一、细胞移植修复心脏的现状与展望（论文文献综述）
王擎擎[1]（2021）在《活血温通方联合BMSCs移植改善心梗后缺血缺氧微环境的机制研究》文中进行了进一步梳理背景:当代以干细胞技术为核心的再生医学的迅速发展,为心肌梗死的治疗带来新的希望,其中干细胞移植治疗心梗,有望修复坏死的心肌组织,改善受损的心功能,但是梗死区缺血、缺氧局部微环境使MSCs移植后存活率降低,极大地限制了 MSCs用于治疗MI的疗效。中药促进MSCs移植后存活的研究目前也显示出了很好的疗效,可以调控MSCs的归巢、定植,提高MSCs移植后存活率。导师姚魁武教授基于中医胸痹心痛“阳微阴弦”的基本病机,常用活血温通法治疗冠心病,临床疗效显着,并根据多年临床经验拟定了具有活血温通效果的经验方—活血温通方。我们前期研究也发现活血温通方可以显着改善心肌缺血模型组大鼠心功能,明显缩小心肌梗死面积,而且能够降低炎症反应、抑制心肌细胞凋亡、减少胶原纤维面积以及促进血管新生,同时发现活血温通方减轻心肌缺血损伤可能与Sirt1信号通路激活有关。而活血温通方联合MSCs移植治疗心梗,还没有相关的报道。目的:1.总结导师姚魁武教授活血温通法治疗冠心病阳虚证的用药规律、治疗思路,并进行系统的经验总结。2探索活血温通方对BMSCs移植治疗心梗疗效的影响以及可能的作用机制。方法:1.收集2016年1月—2020年12月就诊于中国中医科学院广安门医院姚魁武主任医师门诊,应用中药汤剂治疗且符合纳排标准的全部初诊原始病案。通过“中医传承计算平台（V3.0）”软件系统进行数据分析,根据分析得到到药物频次、常用药物组合、潜在处方等,分析探讨姚魁武教授活血温通法治疗冠心病的用药规律、诊疗思路,并做系统总结。2.提取大鼠BMSCs,培养至第三代时,用流氏细胞仪进行细胞鉴定。用活细胞染色剂CM-Dil进行荧光标记,以检测移植后细胞的存活情况。3.通过结扎左冠状动脉前降支制备心机梗死模型。SD大鼠随机分为5组：假手术组（Sham组）：冠状动脉只穿线不结扎，术后灌胃纯水，持续28天；心梗组（MI组）:按AMI造模方法进行造模,造模成功后于梗死区边缘心肌组织的2个位点直接注入共100μL的PBS。术后灌胃纯水,持续28天;BMSCs移植组（BMSCs组）:按AMI造模方法进行造模,造模成功后于梗死区边缘心肌组织的2个位点直接注入共100μL的MSCs单细胞悬液（细胞浓度3x106个/100μL）。术后灌胃纯水,连续28天;活血温通方组（HXWTF组）:造模方法同心梗组。术后灌胃活血温通方,连续28天;活血温通方+BMSCs移植组（BMSCs+HXWTF组）:造模方法同BMSCs移植组。术后灌胃活血温通方,连续28天。4.超声心动图检测大鼠心功能、TTC染色用于观察心肌梗死面积大小、HE染色观察心梗大鼠心肌组织形态的改变、荧光显微镜观察BMSCs移植后的存活情况。5.用WST-1法测定大鼠血清SOD活力和TBA法测定大鼠血清MDA水平,以评价各组氧化损伤程度;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡;采用ELISA试剂盒检测大鼠血清中炎性因子TNF-a、IL-6、IL-10与生长因子VEGF、bFGF水平,评价炎症反应程度;天狼猩红染色检测各组大鼠心肌纤维化程度;免疫组织化学染色检测梗死边缘区α-SMA和CD31的表达情况,以评价血管新生情况;Western blotting检测心肌组织Sirt1、NF-κB、FoxO1和p53的蛋白的表达水平。结果:1.从用药频次分析,196张处方中,共137味中药,用药频次≥20的中药有39味,用药频次≥50的有22味,用药频次≥50按频次由高到低依次为丹参（193）,桂枝（164）,砂仁（123）,川芎（117）,瓜蒌（109）,白芍（105）,炙甘草（95）,鸡血藤（93）,茯苓（88）,柴胡（87）,炒枳壳（80）,当归（78）,干姜（77）,炒白术（76）,杜仲（64）,党参（61）,麦冬（59）,肉苁蓉（58）,炒酸枣仁（56）,薤白（54）,葛根（54）,五味子（50）。