支架的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 多微通道导电神经支架的设计和制备及物理性能和生物相容性能检测评价 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验对象及主要试剂 |
| 1.3 实验分组及方法 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 聚左旋乳酸取向性纤维膜及其生物相容性的研究 |
| 1 研究方法与内容 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验对象及主要试剂 |
| 1.3 实验分组及方法 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 仿生导电人工神经支架修复大鼠坐骨神经缺损的研究 |
| 1 研究方法与内容 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验对象和主要试剂 |
| 1.3 实验分组和方法 |
| 2 结果 |
| 3.讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 周围神经损伤修复的细胞和分子机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（7）激活素A参与缺血性脑损伤小胶质细胞极化表型变化的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第1章 前言 |
| 第2章 文献综述 |
| 2.1 小胶质细胞研究进展 |
| 2.1.1 小胶质细胞的活性状态 |
| 2.2 小胶质细胞与缺血性脑损伤 |
| 2.2.1 小胶质细胞参与缺血性脑损伤的神经免疫反应 |
| 2.2.2 小胶质细胞参与缺血性脑损伤的神经炎症反应 |
| 2.3 Activin A/Smads信号通路在缺血性脑损伤中作用的研究进展 |
| 2.3.1 ActivinA/Smads信号转导 |
| 2.3.2 ActivinA参与缺血性脑损伤的病理生理过程 |
| 2.3.3 ActivinA与小胶质细胞 |
| 第3章 局灶性缺血性脑损伤中Act A/Smads信号通路的表达变化 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 大脑中动脉阻塞局灶性脑缺血模型建立 |
| 3.1.5 神经功能评分 |
| 3.1.6 脑梗死体积测定 |
| 3.1.7 苏木精—伊红染色 |
| 3.1.8 Western blot |
| 3.1.9 实时荧光定量PCR (Quantitative Realtime-PCR) |
| 3.1.10 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 MCAO模型不同缺血时间后的神经功能评分 |
| 3.2.2 脑梗死体积测定 |
| 3.2.3 脑组织神经元病理形态改变 |
| 3.2.4 MCAO模型不同缺血时间组ActA基因表达 |
| 3.2.5 MCAO模型不同缺血时间组ActRⅡ基因表达 |
| 3.2.6 MCAO模型不同缺血时间组Smad2蛋白表达 |
| 3.2.7 MCAO模型不同缺血时间组Smad7蛋白表达 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 局灶性缺血性脑损伤小胶质细胞表型变化研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验动物及动物模型建立 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.1.4 免疫组化分析 |
| 4.1.5 实时荧光定量PCR(Quantitative Realtime-PCR) |
| 4.1.6 统计学分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 MCAO模型不同组别M1型标志物iNOS基因表达 |
| 4.2.2 MCAO模型不同组别M1型标志物CD86基因表达 |
| 4.2.3 MCAO模型不同组别M2型标志物CD206基因表达 |
| 4.2.4 MCAO模型不同组别M2型标志物Arg-1基因表达 |
| 4.2.5 iNOS和CD206免疫组织化学染色结果 |
| 4.2.6 神经元细胞标志物NeuN、小胶质细胞标志物Iba1免疫组织化学 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 ACTA对局灶性缺血性脑损伤小胶质细胞表型变化的影响 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 主要仪器 |
| 5.1.4 大脑中动脉阻塞局灶性脑缺血模型建立 |
| 5.1.5 侧脑室微量注射 |
| 5.1.6 实时荧光定量PCR(Quantitative Realtime-PCR) |
| 5.1.7 免疫组化分析 |
| 5.1.8 神经功能评分 |
| 5.1.9 脑梗死体积测定 |
| 5.1.10 统计学分析 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 神经功能评分 |
| 5.2.2 脑梗死体积 |
| 5.2.3 ActA干预后各组M1型标志物iNOS基因表达 |
| 5.2.4 Act A干预后各组M2型标志物CD206基因表达 |
| 5.2.5 Act A干预后各组Act A/Smads信号通路Smad3、ActRⅡ的基因表达 |
