一、人胎食管上皮NOS阳性表达的组织化学观察（论文文献综述）
赵娜[1]（2021）在《丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7促进炎症消退的作用与机制探索 ——基于小鼠创面愈合与结肠炎模型的实验研究》文中研究说明炎症是免疫反应的重要组成部分,是机体针对病原体、组织损伤等刺激产生的重要病理生理反应,其目的是清除感染源、恢复组织稳态。为了既能达到良好清除效果又能避免对宿主的过度损伤,炎症反应的进程受到严格的调控。在炎症反应的初始阶段,组织原位的巨噬细胞侦测到损伤信号后被激活,并迅速在损伤部位募集中性粒细胞;继而大量单核细胞浸润,并在致炎微环境作用下分化成巨噬细胞。一经激活,这些巨噬细胞呈现促炎的经典激活表型（M1型）,分泌大量促炎细胞因子。随着炎症的发展,中性粒细胞吞噬病原体或坏死组织后发生凋亡,而巨噬细胞清除摄入死亡中性粒细胞后表型向抗炎、促修复的选择激活型（M2型）转化,进而形成有利于炎症消退的微环境,实现炎症部位细胞组织的稳态重建。炎症的消退,涉及到免疫细胞与微环境的复杂相互作用,其关键环节的失调常导致炎症消退障碍,是多种慢性炎症性伤病的重要原因。因此,深入研究炎症消退的细胞、分子机制,并探索新的调节策略,对于诸如慢性难愈创面、炎症性肠病等炎症消退障碍疾病的防治具有重要意义。丝氨酸蛋白酶抑制因子SPINK7（Serine Peptidase Inhibitor,Kazal Type 7）,又名ECRG2（Esophagus Cancer-Related Gene 2,食管癌相关基因2）,定位于人5号染色体（小鼠为18号染色体）,编码区域有258个碱基,翻译成含85个氨基酸的9.23k D大小的蛋白产物,可以分泌到胞外,在食管上皮、口腔粘膜等组织呈组成性高表达。最初通过基因差异表达筛选发现在食管癌组织表达显着降低。早期的研究发现,SPINK7可以通过胞外丝氨酸蛋白酶抑制剂活性和胞内非丝氨酸蛋白酶抑制剂活性两种途径发挥作用,调控细胞的增殖、凋亡、迁移与侵袭等重要表型,发挥抑癌基因的功能。最新的研究表明,SPINK7作为抑制性检查点分子调控食管上皮炎症反应,参与嗜酸性食管炎（Eosinophilic Esophagitis,Eo E）的发生发展。研究显示,相对于正常食管上皮,SPINK7在Eo E病人的食管组织表达显着降低达15倍之多;在正常食管上皮细胞敲降/敲除SPINK7可抑制上皮分化进而削弱其屏障功能,更重要的是其可通过抑制u PA/u PAR促进嗜酸性粒细胞的活化,靶向下调KLK5（Kallikrein 5）蛋白酶活性,抑制PAR-2（Rroteinase-activated receptor 2,PAR2）活化调控诸多趋化因子/细胞因子的表达,发挥炎症反应抑制性检查点的功能。但目前关于SPINK7作为抑制性检查点分子调控炎症反应的研究仅限于食管上皮,其作用是否有普遍意义,即在其他系统中炎症反应调节的功能,有待进一步深入研究。本研究分别在小鼠皮肤创伤愈合模型和实验性结肠炎模型对SPINK7调控炎症消退的作用进行了系统研究并初步探讨了其作用机制。在小鼠急性创面愈合实验中,利用组织学染色技术、免疫组化染色技术、q RT-PCR、组织RNA芯片、多重荧光酶联免疫检测、明胶酶活性检测、尿激酶活性检测等技术分析了Spink7缺失对创面愈合速率、再上皮化水平、炎性细胞浸润、促炎/趋化因子分泌水平、蛋白酶活性水平、巨噬细胞极化比例的影响,明确Spink7对创面愈合炎症反应消退的影响和作用;以PAR2抑制剂进行在体干预,评价抑制该通路对Spink7缺失导致的炎症消退障碍、愈合延迟等表型的影响;利用Raw264.7细胞,通过慢病毒稳定转染、细胞条件上清刺激培养、纯化蛋白刺激培养等方法提高Spink7水平观察对于LPS诱导的炎症反应的影响,对Spink7的抗炎机制进行初步探讨;并在由于炎症反应不足导致愈合延迟的放创复合伤小鼠模型,评价了创面原位si RNA敲降Spink7促进创面愈合的可行性。本部分所取得的主要实验结果和结论如下:1.小鼠皮肤创伤修复过程中Spink7在增殖期创面表达显着上调,创面局部采用Spink7特异性si RNAs抑制其表达,导致以再上皮化延迟、炎症消退障碍为特征的延迟愈合表型。2.以Spink7敲除小鼠为对象,发现Spink7敲除与si RNAs的敲降表现出类似的炎症消退障碍表型。进一步研究发现,Spink7敲除导致增殖期创面（伤后7 d）存在:炎症相关通路过度激活,促炎细胞因子IL-6,IL-1β和TNF-a和趋化因子KC、MIP-2和MIP-1a的分泌增多;u PA、MMP2/9等蛋白酶存在过度活化;巨噬细胞M2极化显着不足。3.以PAR2抑制剂进行在体干预,发现Spink7敲除导致的难愈表型不依赖于PAR2通路的激活。4.体外细胞实验表明,采用慢病毒稳定感染、条件上清作用、纯化蛋白刺激等上调巨噬细胞培养体系中Spink7蛋白水平的方法,均能够抑制LPS刺激导致的促炎细胞因子等基因的表达上调,并初步发现Spink7可以负调控LPS诱导的NF-κB和p38MAPK信号通路的激活。5.在小鼠放创复合伤的创面延迟愈合模型中,Spink7的表达水平较单纯急性创面显着上调,局部采用Spink7特异性si RNAs抑制其表达,可以调高放创复合伤创面炎症反应,促进其愈合。在小鼠实验性结肠炎模型,利用2%DSS诱导造模,通过组织学染色技术、免疫组化染色技术、q RT-PCR、Bio-Plex多重蛋白检测技术、激光共聚焦显微观察、骨髓移植嵌合体小鼠构建、生物信息学分析技术检测Spink7缺失对小鼠实验性结肠炎的溃疡症状的影响,初步明确该分子对实验性结肠炎炎症表型的调控作用。本部分所取得的主要研究结果和结论如下:1.Spink7在DSS诱导的实验性结肠炎模型中呈诱导性高表达。Spink7敲除小鼠对结肠炎损伤敏感性显着增高,表现为体重下降明显、结肠炎临床症状更严重、结肠长度更短、组织病理学评分更严重等;相应的一系列促炎细胞因子和趋化因子的表达、分泌较野生对照小鼠也显着增高。2.通过构建骨髓移植嵌合体小鼠,证明骨髓造血细胞来源的Spink7对实验性结肠炎发挥了主要保护作用。进一步通过多重免疫荧光标记实验,表明Spink7主要在实验性结肠炎组织的中性粒细胞中表达。3.通过免疫组化染色和公开数据库分析等方法,评估SPINK7在人炎症性肠病组织中的表达模式。发现SPINK7在人结肠组织上皮呈组成性表达,在人炎症性肠病存在表达下调的趋势。综上所述,本研究采用小鼠皮肤创面愈合模型和实验性结肠炎模型进行研究,结果表明Spink7作为炎症反应的抑制性检查点分子,是促进炎症消退的关键因子。在皮肤创面愈合模型,研究发现Spink7缺失导致炎症消退障碍为特征的难愈表型,初步的机制探讨排除其依赖PAR2激活导致该表型,体外细胞实验显示Spink7可通过抑制NF-κB等通路拮抗LPS诱导的巨噬细胞M1极化表型,而在放创复合伤创面干预敲降Spink7则可通过调高炎症反应促进创面愈合。在实验性结肠炎模型,研究表明Spink7缺失导致肠炎损伤程度加重,而中性粒细胞来源的Spink7发挥了主要的抗炎保护作用。这些结果丰富了对于炎症消退调控的细胞分子机制的理论认识,为探索对于诸如慢性难愈创面、炎症性肠病等炎症消退障碍疾病的防治策略提供了新靶点。