2.196张处方中的137味中药按功效共分为16类,根据药物功效使用频次由高到低排列前10位的依次为补虚类（769）,活血化瘀类（436）,温里类（339）,清热类（210）,化湿类（198）,解表类（184）,理气类（177）,化痰类（155）,利水渗湿类（119）,安神类（114）。3.从药物组合频次分析,药物组合频次≥90的由高到低依次是丹参-桂枝（162）,丹参-砂仁（123）,丹参-川芎（115）,丹参-瓜蒌（108）,丹参-白芍（104）,丹参-桂枝-砂仁（99）;桂枝-砂仁（99）。基于关联规则深入分析用药组合,导师活血温通法治疗冠心病常用的2味药的组合是丹参-瓜蒌,丹参-砂仁,丹参-桂枝,丹参-鸡血藤等;3味药的组合是丹参-砂仁-瓜蒌,丹参-桂枝-瓜蒌,丹参-桂枝-鸡血藤等。从用药关联规则网络拓扑图可以看出,关联性比较大的药物组合是丹参、桂枝、鸡血藤、瓜蒌、川芎、砂仁。4.基于复杂算法的聚类分析在深入挖掘可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的核心组合。3种药物聚类核心组合为丹参,桂枝,砂仁,瓜蒌,鸡血藤;丹参,桂枝,川芎,白芍,砂仁;丹参,桂枝,川芎,砂仁,茯苓。4种药物聚类核心组合为;丹参,桂枝,砂仁,瓜蒌,川芎,鸡血藤;丹参,桂枝,麦冬,炙甘草,川芎,生地黄;丹参,桂枝,砂仁,鸡血藤,川芎,降香;丹参,桂枝,砂仁,干姜,茯苓,瓜蒌。5种药物聚类核心组合为;丹参,桂枝,鸡血藤,瓜蒌,川芎,党参;桂枝,丹参,麦冬,川芎,炙甘草,炒白术;丹参,桂枝,干姜,砂仁,茯苓,黄连;丹参,桂枝,砂仁,瓜蒌,川芎,白芍;丹参,砂仁,桂枝,川芎,鸡血藤,降香。5.基于方剂频数分析,可以得出196例病案中共涉及方剂54个,方剂频数为2以上的药物有32个,方剂频数为5以上的方剂有24个,方剂频数为10以上的方剂有13个,方剂频数为20以上的药物有6个。可以看出导师活血温通法治疗冠心病常用的方剂有丹参饮（118）,四逆散（73）,桂枝甘草龙骨牡蛎汤（25）苓桂术甘汤（23）、瓜蒌薤白白酒汤（21）等。6.根据方剂配伍的使用频次,可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的方剂配伍是丹参饮-四逆散（47）,丹参饮-黄芪赤风汤（11）,丹参饮-交泰丸（11）,丹参饮-瓜蒌薤白白酒汤（11）,丹参饮-半夏泻心汤（11）,丹参饮-瓜蒌薤白半夏汤（11）等。基于关联规则深入分析用方组合,可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的方剂配伍是丹参饮-四逆散-瓜蒌薤白半夏汤,丹参饮-四逆散-黄芪赤风汤,丹参饮-四逆散-桂枝甘草龙骨牡蛎汤等。根据方剂组合规律关联规则网络拓扑图可以看出关联比较大的方剂是丹参饮、四逆散、生脉散、桂枝甘草龙骨牡蛎汤、瓜蒌薤白半夏汤、瓜蒌薤白白酒汤、交泰丸等。基于复杂算法的聚类分析在深入挖掘可以得出导师活血温通法治疗冠心病常用的核心方剂组合是生脉散,丹参饮,枳实薤白桂枝汤,补中益气汤,四君子汤;丹参饮,交泰丸,半夏泻心汤,苓桂术甘汤,越鞠丸;丹参饮,四逆散,黄芪赤风汤,瓜蒌薤白半夏汤,桂枝甘草龙骨牡蛎汤。7.BMSCs的鉴定:用流氏细胞仪检测第3代BMSCs表面标记物CD44、CD90、CD45的表达情况,结果显示CD44表达率为99.2%,CD90表达率为97.4%,CD45的表达率为6.7%。8.活血温通方联合MSCs移植对心梗大鼠心功能的影响:与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组EF均有明显改善（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）,活血温通方联合 BMSCs 移植组 EF比BMSCs移植组和活血温通方组改善明显（***P<0.001,**P<0.01）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组FS均有明显改善（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）,活血温通方联合BMSCs移植组FS 比 BMSCs移植组和活血温通方组改善明显（***P<0.001,***P<0.001）。9.