| 5.2.6 Act A干预后各组iNOS和CD206免疫组织化学染色结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第6章 ACTA对小胶质细胞体外OGD/R过程中M1、M2表型表达的影响 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 实验细胞 |
| 6.1.2 主要试剂 |
| 6.1.3 主要仪器 |
| 6.1.4 BV2细胞OGDR模型建立 |
| 6.1.5 Wsstern blot |
| 6.1.6 ActA给药方法 |
| 6.1.7 CCK8检测细胞活力 |
| 6.1.8 统计学分析 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 OGD/R损伤对BV2细胞活力的影响 |
| 6.2.2 Act A/Smads信号通路在BV2细胞OGD/R损伤后的表达 |
| 6.2.3 小胶质细胞表型标志物在BV2细胞OGD/R损伤后的表达 |
| 6.2.4 ActA干预BV2细胞OGD/R过程Act A/Smads信号通路及小胶质细胞标志物表达 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 第7章 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（8）基于基因组学探究AKBA对大鼠坐骨神经损伤的修复机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 周围神经损伤 |
| 1.1.1 周围神经损伤性疾病在小动物临床的发病情况 |
| 1.1.2 周围神经损伤的病理变化 |
| 1.2 周围神经损伤修复 |
| 1.2.1 周围神经损伤后对神经元的修复 |
| 1.2.2 周围神经损伤后对轴突的修复 |
| 1.3 神经营养因子在神经损伤修复中的作用 |
| 1.3.1 神经营养因子受体在神经损伤修复中的作用 |
| 1.3.2 神经生长因子在神经损伤修复中的作用 |
| 1.3.3 脑源性神经营养因子在神经损伤修复中的作用 |
| 1.4 AKBA在周围神经损伤中的作用 |
| 1.5 甲钴胺在周围神经损伤中的作用 |
| 1.6 目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要仪器与试剂 |
| 2.1.1 主要仪器 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.2 试验动物及分组 |
| 2.2.1 试验动物的饲养 |
| 2.2.2 大鼠坐骨神经损伤模型的制作与分组 |
| 2.3 大鼠坐骨神经损伤后修复的检测指标与方法 |
| 2.3.1 大鼠坐骨神经感觉功能的测试 |
| 2.3.2 大鼠坐骨神经功能指数的测定 |
| 2.3.3 大鼠坐骨神经组织学观察 |
| 2.3.4 大鼠坐骨神经超微结构观察 |
| 2.4 大鼠坐骨神经基因组学的检测 |
| 2.4.1 坐骨神经的样品采样与保存 |
| 2.4.2 rRNA去除链特异性文库构建 |
| 2.4.3 数据分析 |
| 2.5 大鼠坐骨神经MRNA表达的检测 |
| 2.5.1 坐骨神经组织总RNA的提取 |
| 2.5.2 坐骨神经组织cDNA的合成 |
| 2.5.3 引物的合成和实时荧光定量PCR(q RT-PCR) |
| 2.6 大鼠坐骨神经蛋白质含量的检测 |
| 2.6.1 坐骨神经蛋白质的提取 |
| 2.6.2 Western Blot |
| 2.7 数据统计与分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 AKBA对大鼠坐骨神经损伤后SFI测试结果 |
| 3.2 AKBA对大鼠坐骨神经损伤后感觉功能测定结果 |
| 3.3 AKBA对大鼠坐骨神经损伤后髓鞘修复的观察结果 |
| 3.4 AKBA对大鼠坐骨神经损伤后神经纤维修复的观察结果 |
| 3.5 ABKA对大鼠坐骨神经损伤后髓鞘超微结构修复观察结果 |
| 3.6 AKBA对大鼠坐骨神经损伤后MBP表达检测结果 |
| 3.7 AKBA对大鼠坐骨神经损伤后 β3Tubulin 表达检测结果 |
| 3.8 AKBA对大鼠坐骨神经损伤后基因组学检测结果 |
| 3.8.1 大鼠坐骨神经显着差异基因筛选结果 |
| 3.8.2 大鼠坐骨神经差异m RNA表达基因GO分析结果 |
| 3.8.3 大鼠坐骨神经m RNA差异基因KEGG分析结果 |
| 3.9 AKBA对大鼠坐骨神经相关MRNA表达检测结果 |
| 3.10 AKBA对大鼠坐骨神经相关蛋白含量检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 AKBA对大鼠坐骨神经损伤修复的行为学影响 |
| 4.2 AKBA对大鼠坐骨神经损伤修复的组织学影响 |
| 4.3 AKBA对大鼠坐骨神经损伤修复的基因组学分析 |
| 4.3.1 AKBA对大鼠坐骨神经损伤修复的基因组学GO分析 |
| 4.3.2 AKBA对大鼠坐骨神经损伤修复的基因组学KEGG分析 |
| 4.4 AKBA对大鼠坐骨神经损伤后相关基因和蛋白的影响 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（9）IncRNA-Malat1及相关转录因子参与调控背根节卫星胶质细胞转分化的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 神经生长因子在神经系统转分化中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（10）神经损伤体外模型构建与机理研究及新型修复单元初探（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 研究的背景和意义 |