姜礼双[2]（2019）在《基于VIP、NO等神经递质探讨NERD中医证及中药干预机制》文中研究指明胃食管反流病（Gastroesophaeal Reflux Disease,GERD）是指胃十二指肠内容物反流进入食管而引起的一系列相关症状,其典型症状有反流、烧心,非典型症状更为常见且易被忽视,主要包括非心源性胸痛、慢性咳嗽、咽喉部异物感和声音嘶哑等。流行病学调查显示,GERD在北美的发生率高达27.8%,在欧洲的发生率高达25.9%,在亚洲的发生率约在2%-7%,近年来,GERD的发病率进一步呈上升趋势尤其是在亚洲地区,已成为消化系统最为常见的慢性疾病之一。1997年Genval（比利时）国际会议上提出GERD的定义,其中以内镜下表现为食管粘膜溃疡、糜烂等炎症病变,被称为反流性食管炎（Reflux esophagitis,RE）,然而也有相当大的一部分GERD患者内镜下却无食管炎性改变,被称为非糜烂性胃食管反流病（Nonerosive reflux disease,NERD）或称内镜下阴性的胃食管反流病。临床研究显示,NERD的发病率明显高于GERD的其他两个亚型,约占GERD的70%左右,是GERD的主要发病类型。作为胃内容物反流引起的慢性消化性疾病,NERD目前主要的治疗方式仍是以质子泵抑制剂（Proton pump inhibitor,PPI）为首的抑酸治疗,然而PPI对于非酸性反流或顽固性反流治疗反应不佳,长期服用还可能具有引起一系列并发症的风险,且患者多不能耐受,从而导致患者症状反复发作,甚至发展为难治性NERD。NERD的发病率高、易于复发、对质子泵抑制剂效果差、难以治愈等特点不仅严重影响了患者的生活质量,而且也给患者和社会增加了很大的经济负担。NERD可归属于中医“噎膈”、“胸痛”、“吐酸”、“嘈杂”、“胃脘痛”、“食管瘅”等范畴,本病的病位在食管和胃,与肝胆脾肺关系密切,其基本病机概括为肝胆失于疏泄,胃失和降,胃气上逆,病性多本虚标实。通过我们的前期研究发现,NERD中虚气逆证占19.09%,而NERD复发患者中虚气逆证高达37.6%,说明中虚气逆型是NERD较易复发的类型之一。我们认为,中虚气逆型NERD的发病关键是脾虚,而胃气上逆、胃失和降是在脾虚的基础上发展而来,进而进展为中虚气逆,故NERD的治疗应把握脾虚为本、气逆为标的病机思路,从健脾益气、理气降逆入手,标本同治。目前NERD的西医发病机制尚未完全阐明,食管裂孔疝（hiatalhernia,HH）、食管下括约肌（Low esophageal sphincter,LES）功能异常、食管动力障碍、食管黏膜屏障功能受损、胃内酸袋（gastric acid pocket,GAP）、精神心理异常等因素被认为参与了 NERD的发生。近来研究发现,食管下端和胃肠道存在着一种特殊的间质细胞壁内的Cajal间质细胞（interstitial cells of Cajal,ICC）,免疫组织化学染色和电镜研究发现,血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）、一氧化氮（Nitric oxide,NO）、一氧化氮合酶（Nitric oxide synthase,NOS）等神经元与ICC有密切的联系,VIP、NO、NOS是胃肠神经系统中的重要神经递质,其参与神经信号的传递,进而调控平滑肌。进一步研究发现,ICC与平滑肌特别是环形肌肌细胞的接触较为紧密,神经递质传至ICC后,产生兴奋或抑制性电信号,再作用于平滑肌细胞,进而调控食管和胃肠平滑肌。这些新的发现证实了 VIP、NO、NOS等神经递质参与并决定食管的紧张度、蠕动与收缩,这些神经递质的失调是NERD发生的重要病理机制之一。VIP、NO、NOS调控食管括约肌、胃肠平滑肌及与ICC关系的发现,可能成为NERD中医中药治疗的重要潜在靶点。因此,研究NERD中医证与VIP、NO等神经递质表达的相关性及中药干预机制是本病中西医结合良好的切入点,然而,时至今日,NERD中医证与VIP、NO等神经递质表达的相关性及中药调控机制方面的系统研究国内外尚未见报道。故本实验先通过研究VIP、NO、NOS与NERD中医证候之间的关系,明确两者之间的相关性,为NERD的中医辩证提供客观化依据。而后通过研究六君子汤合旋覆代赭汤治疗NERD中虚气逆证的临床疗效及对VIP、NO、NOS表达水平的影响,探讨出中药干预NERD的调控机制,进而揭示传统中医中药治疗本病的新靶点,为中医中药进一步攻克NERD开辟新的思路。第一部分 非糜烂性胃食管反流病和反流性食管炎临床特征对比分析目的:对比分析NERD和RE的临床特征,明确两者的差异性,为临床预防、诊断及治疗GERD提供帮助。方法:选取2016年05月至2017年08月诊断为NERD的患者146例,选取同期诊断为RE的患者127例作为对照,自愿填写一般人口学特征调查表、RDQ评分表,并自愿行胃镜及幽门螺杆菌（H.pylori）感染检查。结果:（1）一般情况方面:NERD好发于女性且以体力劳动人群为主,RE好发于男性且以脑力劳动人群为主（P<0.05）,NERD患者主要集中居住在农村,而RE患者主要集中居住在城市（P<0.05）。（2）生活方式及诱发因素方面:NERD组BMI、偏胖人数、吸烟、饮酒比例低于RE组（P<0.05）,但患焦虑抑郁倾向比例高于RE组（P<0.05）。（3）病程及复发情况方面:NERD组较RE组病程长、更易复发、复发次数多、复发时间间隔长（P<0.05）。（4）临床症状特点:NERD组反酸、烧心、胸痛、嗳气、咽喉部异物感发生率及发生严重程度高于RE组（P<0.05）,咳嗽发生率及严重程度低于RE组（P<0.05）,其中NERD组胸闷发生率高于RE组（P<0.05）,但严重程度无统计学意义（P>0.05）。（5）合并IBS、FD相关情况:NERD组重叠IBS、FD的发生率均明显高于RE组（P<0.05）。结论:NERD和RE有着明显的差异性,支持两者是独立疾病的观点而非同种疾病的不同阶段,临床治疗应区别对待。