活血温通方联合MSCs移植对心梗大鼠心肌梗死面积的影响:假手术组无梗死,完整心脏表面和心脏切片均呈现红色,无苍白色区域。心梗组完整心脏表面和心脏切片苍白色区域均最大,故心梗面积最大,且心梗处明显凹陷,心梗处心肌明显变薄。BMSCs移植组和活血温通方组较心梗组,完整心脏表面和心脏切片的苍白色区域均明显减少,说明BMSCs移植和活血温通方药物干预均能减少心梗面积。活血温通方联合BMSCs移植组心脏苍白色区域最小,心梗处轻微凹陷,说明活血温通方能提高BMSCs移植改善心梗大鼠心肌梗死面积的疗效。10.活血温通方联合MSCs移植对心梗大鼠心肌组织形态的影响:HE染色显示与假手术组相比,其余各组梗死区均有不同程度的炎性细胞浸润。心梗组细胞排列紊乱,细胞间隙增大,炎性细胞浸润最严重。BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组这些病变均有明显改善,炎性细胞浸润有不同程度的降低。与BMSCs移植组、活血温通方组相比较,活血温通方联合BMSCs移植组细胞排列更有序,炎性细胞浸润更少。11.活血温通方对BMSCs移植四周后存活的影响:在全景数字扫描显微镜下观察,可以看到活血温通方联合BMSCs移植组红色荧光分布更广。红色荧光与蓝色荧光重叠的数量明显更多。12.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠血清SOD、MDA的影响:与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组SOD活力均有显着升高（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组SOD活力均有显着升高（***P<0.001,**P<0.01）;与心梗组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组MDA水平均有显着降低（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs 移植组 MDA 均有显着降低（***P<0.001,**P<0.01）。13.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠心肌细胞凋亡的影响:与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组细胞凋亡水平显着降低（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与 BMSCs 移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组细胞凋亡水平均有显着降低（***P<0.001,***P<0.001）。14.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠血清炎性因子TNF-α、IL-6、IL-10的影响:与假手术组相比,MI组TNF-α、IL-6和IL-10水平水平显着升高（***P<0.001）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合 BMSCs 移植组 TNF-α 显着降低（**P<0.01,**P<0.01,***P<0.001）,IL-6 显着降低（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）,IL-10 显着升高（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与 BMSCs 移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组TNF-α显着降低（**P<0.01,**P<0.01）,IL-6显着降低（***P<0.001,**P<0.01）,IL-10显着升高（***P<0.001,***P<0.001）。15.