| 1.2 中枢神经系统损伤病理机理研究现状 |
| 1.2.1 神经营养因子作用机制研究 |
| 1.2.2 微环境作用机制研究 |
| 1.2.3 信号通路及网络作用机制研究 |
| 1.2.4 异位电活动机制研究 |
| 1.3 中枢神经修复应用现状 |
| 1.3.1 神经细胞移植 |
| 1.3.2 体外人工神经网络技术 |
| 1.3.3 组织工程技术 |
| 1.3.4 通过外场刺激恢复神经功能的神经假体 |
| 1.4 本论文的主要研究思路与内容 |
| 第2章 创伤性神经损伤体外模型构建及网络形态研究 |
| 2.1 实验设备及材料 |
| 2.1.1 实验设备 |
| 2.1.2 实验材料及试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 芯片设计 |
| 2.2.2 微流控芯片的制备 |
| 2.2.3 细胞接种及免疫荧光检测 |
| 2.2.4 数据统计学分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 芯片结果 |
| 2.3.2 神经元网络的生长情况 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 创伤性神经损伤体外模型构建及网络功能连接研究 |
| 3.1 实验设备及材料 |
| 3.1.1 主要实验设备 |
| 3.1.2 实验材料及试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 微电极阵列芯片及电生理检测系统搭建 |
| 3.2.2 微流控芯片 |
| 3.2.3 复合芯片制备 |
| 3.2.4 神经元细胞培养 |
| 3.2.5 免疫荧光检测 |
| 3.2.6 电生理检测 |
| 3.2.7 神经元网络放电信号处理及表征 |
| 3.2.8 网络建模方法 |
| 3.2.9 统计学分析方法 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 复合芯片清洗灭菌和表面处理效果 |
| 3.3.2 免疫荧光检测 |
| 3.3.3 神经网络功能特性 |
| 3.3.4 神经网络的放电特征分析 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 新型纳米结构植入式神经修复单元制备和表征 |
| 4.1 实验设备及材料 |
| 4.1.1 主要实验设备 |
| 4.1.2 实验材料及试剂 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 丝素溶液的制备 |
| 4.2.2 共混法制备多壁碳纳米管/丝素蛋白膜 |
| 4.2.3 表面沉积法制备多壁碳纳米管/丝素蛋白膜 |
| 4.2.4 激光辐照处理 |
| 4.2.5 测试表征 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 多壁碳纳米管/丝素蛋白膜 |
| 4.3.2 多壁碳纳米管/丝素蛋白共混液的导电率 |
| 4.3.3 两种方法制备的多壁碳纳米管/丝素蛋白膜的导电性能 |
| 4.3.4 共混法制备多壁碳纳米管/丝素蛋白表面形貌 |
| 4.3.5 表面沉积法制备多壁碳纳米管/丝素蛋白及激光辐照后表面形貌 |
| 4.3.6 激光辐照多壁碳纳米管/丝素蛋白膜(表面沉积法)结构分析 |
| 4.3.7 多壁碳纳米管/丝素蛋白膜机械性能分析 |
| 4.3.8 孔隙率 |
| 4.3.9 亲水性 |
| 4.3.10 植入神经假体电极界面电荷传递 |
| 4.3.11 循环伏安特性 |
| 4.3.12 电化学阻抗谱 |
| 4.3.13 最大安全电荷注入量 |
| 4.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间所发表的学术论文 |
| 致谢 |
四、胶质细胞源性神经营养因子在神经系统损伤后表达变化意义（论文参考文献）
- [1]电刺激联合Cs-Au/GelMA水凝胶对臂丛神经损伤后神经病理性疼痛的疗效及机制研究[D]. 尤荻. 吉林大学, 2021(01)
- [2]通腑逐瘀法指导下抵当汤加减调控AQP4表达治疗大鼠急性脊髓损伤的作用机制研究[D]. 吴子健. 湖北中医药大学, 2021(01)
- [3]联用神经因子对重型颅脑创伤大鼠神经细胞和神经功能的影响研究[D]. 朱业淘. 西南医科大学, 2021(01)
- [4]双相情感障碍患者血清氧化应激指标及胶质细胞源性神经营养因子水平的研究[D]. 詹琼琼. 扬州大学, 2021(08)
- [5]脂多糖诱导小鼠形成免疫耐受后对缺血性脑中风的影响[D]. 瞿源. 兰州大学, 2021(09)
- [6]仿生导电人工神经支架的研究[D]. 刘振辉. 新疆医科大学, 2021(08)
- [7]激活素A参与缺血性脑损伤小胶质细胞极化表型变化的研究[D]. 刘洪雨. 吉林大学, 2020(04)
- [8]基于基因组学探究AKBA对大鼠坐骨神经损伤的修复机制[D]. 汪瑶. 东北农业大学, 2020(07)
- [9]IncRNA-Malat1及相关转录因子参与调控背根节卫星胶质细胞转分化的作用及机制研究[D]. 刘矿嫔. 昆明医科大学, 2020
- [10]神经损伤体外模型构建与机理研究及新型修复单元初探[D]. 申雪飞. 北京工业大学, 2020(06)