第二部分 非糜烂性胃食管反流病中医证与VIP、NO、NOS表达水平相关性探讨目的:探讨NERD中医证型与VIP、NO、NOS等神经递质表达水平的相关性,为NERD中医证型客观化提供依据。方法:选取诊断为NERD的患者126例,对照组为同期选取的RE患者95例,进行中医辨证,而后检测其血浆VIP、NO、NOS含量,分析统计中医证候与三个指标的相关性。结果:NERD患者血浆VIP、NO、NOS水平明显高于RE组患者和健康对照组（P<0.05）,其临床上最常见的中医证型为肝胃郁热证,最少见的为脾虚湿热证:血浆VIP、NO、NOS神经递质指标在NERD各中医证型中比较均有明显的差异性（P<0.05）,其中VIP表达水平为胆热犯胃>痰气交阻>肝胃郁热>脾虚湿热>淤血阻络>中虚气逆,NO表达水平为胆热犯胃>肝胃郁热>痰气交阻>中虚气逆>淤血阻络>脾虚湿热,NOS表达水平为胆热犯胃>肝胃郁热>痰气交阻>淤血阻络>中虚气逆>脾虚湿热;血浆VIP、NO、NOS与NERD病程进展无明显相关性（P>0.05）。结论:VIP、NO、NOS神经递质参与了 NERD的发生及发展,其表达水平差异与NERD中医证型相关,可在一定程度上为NERD的中医辨证及临床诊疗评价提供客观依据。第三部分 六君子汤合旋覆代赭汤治疗NERD中虚气逆证的临床疗效及对血浆VIP、NO、NOS表达水平的影响目的:探讨六君子汤合旋覆代赭汤治疗NERD中虚气逆证的临床疗效及对血浆VIP、NO、NOS表达水平的影响。方法:将66例NERD中虚气逆证患者随机分为中药组35例和西药组31例,中药组采用六君子汤合旋覆代赭汤治疗,西药组采用雷贝拉唑联合莫沙必利治疗,两组均治疗4周,比较两组治疗前后反流性疾病问卷表（RDQ量表）症状评分和总分及中虚气逆证中医症状变化情况,同时监测两组治疗前后血浆VIP、NO、NOS水平变化情况,统计两组的有效率及后期复发率。结果:两组治疗后反流、烧心、非心源性胸痛、胸闷、咽喉部异物感、嗳气、腹痛评分及RDQ总分均较前降低（P<0.05）,且中药组反流、烧心、胸闷、暖气评分及RDQ总分显着低于西药组（P<0.05）;中药组治疗后泛吐清水、嗳气、食少纳呆、神疲乏力、胃痞胀满、大便溏薄例数明显减少（P<0.05）,西药组治疗后泛吐清水、嗳气例数明显减少（P<0.05）;两组治疗后血浆VIP、NO水平较前均降低,且中药血浆VIP、NO水平显着低于西药组（P<0.05）,中药组治疗后血浆NOS下降（P<0.05）,而西药组治疗后血浆NOS上升,但无差异性（P>0.05）:中药组的总有效率高于西药组,而复发率明显低于西药组（P<0.05）。结论:六君子汤合旋覆代赭汤能够有效改善NERD症状,降低复发率,同时能显着降低患者血浆VIP、NO、NOS表达水平,从而推测VIP、NO、NOS神经递质是中医中药治疗NERD的重要潜在靶点。
杨平[3]（2012）在《鸡肠道Cajal间质细胞与肠神经系统的特性研究》文中研究表明新近的观点认为正常的肠道蠕动依赖于肠壁中肠神经系统（Enteric Nervous System, ENS）、Cajal间质细胞（interstitial cells of cajal, ICC）和平滑肌细胞之间的相互作用。ICC是位于自主神经末梢和消化道平滑肌细胞之间的一类特殊的间质细胞,它在三个方面起作用：胃肠道平滑肌活动的起搏,推进电活动的传播和调节神经递质。以往关于ENS和ICC的研究主要集中在哺乳动物胃肠道。鸟类与哺乳动物的胃肠道在结构上存在一定差异性,同时,鸟类的肠神经系统不仅包括肠壁内的神经丛,还包括位于肠管外肠系膜缘的肠神经（又称Remak’s nerve）.这种差异是否导致ENS和ICC结构及其作用机制的不同?本研究以鸡作为试验动物,详细研究了鸡肠道内ICC的鉴定、分布以及与神经、平滑肌之间的联系,并对鸡NES中与ICC关系最为密切的NOS和AChE阳性神经元进行了胚后发育和分布比较研究。研究结果将从细胞和分子水平阐明鸡ENS和ICC的结构组成和相互联系,对揭示鸟类胃肠道功能有着重要意义,为鸟类胃肠动力学疾病治疗提供科学依据。试验I鸡肠道Cajal间质细胞的超微结构研究本试验应用透射电镜系统观察了鸡肠道Cajal间质细胞（interstitial cells of cajal, ICC）的超微结构特点,结果显示在鸡肠道的不同部位均有ICC的存在,分布密度不等。根据分布位置的不同可将ICC分为肌间ICC、肌内ICC、粘膜下层ICC、深肌层ICC和固有层ICC。电镜下,这些ICC具有共同的超微特征：存在大量的线粒体、丰富的中间丝；细胞核呈梭形或椭圆形,内含大量异染色质。ICC胞体呈梭形或星形,有数量不等的胞质突起,这些突起与周围平滑肌细胞和肠道神经形成密切联系。部分ICC也显示了平滑肌细胞的一些结构特点,如不连续的基底膜、胞膜小凹和致密体。ICC之间,以及ICC与邻近的平滑肌细胞之间存在着明显的缝隙连接样结构。与哺乳动物不同,鸡回肠固有层也分布有ICC。在鸡肠道组织中,成纤维细胞的分布也较为丰富,它们与ICC的主要区别在于其具有发达的分泌性细胞器,包括囊泡和不连续的基底膜,但缺乏中间丝和胞膜小凹。鸡肠道ICC的分布、超微结构特点及其与其它细胞的联系表明,ICC在鸡消化道动力学机制中发挥着重要的调控作用。ICC在粘膜固有层的分布,提示鸡肠道ICC可能比哺乳类具有更多的亚型。试验Ⅱ鸡肠道的C-kit阳性细胞表达与分布由于缺乏合适的标记物,Cajal间质细胞（interstitial cells of cajal, ICC）在禽类肠道的分布未见资料报道,本试验在第三章对鸡肠道ICC超微结构鉴定的基础上,应用合成的三相探针通过原位杂交方法,检测ICC的标记物c-kit mRNA在鸡肠道不同区域的分布规律；同时,应用实时荧光定量PCR（RT-PCR）分别对不同肠段粘膜组织和去粘膜肠壁组织的c-kit mRNA表达进行测定。原位杂交结果显示出两种类型的c-kit mRNA阳性细胞。第一种为纺锤形或星极细胞组成,主要位于内环形肌和外纵形肌之间的肌间层,粘膜下层、环形肌和纵形肌内也有发现。这种类型的细胞被界定为ICC。进一步根据此类细胞分布位置不同可分为肌间ICC、肌内ICC和粘膜下ICC三种,而且不同肠段内阳性细胞数目也不相同。第二种为圆形或颗粒型细胞组成,主要位于粘膜固有层内,粘膜下层也有少量发现,这类细胞被界定为肥大细胞,主要分布于回肠和空肠。RT-PCR结果显示在不同肠段均有c-kit mRNA的表达：在去粘膜肠壁组织中,回肠和结肠表达最高,空肠和十二指肠次之,盲肠最低；而在粘膜组织中,空肠表达最高,十二指肠和回肠其次,结肠和盲肠最低。