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠心肌纤维化的影响:与假手术组相比,MI组心肌纤维化明显（***P<0.001）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组心肌纤维化面积明显减少（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组心肌纤维化面积明显减少（*P<0.05,**P<0.01）。16.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠梗死边缘区α-SMA、CD31表达的影响:与假手术组相比,MI组α-SMA、CD31的表达明显增多（***P<0.001,**P<0.01）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs 移植组 α-SMA、CD31 的表达均显着增多（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组 α-SMA、CD31 的表达显着增多（**P<0.01,*P<0.05;*P<0.05,***P<0.001）。17.活血温通方联合BMSCs移植对心梗大鼠血清生长因子VEGF、bFGF的影响:与假手术组相比,MI组VEGF、bFGF水平显着升高（***P<0.001）;与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组VEGF、bFGF 显着升高（***P<0.001,***P<0.001,***P<0.001）;与 BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组VEGF、bFGF显着升高（***P<0.001,***P<0.001）。18.活血温通方联合BMSCs移植对心肌组织SIRT1、NF-kB、FoxO1和p53蛋白表达的影响:与假手术组相比,MI组Sirt1的表达明显降低（***P<0.001）,NF-kB、Foxo1、p53 的表达明显升高（**P<0.01,**P<0.01,**P<0.01）。与MI组相比,BMSCs移植组、活血温通方组、活血温通方联合BMSCs移植组Sirt1的表达显着升高（**P<0.01,***P<0.001,***P<0.001）,NF-κB的表达显着降低（*P<0.05,**P<0.01,**P<0.01）,FoxO1 的表达显着降低（*P<0.05,*P<0.05,*P<0.05）,p53 的表达显着降低（*P<0.05,**P<0.01,**P<0.01）;与BMSCs移植组、活血温通方组相比,活血温通方联合BMSCs移植组Sirt1的表达均显着升高（**P<0.01,*P<0.05）,NF-kB的表达显着降低（**P<0.01,*P<0.05）,FoxO1的表达显着降低（*P<0.05,*P<0.05）,p53的表达显着降低（*P<0.05,*P<0.05）。结论:1.导师活血温通法治疗冠心病常活血药与温阳药并重,且用药平和,配伍主次分明,以经方为主。在活血温通法治疗冠心病的组方用药中常含有活血温通方,治疗效果短期的显着,可能是因为改善了心肌缺血缺氧微环境,也初步说明了活血温通方的临床疗效比较显着。2.活血温通方可能是通过改善心梗后缺血缺氧微环境而提高了 BMSCs移植后的存活率,而进一步提高BMSCs移植治疗心梗在抗细胞氧化损伤、抗细胞凋亡、降低炎症反应、抗心肌纤维化和促进血管新生方面的疗效,以及促进移植后的BMSCs的旁分泌功能而进一步修复受损的心肌,缩小心肌梗死面积,改善心功能。3.活血温通方能促进BMSCs移植后Sirt1信号通路的激活,以协同恢复心功能。
朱梓铭[2]（2019）在《养心通脉有效部位方干预AMI大鼠BMSCs分化microRNA机制研究》文中进行了进一步梳理目的:探究中药干预干细胞治疗缺血性心脏病领域国内外研究趋势,并基于前期研究基础探究养心通脉有效部位方（Active principle region of Yangxing Tongmai Formula,apr-YTF）在micro RNA水平干预急性心肌梗死（Acute myocardial infarction,AMI）大鼠骨髓间充质干细胞（Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）的分化机制。方法:（1）检索中国知网（CNKI）、Pubmed、Web of Science数据库,利用Bicomb、SPSS等软件对检索结果进行统计及文献计量学分析;（2）提取急性心肌梗死大鼠BMSCs并培养,用apr-YTF含药血清干预,以阴性模型血清对照,使用芯片检测细胞micro RNAs的表达并运用生物信息学方法预测差异micro RNAs调控的靶基因并进行功能注释分析。结果:（1）经检索及筛选,CNKI共230篇,Pubmed共63篇,WOS共77篇。基于Priced公式,CNKI共有39位作者、Pubmed有22位、WOS共有26位作者为高频作者;高频词统计及分析,CNKI共有601个关键词,频率≥6的有30个,Pubmed共有85个主题词,频率≥2的有25个,WOS共有247个关键词,频率≥2的有23个;高频词聚类分析,CNKI高频词分为4大簇分支,Pubmed分为3大簇分支,WOS分为5大簇分支。（2）经芯片探测,共有26个micro RNAs差异表达,其中个18上调,8个下调,共100个靶基因参与了19种生物过程,11种细胞组份,10种分子功能;共3条通路,轴突导向通路,癌症转录误调节通路,癌症中的micro RNA通路被富集。结论:（1）中医药干预干细胞治疗缺血性心脏病领域近十几年来发文量虽有波动,但近年来年发文量基本稳定,且外文期刊发表量有所增加;（2）国内外的研究热点和重点有一定的不同;（3）增强创新性及结合国内外研究的差异,将可能促进该领域的发展;（4）差异表达的26条micro RNAs及其所预测的靶mRNAs可能参与了AMI环境下apr-YTF对BMSCs在分化,增殖及改善心功能的调控;（5）生物学功能涉及了micro RNA对mRNA转录的调控和细胞通讯功能的参与等,并与轴突导向通路、癌症转录误调节通路有一定的相关性。
李刚[3]（2017）在《缓激肽调控人心脏c-Kit+祖细胞增殖迁移及抗凋亡的机制研究》文中研究指明目前认为人心脏c-Kit+祖细胞是最有潜力的修复受损心肌的一类干细胞,但在干细胞移植修复心肌方面仍存在着诸多问题,如移植后细胞存活率差、成心肌细胞分化程度低等。要解决这些问题,对人心脏c-Kit+祖细胞生物学功能（如增殖和迁移）的调控研究至关重要。以前的研究显示缓激肽（Bradykinin,BK）是内源性心脏保护因子,但不清楚缓激肽的心脏保护作用是否与调控心脏祖细胞的生物功能有关。本课题采用多种细胞生物学和分子生物学技术,研究BK对人心脏c-Kit+祖细胞增殖和迁移的影响及其作用的分子机制,并探讨BK对细胞氧化应激和凋亡的影响。我们发现,在人心脏c-Kit+祖细胞,BK通过激活B2受体,促进细胞增殖和细胞迁移,这些作用与增加Akt和ERK1/2磷酸化以及cyclin D1的表达,激活PI3K、PLC、PKC、MAPK有关。然后发现BK调控人心脏c-Kit+祖细胞增殖和迁移与提高胞内游离Ca2+水平有关,BK通过激活B2受体,进而激活PLC引起细胞内Ca2+水平增加。细胞内游离Ca2+水平增加有赖于细胞内钙库（通过IP3受体）Ca2+释放和细胞外Ca2+流入（通过SOCE通道）两种途径。用siRNA沉默IP3R3和SOCE相关组分TRPC1、Stim1和Orai1,BK诱导的细胞增殖和迁移受到显着抑制,BK引起的Akt和ERK1/2的磷酸化以及cyclin D1的表达增加也受到影响。最后,我们用H202诱导人心脏c-Kit+祖细胞凋亡,发现BK对H202诱导的细胞凋亡有明显的拮抗作用,BK不仅抑制ROS产生,而且能增加抗凋亡蛋白Bcl-2表达并降低凋亡蛋白Bax表达。我的博士课题研究首次证明,BK通过人心脏c-Kit+祖细胞B2受体,激活PLC,刺激钙库IP3R3释放Ca2+,促进细胞膜SOCE通道开放而增加细胞内游离Ca2+水平,引起Akt和ERK1/2磷酸化以及cyclinD1的表达增加,进而促进细胞增殖和迁移;此外,BK还具有抗氧化/抗凋亡作用。BK能否用于预处理人心脏c-Kit+祖细胞,提高移植细胞的存活率和成肌分化,促进人心脏c-Kit+祖细胞的心肌修复作用有待进一步研究。