实验结果揭示了鸡肠道ICC的分布模式,显示了鸡肠道不同部位中c-kitmRNA表达差异,这种差异可能与不同肠段的功能及其调节方式有关。试验Ⅲ不同日龄鸡肠道c-kit与其配体SCF mRNA的表达研究本试验以β-actin为内参,采用SYBR染料法的实时荧光定量PCR （RT-PCR）技术。选取第1、10、20和40日龄三黄鸡去除粘膜后的十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠肠壁中c-kit及其配体SCF mRNA的表达进行相对定量,初步阐明正常鸡肠道中c-kit及其配体SCF的mRNA表达量随着日龄变化的规律。结果显示所有肠段中c-kit mRNA的表达量从1日龄至40日龄逐渐降低,至20日龄时c-kit mRNA表达极显着低于1日龄。SCFmRNA的表达量从1日龄至10日龄逐渐升高,10日龄时mRNA表达最高,之后慢慢下降,至20日龄时的SCF mRNA表达显着低于10日龄。各肠段在不同日龄的c-kit和SCF mRNA表达量的变化表现如下：1日龄时,结肠中c-kit mRNA表达量最高,回肠最低；十二指肠中SCF mRNA表达量最高,盲肠最低。10日龄时,结肠中c-kit mRNA表达量最高,空肠最低；结肠中SCF mRNA表达量最高,盲肠最低。20至40日龄时,变化趋于稳定,都是回肠中c-kit和SCF mRNA表达量最高,盲肠最低。结果表明鸡肠道的胚后发育和功能形成是一个逐渐成熟的过程,而且c-kit及其配体SCF之间存在着密切的联系。试验Ⅳ鸡肠道Vimentin与NSE免疫荧光双标研究本试验采用ICC的标记物之一波形蛋白（vimentin）和神经元的特异标记物神经元特异性烯醇化酶（Neuron-specific Enolase, NSE）,对肠道切片进行免疫细胞化学双标,观察鸡不同肠段内vimentin、NSE阳性细胞的分布特征,探究ICC与神经之间的联系。结果发现：vimentin阳性细胞及其突起主要分布在肌层、粘膜下层和固有膜内,特别是在内环形肌和外纵形肌之间的肌间层大量出现。阳性细胞在大肠与小肠的肌内分布稍有区别,前者主要见于肌间隔内,而后者主要见于肌束内。大部分NSE阳性细胞分布于肌间层和粘膜下层,肌层内有零散分布；固有膜NSE阳性细胞量较少,但小肠固有膜vimentin阳性细胞明显多于大肠。粘膜上皮附近也能观察到。通过双标观察,肠道肌间和粘膜下层vimentin阳性细胞紧密围绕在NSE阳性细胞周围。固有膜内vimentin阳性细胞也多位于NSE阳性细胞周围。表明鸡vimentin细胞与NSE阳性细胞在肠道各段呈交错分布,两者关系紧密,提示它们在肠道活动中存在一定调节关系。试验V鸡肠道肌间层NOS阳性神经元胚后发育的结构研究肠神经系统（Enteric Nervous System, ENS）的正常发育对了解肠道功能是非常重要的。鸡胚是研究肌间神经丛发育和ENS功能的理想模型,但关于鸡胚后肌间神经丛的发育未见报道。本研究的目的是定性和定量分析胚后发育期间鸡肌间神经丛NOS阳性神经元（即氮能神经元）的形态和分布。分别对7日龄、15日龄和成年鸡不同肠段（十二指肠、空肠、回肠、盲肠和结肠）进行肌间铺片制作,还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶（NADPH-d）组织化学反应后,利用IPP6.0软件对阳性神经元和神经节进行定量分析。结果显示NOS阳性神经元和神经纤维形成典型的三级网状结构,NOS阳性神经元形态各异,聚集在一起构成大小不等的神经节。NOS阳性神经元反应强度存在一定差异,数个阳性神经元经常可形成串珠形和U形结构。NOS阳性神经元和神经节的密度随着年龄的增长而降低,但神经节中的阳性神经元的数量却有所增加。在所有年龄组中,NOS阳性神经元数量在结肠最高,随后是回肠,空肠,十二指肠和盲肠。结果表明,鸡肠道肌间神经丛存在胚后发育现象,提示鸡ENS功能形成是一个逐渐成熟和完善的过程；另外在每个肠段之间的发育并无明显差异,提示不同肠段的功能执行在出生后就已确定。试验Ⅵ鸡回肠粘膜下层胆碱能神经元的胚后发育研究乙酰胆碱能神经元释放的乙酰胆碱（ACh）是胃肠道最主要的兴奋性神经递质,能刺激平滑肌收缩,增强胃肠道分泌,促进肠道激素的释放。本研究分别制作0、5、10、20、40日龄三黄鸡回肠粘膜下层铺片样品,通过乙酰胆碱酯酶（AChE）组织化学反应,探究0日龄到40日龄鸡肠道粘膜下神经丛胆碱能神经元的构筑及其变化。结果显示AChE阳性神经元和神经纤维形成立体的三级网状结构,AChE阳性神经元形态各异,聚集在一起构成大小不等的神经节。随着年龄的增长神经节密度明显降低,直到40日龄组。相反,神经节中神经元大小逐渐增加,40日龄组中几乎是0日龄组的3倍。在胚后发育初期,每个神经节中的神经元数量从10日龄起,基本呈现稳定上升的趋势。鸡回肠粘膜下神经丛胚后发育变化的研究结果,将为鸡的肠神经系统失调引起的胃肠道疾病诊断提供重要的病理组织学参考。试验Ⅶ鸡回肠段胆碱能和氮能神经元的组织化学定位分别制作鸡回肠冰冻切片、肌间和粘膜下层铺片,应用乙酰胆碱酯酶（AChE）和还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶（NADPH-d）组织化学反应,分别对胆碱能和氮能神经元进行定位分析。冰冻切片结果显示AChE和NADPH-d阳性反应广泛分布于神经元胞体和神经纤维中。阳性神经元呈不规则或多边形,主要在肌间和粘膜下层零星或成簇出现,肌内也有一定的分布。肌间阳性神经纤维可明显插入环形肌内,阳性神经纤维经常围绕在血管周围,也有一些阳性神经纤维从肌层发出,穿过粘膜下层进入粘膜固有层,并且渗透到肠绒毛上皮下；肌内和粘膜中的AChE神经纤维的数量远超过NADPH-d阳性神经元和神经纤维。铺片结果显示AChE和NADPH-d阳性神经元位于神经节中,神经节之间通过阳性纤维相连形成致密的网络样结构,粘膜下网络明显比肌间密集,粘膜下神经节密度远大于肌间,但粘膜下每个神经节中的神经元数目要远小于肌间,粘膜下层神经元的大小也较肌间的小。AChE阳性神经元数目要远多于NADPH-d阳性神经元数目。结果表明鸡回肠广泛分布有兴奋性的胆碱能和抑制性的氮能神经元,可能在胃肠道功能调节中发挥重要作用。