宁田海,佟金[4]（2015）在《《中国循环杂志》2015年第30卷关键词索引》文中进行了进一步梳理说明:1本索引按关键词汉语拼音字母顺序排序。2在第1个汉字相同的情况下,按第2个汉字拼音字母顺序排序,以后依次类推。在第1个汉字音同字不同的情况下,按笔划多少排列。3在关键词相同的情况下按发表先后顺序排列。4以英文为首的词,按第1个英文字母顺序先后排列居文中关键词之前。5在第1个英文字母相同的情况下,按第2个英文字母顺序先后排列,依次类推。6文题、作者后括号内数字为期号,最后为起页。
孙维兴[5]（2021）在《缺血性心衰心脏m1A甲基化谱》文中指出背景:缺血性心血管疾病,尤其是心肌梗死（Myocardial infarction,MI）严重威胁人类健康。针对MI后引发的心脏重构及心衰进展,目前药物、冠状动脉内支架植入术、冠状动脉旁路移植术等治疗虽取得了良好的治疗效果,但MI后仍然存在相当部分的心肌细胞丧失,心室不良重构以及心功能恶化。研究发现,表观遗传在MI后心脏保护中发挥重要作用。目前关于表观遗传与心脏重构之间的研究主要集中在DNA甲基化、组蛋白翻译后修饰层面。而RNA表观转录后修饰的研究相对较少。新近研究显示RNA表观转录后修饰目前已发现150种类型,包括N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine,m6A）、N1-甲基腺苷（N1-methyladenosine,m1A）、N5-甲基胞嘧啶（N5-methylcytidine,m5C）、4-乙酰化胞嘧啶（N4-acetylcytidine,ac4C）等等。其中,m6A是最常见的真核生物内部mRNA修饰的主要类型。研究表明,在MI后心衰小鼠中,m6A去甲基化酶分子肥胖基因（Fat mass and obesity,FTO）通过下调m6A可改善缺血后心脏功能;m6A甲基化酶甲基转移酶样3（Methyltransferase-like 3,METTL3）可调节心肌肥大并促进心功能恶化。可见mRNA甲基化修饰在心脏病领域发挥着重要作用。然而,在心血管疾病中关于m1A甲基化修饰的研究尚未见报道。我们推测,与m6A修饰类似,m1A修饰可能在心脏疾病中亦发挥重要作用。由此,我们对人缺血性心衰心肌组织实施了m1A甲基化免疫共沉淀测序试图揭示人类心脏的m1A甲基化修饰图谱。我们同时在鼠缺血性心衰心脏中,检测了心肌梗死后不同时间点m1A及其甲基化修饰相关酶的表达,并筛选出去甲基化酶Alk B同源物3（Alk B homolog 3,ALKBH3）,其基因水平总体显着上调,且随心梗时间延长,呈持续上调状态。为进一步探索ALKBH3依赖的m1A修饰对MI后心脏的修复作用,我们在MI小鼠体内注射了ALKBH3抑制剂进一步观察了其对MI后心脏保护的功能表型。本研究揭示了人类心力衰竭的心脏m1A甲基化修饰图谱,并对m1A修饰的关键酶ALKBH3在缺血心脏中的保护作用进行了初步探索。本研究的实施将为靶向RNA表观转录后修饰作为缺血性心脏病的诊疗提供潜在的理论依据及实验补充。第一部分缺血性心衰心脏中m1A甲基化修饰图谱改变目的:对人缺血性心衰的心脏组织进行了RNA甲基化免疫沉淀测序（methylatedRNA immunoprecipitation sequencing,MeRIP-seq）及数据分析,揭示人的正常及缺血性心衰心脏中m1A甲基化修饰图谱改变。方法:1.MeRIP测序:使用NanoDrop ND-1000仪测量每个样品的RNA浓度,采用Qubit3.对RNA定量及分析。GenSeq TM m1ARNA IP试剂盒（GenSeq）进行m1ARNA免疫沉淀反应。NEBNext?Ultra II DirectionalRNA Library Prep试剂盒对InputRNA样品,以及免疫沉淀后的IPRNA样品进行RNA测序文库构建。通过Bio Analyzer2100分析仪进行文库质检。在Illumina Novaseq 6000测序仪进行高通量测序。经过Illumina Novaseq 6000测序仪测序,图像分析,碱基识别和质控后,产生原始reads。对差异甲基化的编码基因进行GO和Pathway分析。