刘学红,张泳[4]（2010）在《PCNA和C-fos蛋白在人胎食管组织中的表达及意义》文中研究表明目的:探讨增殖细胞核抗原（PCNA）和C-fos蛋白在人胚胎食管组织中的表达规律.方法:应用免疫组织化学PV法、SP法和图像分析（NIS-DR）软件检测第2、3、4月,人胚胎食管组织中PCNA和C-fos蛋白阳性表达的积分光密度（IA）,数据的组间比较采用单因素方差分析.结果:第2月胚龄组食管组织中,PCNA蛋白阳性细胞的IA值为50.6540±5.92400（n=5）,3mo胎龄组IA值为57.8465±9.99749（n=6）,4mo胎龄组IA值为69.3626±16.28008（n=5）,可见IA值依次增高,两两比较,差异有统计学意义（P<0.01）.第2、3、4个月胎龄段,C-fos蛋白在人胚胎食管各层组织细胞均呈阳性表达.2mo胎龄组食管组织中,C-fos蛋白阳性染色细胞的IA值为77.7867±12.22991（n=5）,3mo胎龄组IA值为83.2524±8.63989（n=6）,4mo胎龄组IA值为66.5414±9.06673（n=5）,可见IA值先升高再降低,两两比较,差异有统计学意义（P<0.01）.结论:PCNA和C-fos蛋白在人胚胎早期食管组织细胞的生长发育过程中起重要的调节作用.
张静[5]（2008）在《胆碱能抗炎通路对大鼠急性食管炎的保护作用》文中认为目的:研究神经通路干预和药物干预在大鼠急性食管炎中,对于食管损伤程度、促炎和抑炎细胞因子水平的影响,观察血浆和食管组织一氧化氮（NO）浓度、一氧化氮合成酶（NOS）及胆碱乙酰转移酶（ChAT）活力的变化,以及延髓神经核团NOS、c-Fos表达的变化,探讨胆碱能抗炎通路（CAP）在食管炎调控中的作用和机制。方法:实验I:通过对大鼠食管下段持续滴注0.1mol/L盐酸-胃蛋白酶溶液制备急性食管炎模型。成年雄性SD大鼠40只,随机分为5组:生理盐水滴注组,盐酸-胃蛋白酶滴注组,假手术组,迷走神经切断组及迷走神经电刺激组。应用ELISA方法测定血浆和食管组织中肿瘤坏死因子-a （TNF-a）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）的浓度,化学法测定ChAT、NOS的活性,并对食管的损伤程度进行肉眼及光镜下评分。实验II:成年雄性SD大鼠40只,随机分为5组:生理盐水组,盐酸-胃蛋白酶滴注组,L-精氨酸预处理+滴酸组,硝普钠预处理+滴酸组及L-NAME预处理+滴酸组。测定血浆和食管组织中TNF-a、IL-6、IL-10和亚硝酸盐的浓度,对食管的损伤程度进行肉眼及光镜下评分,采用NADPH-d组织化学染色法和c-Fos免疫组织化学法,检测大鼠延髓中NADPH-d及c-Fos阳性细胞的分布区域,并分别计数两种细胞的数量。结果:（1）食管下段持续滴注盐酸-胃蛋白酶溶液2h后,大鼠食管呈急性炎症改变;食管组织中TNF-a、IL-6、IL-10浓度和ChAT、NOS活力比生理盐水滴注组显着升高。（2）与假手术组相比,通过电刺激迷走神经,可抑制促炎细胞因子TNF- a、IL-6的升高,但对抑炎细胞因子IL-10的水平并无影响;并且使食管的炎症程度有所减轻。在双侧颈部迷走神经切除后,大鼠食管的炎症损伤程度加重,TNF-a、IL-6的水平亦明显升高,食管组织中NOS的活性下降。（3）盐酸-胃蛋白酶组较生理盐水组c-Fos蛋白在延髓孤束核及迷走神经背核（NTS&DMV）、最后区（AP）、延髓网状核（RFM）和疑核（NA）的表达明显增加;NADPH-d阳性细胞在NTS&DMV、RFM、NA增多。（4）L-精氨酸腹腔注射后的食管滴酸使NTS&DMV、AP、RFM的c-Fos表达进一步增加,在硝普钠注射后的滴酸组,c-Fos在NTS&DMV、AP的表达也比腹腔注射生理盐水后的滴酸组明显增加。L-NAME预处理后的滴酸组中,NADPH-d、c-Fos阳性细胞在上述神经核团均显着减少。（5）在L-精氨酸和硝普钠预处理组,食管滴酸后组织TNF-a、IL-6的浓度比对照组明显下降,抑炎因子IL-10的水平在上述两组中无显着性变化。L-NAME预处理对滴酸后组织TNF-a、IL-6的浓度无影响,但使IL-10水平明显上升。结论:胆碱能抗炎通路通过传出迷走神经对大鼠实验性食管炎具有一定的保护作用。NO可能通过使NTS&DMV、AP、RFM、NA神经元的活化,调控CAP的抗炎作用。
顾倩,郑兰荣,邵金贵[6]（2006）在《人胎胃粘膜NOS阳性细胞的免疫组化观察》文中研究指明目的:探讨人胎胃粘膜NOS阳性细胞发育规律。方法:用免疫组织化学法对人胎胃粘膜NOS阳性细胞的表达进行观察。结果:第36个月龄时,胃粘膜固有层内皆可见胞体较小的NOS阳性细胞分布,随着胎龄的增加,NOS阳性细胞数目逐渐增多,染色逐步加深。第7个月龄时,NOS阳性细胞增殖达到高峰,胞体增大,构成胃腺的一部分。第810个月龄时,胃腺中NOS阳性细胞数目显着减少,但细胞胞体大,胞质多,深染。结论:胃粘膜内NOS阳性细胞的发育与胃粘膜上皮细胞及胃腺的发育密切相关。
杨敏[7]（2006）在《食管内脏高敏感性参与非糜烂性反流病发生的外周及中枢敏感化机制的研究》文中研究说明背景和目的非糜烂性反流病（NERD）是一种常见的疾病,占胃食管反流病（GERD）的65 %-70 %。由于其病因和发病机制不清,临床上缺乏有效的药物治疗手段,经验性药物治疗一般只能暂时缓解临床症状,严重影响了其生活质量和工作效率。近年来,随着内脏感觉神经-电生理学、功能性脑显像技术等方面发展,人们逐步认识到内脏高敏感性可能是食管功能性疾病发生的最重要的病理生理机制之一,是此类患者产生症状的基础和症状多样化的原因。因此,目前越来越多的学者把重心转向食管内脏感觉、内脏高敏感性及其发生机制的研究。然而,迄今为止,尚不十分清楚食管内脏敏感性的改变在不同亚类的NERD发病机制中的作用,亦未阐明食管内脏高敏感性形成的确切的外周和中枢神经敏感化机制。目前,国内、外有关食管内脏敏感性在不同亚类NERD患者发病机制中作用方面研究才刚刚起步,对食管内脏敏感性形成的外周敏感化机制和脑机制更是知之甚少。所以我们的目的就是阐明食管内脏敏感性改变在不同亚类的NERD患者发病机制中的作用及酸灌注对食管机械刺激敏感性的影响;研究食道下端括约肌（LES）局部神经纤维超微结构特点及LES局部CGRP、SP表达及其与食管感觉阈值的相关性,旨在探讨食管内脏高敏感性形成的外周敏化机制;研究食管内脏高敏感状态下进行食管酸灌注和球囊扩张刺激时,脑诱发电位（CEP）在时间、空间和不同波形成份的位相特征,脑功能活动区域定位和MR-BOLD信号激活及消退的及模式的特征,初步确定食管内脏高敏感性形成的中枢敏化通路所涉及的兴奋区域和兴奋的时间过程,及其整合过程及特异性调节规律,进而阐明食管内脏高敏感性形成的中枢敏感化机制,为寻找有效调控人类内脏高敏感状态的合理用药及特效药物开发提供实验依据;通过腹腔注射鸡卵清蛋白基础致敏联合食管酸灌注的方法建立内脏高敏感性-食管内脏刺激大鼠模型,并利用此模型,研究大脑和脊髓对食管内脏高敏感性的调控作用,旨在初步探索食管内脏高敏感性在大脑和脊髓水平敏感化的分子机制,为内脏高敏感状态下CNS不同核团神经元功能发生不同程度的障碍,整合、处理食管感觉传入信息功能异常提供形态学依据。
邵金贵[8]（2004）在《人胎胃粘膜内NOS阳性细胞的组织化学观察》文中认为目的 探讨人胎胃粘膜内NOS阳性细胞表达的规律。方法 用NADPH d组织化学法对人胎胃粘膜内NOS阳性细胞的表达进行观察。结果 第 4个月龄时 ,胃粘膜内可见到少量的上皮样NOS阳性细胞 ,细胞体较小 ,呈圆形或椭圆形 ,胞质呈NOS阳性反应。随着胎龄的增加 ,NOS阳性细胞体增大 ,数目增多 ,NOS染色反应逐渐增强 ,至第 8个月龄时达到阳性表达的高峰。第 9～ 10月龄时 ,NOS阳性细胞数目进一步增多 ,几乎占据固有层全层。结论 胚胎发育时期 ,胃粘膜的发育需要NO的调节和修饰 ;NOS阳性细胞与胃腺的发育可能有较密切的关系。
邵金贵[9]（2001）在《人胎食管上皮NOS阳性表达的组织化学观察》文中指出目的 探讨人胎食管上皮NOS阳性表达的规律。方法 用NADPH d组织化学法对人胎食管上皮NOS阳性表达进行观察。结果 第 4个月龄时 ,食管上皮组织中可见到发育早期NOS阳性神经细胞群 ,该月龄后期食管上皮细胞内出现NOS弱阳性反应。随着胎龄的增加 ,NOS染色反应逐渐增强 ,至第 9个月龄时达到阳性表达的高峰。第 7个月龄时 ,食管上皮中层出现深染的NOS阳性细胞团 ,之后 ,逐渐向上皮表层移位 ,到第 10个月龄时基本消失。结论 胚胎发育时期食管上皮细胞合成NOS需要NOS阳性神经细胞的诱导和调节 ;食管上皮的发育与NOS阳性表达密切相关。
杨路亭[10]（2006）在《慢性胃食管反流病动物模型制备与HO-1在食管和肺组织中的表达及作用机制研究》文中研究表明目的:首先探讨保留全胃的3种不同类型胃食管反流大鼠模型的制备方法,旨在为研究胃酸、十二指肠液（主要为胆汁）及混合反流的作用机制及治疗提供较理想的慢性反流动物模型。在成功制备动物模型基础上进一步观察大鼠肺部的组织学改变并研究血红素加氧酶-1（HO-1）、NOS2在食管及肺部组织中的表达,再通过分组予以HO-1抑制剂和诱导剂干预,以探讨HO-1在GERD发生发展机制中的作用。方法:首先选择123只成年、SD雄性大鼠进行实验。造模时体重230±30g,动物被随机分成4组:假手术组（SO）、胃液反流为主（GER）模型组、十二指肠液反流为主（DER）模型组和十二指肠胃食管反流（DGER）模型组。SO组20只在常规开腹后游离食管下段和十二指肠,15分钟后关腹。GER模型组先采用幽门部分缝扎+贲门肌切开术制备模型9只（GER1）,因术后1周内死亡8只而放弃。后改行食管胃底吻合术制备模型20只（GER2）。DER模型组首先采用食管胃空肠侧侧吻合术制备模型3只（DER1）,亦因术后动物短期死亡而改为食管十二指肠（胆管开口远侧）吻合术制备模型21只（DER2）。DGER模型组采用食管胃十二指肠吻合术（EGDA）制备胃十二指肠液混合反流47只。术后存活动物给与颗粒饲料喂养,每周测量体重,观察营养状态。于术后喂养1个月、2个月、3个月、4个月各组分批（每次3～5只/组）经股静脉放血处死并观察食管局部大体形态变化,随之取动物食管和肺组织标本,部分以10%中性甲醛固定,制备组织切片,HE染色光镜下观察病理组织学改变,免疫组化检测HO-1、NOS2阳性细胞表达;低温冻存标本以RT-PCR方法检测HO-1mRNA,Western blotting检测HO-1蛋白表达。除麻醉意外死亡3只外,对术后非预期死亡37只大鼠随即进行尸体解剖,以分析其死因。剩余DGER组14只模型动物于术后16周时又随机分为HO-1诱导剂组、HO-1抑制剂组及生理盐水对照组,隔日分别给予腹腔注射Hemin、ZnPP及生理盐水,另选SO组动物作为空白对照。于干预处理第10次后次日处死动物取材,所取组织标本处理同上。统计学分析各组动物体重变化（术后4周内）、死
二、人胎食管上皮NOS阳性表达的组织化学观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人胎食管上皮NOS阳性表达的组织化学观察（论文提纲范文）
（1）丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7促进炎症消退的作用与机制探索 ——基于小鼠创面愈合与结肠炎模型的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 研究目的 |
| 1.3 研究内容 |
| 1.4 研究方法 |
| 第二章 Spink7 促进小鼠创面炎症消退的作用及机制研究 |
| 第一节 Spink7 在小鼠皮肤创伤愈合过程中的表达模式及si RNAs敲降Spink7 对创面愈合的影响 |
| 2.1.1 材料与试剂配制 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.1.3 实验结果 |
| 2.1.4 小结 |
| 第二节 Spink7 基因敲除对小鼠创面炎症消退的影响 |
| 2.2.1 材料与试剂配制 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.2.3 实验结果 |
| 2.2.4 小结 |
| 第三节 Spink7 调控创面炎症消退机制的初步探讨 |
| 2.3.1 材料与试剂配制 |
| 2.3.2 实验方法 |
| 2.3.3 实验结果 |
| 2.3.4 小结 |
| 第四节 siRNA敲降Spink7 促进小鼠放创复合伤创面愈合的初步研究 |
| 2.4.1 材料与试剂配制 |
| 2.4.2 实验方法 |
| 2.4.3 实验结果 |
| 2.4.4 小结 |
| 第五节 讨论 |
| 第三章 Spink7 对小鼠实验性结肠炎的保护作用研究 |
| 第一节 Spink7 缺失对DSS诱导的实验性结肠炎的影响 |
| 3.1.1 材料与试剂配制 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.1.3 实验结果 |
| 3.1.4 小结 |
| 第二节 中性粒细胞来源的Spink7 在实验性结肠炎中发挥主要保护作用 |
| 3.2.1 材料与试剂配制 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.2.3 实验结果 |
| 3.2.4 小结 |
| 第三节 Spink7 在人炎症性肠病样本中的表达情况检测 |