2.mRNA测序:RNA定量质控、完整性质控和文库质量丰富MeRIP测序。用Ribo-Zero rRNA Removal Kits移除总RNA中的rRNAs,使用Tru Seq Stranded TotalRNA Library Prep Kit预处理RNA,构建测序文库。使用Bio Analyzer 2100仪器进行文库质控和定量。根据Illumina测序说明,将10 p M文库变性为单链DNA分子,在Illumina Nova Seq 6000测序仪上进行测序。结果:通过MeRIP-seq测序分析显示,在正常心脏和缺血性心衰心脏中mRNA m1A的整体分布和m1A峰富集的分布没有明显的差别,两者都主要分布在编码序列区（Coding sequence,CDs）,在起始密码子端附近m1A峰显着富集,3’非翻译区（3’Untranslated regions,3’UTR）区富集最少。相对于正常心脏组织,缺血性心衰心肌mRNA m1A甲基化修饰发生了显着变化。人心脏组织在正常和缺血性心衰两种状态下其mRNA m1A甲基化修饰均有特异性的富集,且m1A甲基化修饰差异程度大。GO/KEGG功能富集分析显示,mRNA m1A甲基化修饰发生了显着差异变化的转录本的功能与心肌收缩功能、氧化应激及心肌纤维化等相关。结合发生显着差异变化的mRNA和mRNA m1A分析提示,在缺血性心衰中同时出现mRNA表达水平显着差异改变及其m1A甲基化修饰显着差异改变的部分相对较少。显着差异表达的mRNA GO/KEGG功能富集分析显示,这些mRNA的功能主要与心肌收缩、心肌能量代谢、炎症、纤维化和细胞凋亡相关。结论:人缺血性心衰发生后,心肌m1A甲基化修饰图谱发生了显着变化,m1A富集到的转录本功能与调节关键的心肌收缩功能、氧化应激及心肌纤维化等生物学过程相关。第二部分ALKBH3对大鼠心肌梗死后心脏修复功能研究目的:检测m1A在MI后的修饰变化,筛选MI后介导m1A修饰改变的关键酶,探索ALKBH3抑制剂对MI后心脏修复的影响。方法:1.m1A和m1A甲基化修饰相关酶检测:动物实验分组:假手术组（n=6）和心肌梗死组（n=6）。我们通过建立SD大鼠心肌梗死模型,分别取假手术组和心肌梗死组AMI后4小时、1天、2天、3天、7天、14天和28天缺血心肌组织进行RT-q PCR和Wester blot实验检测m1A甲基化修饰相关酶基因和靶分子蛋白的表达。Dot blot实验检测上述不同时间点心肌梗死组织中m1A表达。2.ALKBH3抑制剂对MI后心脏修复的功能影响:本部分实验分组:假手术组,心肌梗死组和心肌梗死加HUHS015组。我们通过建立昆明小鼠心肌梗死模型,在建模后48小时,通过模型鼠项背部皮下注射HUHS015 32 mg/kg,每日1次,连续7天,干预后28天取心肌组织进行masson染色,显微镜下观察心肌纤维化变化,用Image J软件定量分析心肌纤维化。结果:1.m1A在心肌梗死心脏中的表达:心肌梗死组织中不同时间点m1A的表达呈现明显动态变化,急性心肌梗死后第1天和第2天最高,与对照组比较明显上调（P<0.05）,第三天开始持续下降,其中第28天降至最低,与对照组比较第3、7、14和28天明显下调（P<0.05）。结果表明随着MI后m1A水平发生了动态改变,且时间延长,总体上呈下调趋势。2.心肌梗死后心脏RNA m1A甲基化修饰相关酶TRMT6、TRMT61A、ALKBH1、ALKBH3和BMT2基因表达水平发生了动态改变,其中ALKBH3表现出显着规律变化,即MI后1天降低,2天后降至最低,与对照组比较降低（P<0.05）,第三天开始持续升高,与对照组比较第14和28天明显升高（P<0.05）。3.ALKBH3蛋白的在MI心脏中的表达:心肌梗死组织中不同时间点ALKBH3的表达亦呈现明显动态改变,急性心肌梗死后第1和第2天后降至最低,与对照组比较有统计学意义（P<0.05）,第三天开始持续升高,其中与对照组比较第7、14和28天显着上调（P<0.05）。ALKBH3的动态改变与m1A表达水平呈负相关。4.抑制ALKHB3的作用后心肌梗死心脏纤维化改变:对心肌组织进行masson染色及Image J软件定量分析心肌纤维化,对比分析发现,相比心肌梗死组,心肌梗死加HUHS015组的心肌纤维化明显减少（P<0.05）,这表明抑制ALKHB3的作用能促进MI后心脏修复。结论:1.在心肌梗死后,心肌中RNA m1A、ALKBH3的mRNA和ALKBH3蛋白表现出规律改变,三者之间改变呈对应调节关系。2.抑制m1A去甲基化酶ALKBH3的活性可改善心肌纤维化,促进心脏功能的修复。