| 3.3.1 材料与试剂配制 |
| 3.3.2 实验方法 |
| 3.3.3 实验结果 |
| 3.3.4 小结 |
| 第四节 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述KAZAL型丝氨酸蛋白酶抑制因子SPINK7 在食管疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（2）基于VIP、NO等神经递质探讨NERD中医证及中药干预机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 非糜烂性胃食管反流病和反流性食管炎临床特征对比分析 |
| 对象和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 非糜烂性胃食管反流病中医证候与VIP、NO、NOS表达水平相关性探讨 |
| 对象与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 六君子汤合旋覆代赭汤治疗NERD中虚气逆证的临床疗效及对血浆VIP、NO、NOS表达水平的影响 |
| 对象与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
（3）鸡肠道Cajal间质细胞与肠神经系统的特性研究（论文提纲范文）
| 目录 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 胃肠道Cajal间质细胞的研究进展 |
| 第一节 ICC的形态和鉴定 |
| 1 光镜水平的鉴定标准 |
| 2 电镜水平的鉴定标准 |
| 第二节 ICC的分布和发育 |
| 1 ICC在消化道中的分布 |
| 2 SCF/c-kit信号途径与ICC的发育 |
| 第三节 ICC的功能 |
| 1 参与胃肠道平滑肌活动的起搏 |
| 2 参与电活动的传播 |
| 3 介导神经信号传递 |
| 第四节 非哺乳动物胃肠道ICC的研究现状 |
| 1 鸟类动物胃肠道ICC的研究 |
| 2 爬行类动物胃肠道ICC的研究 |
| 3 两栖类动物胃肠道ICC的研究 |
| 第五节 与Cajal间质细胞有关的疾病 |
| 1 Hirschsprung病 |
| 2 糖尿病性胃轻瘫 |
| 3 贲门失弛缓症 |
| 4 溃疡性结肠炎 |
| 5 胃肠道肿瘤 |
| 6 慢传输型便秘 |
| 参考文献 |
| 第二章 肠神经系统的研究进展 |
| 第一节 肠神经系统的形态学结构 |
| 第二节 肠神经系统的作用机制 |
| 第三节 肠神经系统的来源与发育 |
| 第四节 肠神经系统的重要神经递质 |
| 1 肠神经系统主要兴奋性神经递质 |
| 2 肠神经系统主要抑制性神经递质 |
| 第五节 ENS与ICC之间的联系 |
| 第六节 鸟类ENS的研究现状 |
| 参考文献 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第三章 鸡肠道Cajal间质细胞的超微结构研究 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 透射电镜制样与观察 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 鸡肠道c-kit mRNA阳性细胞分布及其表达 |
| 摘要 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物与样品处理 |
| 1.2 原位杂交试验 |
| 1.3 RT-PCR试验 |
| 2 结果 |
| 2.1 原位杂交结果 |
| 2.2 RT-PCR结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五章 不同日龄鸡肠道c-kit及其配体SCF mRNA的表达 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 RNA抽提结果 |
| 2.2 RT-PCR动力扩增曲线、产物熔解曲线 |
| 2.3 鸡各肠段去粘膜后肠壁组织中c-kit和SCF mRNA检测 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第六章 鸡肠道Vimentin与NSE免疫荧光双标研究 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料及标本制备 |
| 1.2 vimentin与NSE免疫细胞化学双重荧光染色 |
| 2 结果 |
| 2.1 肌间层和粘膜下层区域 |
| 2.2 环肌层和纵肌层内 |
| 2.3 粘膜内 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第七章 鸡肠道肌间层NOS阳性神经元胚后发育的结构研究 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第八章 鸡回肠粘膜下层AChE阳性神经元的胚后发育研究 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 鸡肠粘膜下神经丛AChE阳性神经节密度的日龄变化 |
| 2.2 鸡肠粘膜下层AChE阳性神经节中AChE阳性神经元数目的日龄变化 |
| 2.3 鸡肠粘膜下层AChE阳性神经元面积的日龄变化 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第九章 鸡回肠段胆碱能和氮能神经元的组织化学定位 |
| 摘要 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验动物和组织标本制备 |
| 1.2 乙酰胆碱酯酶组织化学染色 |
| 1.3 NADPH-d组织化学染色 |
| 1.4 阳性神经元数量和密度测定 |
| 2 结果 |
| 2.1 冰冻切片观察 |
| 2.2 铺片观察 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 创新点 |
| 附录 |
| 论文发表情况 |
| 致谢 |
（5）胆碱能抗炎通路对大鼠急性食管炎的保护作用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 一、实验动物 |
| 二、仪器设备与试剂 |
| 三、方法 |
| 四、统计学处理 |
| 结果 |
| 实验I：神经通路干预对食管炎症的影响 |
| 一、食管组织损伤情况 |
| 二、食管组织及血浆的细胞因子浓度 |
| 三、食管组织及血浆ChAT活力 |
| 四、食管组织及血浆NOS活力 |
| 五、各组动物的血压、心率、呼吸频率 |
| 实验II：观察药物对食管炎症的影响 |
| 一、食管组织损伤情况 |
| 二、细胞因子浓度 |
| 三、亚硝酸盐 |
| 四、各实验组延髓神经核团NADPH-d阳性细胞计数 |
| 五、各实验组延髓神经核团c－fos的表达 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）人胎胃粘膜NOS阳性细胞的免疫组化观察（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 胚胎收集与分组 |
| 1.2 取材和免疫组织化学染色程序 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
（7）食管内脏高敏感性参与非糜烂性反流病发生的外周及中枢敏感化机制的研究（论文提纲范文）
| 英文缩写和中英名词对照 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 论文正文 |
| 食管内脏高敏感性参与非糜烂性反流病发生的外周及中枢敏感化机制的研究 |
| 前言 |
| 第一部分 不同亚类的非糜烂性反流病、糜烂性食管炎患者在食管酸灌注前、后食管内脏敏感性的变化 |
| 前言 |
| 对象与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 不同亚类的非糜烂性反流病、糜烂性食管炎患者LES 局部神经纤维超微结构特点、SP 和CGRP 的表达及其与食管感觉阈值的相关性 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 功能性烧心患者食管酸灌注及食管扩张脑诱发电位的研究 |
| 前言 |
| 临床资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第四部分 应用功能性磁共振成像技术研究在食管酸灌注时不同亚类的非糜烂性反流病、糜烂性食管炎患者的脑激活模式的差异 |
| 前言 |
| 临床资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 食管内脏高敏感性发生机制的动物实验研究 |
| 第一部分 内脏高敏感状态下食管酸灌注诱导的鼠脊髓背角和大脑c-fos 基因的表达研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 内脏高敏感性模型鼠在食管酸灌注时脊髓和大脑ncNOS 的表达 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 内脏高敏感性参与功能性胃肠病发生的病理生理机制研究新进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 脑功能成像和脑诱发电位技术在功能性胃肠病机制研究中的应用 |
| 参考文献 |
| 附录1 个人简历 |
| 附录2 攻读博士学位期间发表的论文 |
（9）人胎食管上皮NOS阳性表达的组织化学观察（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 胚胎收集与分组 |
| 1.2 取材和组织化学染色程序 |
| 1.3 NADPH-d染色反应对照实验 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
（10）慢性胃食管反流病动物模型制备与HO-1在食管和肺组织中的表达及作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 研究论文慢性胃食管反流病动物模型制备与HO-1 在食管和肺组织中的表达及作用机制研究 |
| 引言 |
| 第一部分 慢性胃食管反流病大鼠模型制备研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 HO-1 在 GERD 模型食管的表达及作用机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 不同类型 GERD 慢性动物模型肺部组织学变化及 HO-1 的表达 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 综述一 胃食管反流病慢性动物模型的制备方法及评价 |
| 综述二 食管炎及食管癌病变中热休克蛋白的表达及意义 |
| 综述三 HO-1、氧化应激与胃食管反流病 |
| 综述四 胃食管反流病与呼吸系统症状关系研究进展 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、人胎食管上皮NOS阳性表达的组织化学观察（论文参考文献）
- [1]丝氨酸蛋白酶抑制因子Spink7促进炎症消退的作用与机制探索 ——基于小鼠创面愈合与结肠炎模型的实验研究[D]. 赵娜. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [2]基于VIP、NO等神经递质探讨NERD中医证及中药干预机制[D]. 姜礼双. 扬州大学, 2019(02)
- [3]鸡肠道Cajal间质细胞与肠神经系统的特性研究[D]. 杨平. 南京农业大学, 2012(12)
- [4]PCNA和C-fos蛋白在人胎食管组织中的表达及意义[J]. 刘学红,张泳. 世界华人消化杂志, 2010(34)
- [5]胆碱能抗炎通路对大鼠急性食管炎的保护作用[D]. 张静. 北京大学, 2008(11)
- [6]人胎胃粘膜NOS阳性细胞的免疫组化观察[J]. 顾倩,郑兰荣,邵金贵. 皖南医学院学报, 2006(04)
- [7]食管内脏高敏感性参与非糜烂性反流病发生的外周及中枢敏感化机制的研究[D]. 杨敏. 第三军医大学, 2006(11)
- [8]人胎胃粘膜内NOS阳性细胞的组织化学观察[J]. 邵金贵. 皖南医学院学报, 2004(02)
- [9]人胎食管上皮NOS阳性表达的组织化学观察[J]. 邵金贵. 皖南医学院学报, 2001(04)
- [10]慢性胃食管反流病动物模型制备与HO-1在食管和肺组织中的表达及作用机制研究[D]. 杨路亭. 河北医科大学, 2006(11)