冀楠[6]（2021）在《益气活血方联合骨髓间充质干细胞干预心肌梗死后心室重构的实验研究》文中研究表明背景:急性心肌梗死（Acute Myocardial infarction,AMI）发生后,左心室大小、结构、功能改变,造成心室重构。心室重构（Ventricμlar remodeling,VR）是AMI向心力衰竭发展的主要病程。骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）可通过旁分泌、归巢、转化等方式缓解AMI后心肌损伤,改善心室重构。但由于AMI后内环境改变,造成BMSCs迁移效率低下。团队前期研究发现,益气活血方可改善AMI后炎性环境,改善AMI大鼠心肌损伤。但益气活血方是否可以促进BMSCs向AMI大鼠梗死部位迁移,发挥更好的心肌保护作用,值得深入研究。目的:探讨益气活血方联合骨髓间充质干细胞对心肌梗死后心室重构的干预作用,以mi RNA-210/BNIP3为切入点,从自噬-凋亡途径研究益气活血方联合干细胞对心室重构的可能的作用机制。方法:1、从SD大鼠骨髓中提取BMSCs,显微镜下观察细胞形态,流式检测细胞表面标志物。采用LAD结扎的方法建立大鼠心肌梗死模型,分为假手术组、模型组、益气活血方组、骨髓间充质干细胞组、益气活血方联合骨髓间充质干细胞组。造模2小时,心电图检测心肌缺血情况。药物干预4周后,心脏超声评价大鼠心脏结构和功能,TTC染色评价大鼠心肌梗死面积,HE染色观察大鼠心肌炎性细胞浸润情况、Masson染色观察心肌纤维组织病理改变。2、使用CM-DIL染料对BMSCs细胞膜标记染色。造模后隔天尾静脉移植入大鼠体内。干预4周后取材,运用免疫荧光检测BMSCs向梗死部位富集情况,免疫组化检测心肌组织中SDF-1/CXCR4蛋白的表达水平。3、TUNEL检测大鼠心肌细胞凋亡情况。Western Blot检测造模后各组大鼠自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、p62表达情况,凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表达情况,目的蛋白BNIP3表达情况。RT-q PCR检测mi R-210、BNIP3 mRNA表达情况。结果:1、与假手术组相比,模型组大鼠的LVESD、LVEDD增加（P<0.01）,LVEF、LVFS降低（P<0.01）,提示模型组大鼠左室扩大,心功能下降,心脏结构改变;与模型组相比,益气活血方组、益气活血方联合骨髓间充质干细胞组的LVEDD、LVESD减小（P<0.05or P<0.01）,LVEF、LVFS升高（P<0.05 or P<0.01）,提示此两组可减轻心肌梗死所致的大鼠心脏损伤,减轻大鼠心脏结构改变;与模型组比较,骨髓间充质干细胞组的LVESD减小（P<0.01）,LVFS、LVEF升高,LVEDD减小,但差异无统计学意义（P>0.05）。与益气活血方联合骨髓间充质干细胞组相比,益气活血方组与骨髓间充质干细胞组LVESD、LVEDD增加（P<0.05 or P<0.01）,LVEF、LVFS降低（P<0.05 or P<0.01）。提示益气活血方联合骨髓间充质干细胞组对梗死心肌的保护作用最为显着。TTC染色结果显示:与假手术组相比,模型组梗死面积显着增加（P<0.01）。与模型组相比,各给药组梗死面积减少（P<0.05 or P<0.01）。与益气活血联合骨髓间充质干细胞组相比,其余两给药组梗死面积增大（P<0.05 or P<0.01）。HE染色结果显示:假手术组大鼠心肌细胞形态正常,细胞核结构清晰,居于中央,肌丝着色均匀,排列整齐规则,呈正常心肌细胞形态;与假手术组比较,模型组大鼠病变程度严重,心肌细胞形态不规则,排列紊乱,细胞核深染,炎性细胞浸润增多;与模型组比较,各给药组大鼠梗死范围缩小,心肌结构改变减轻,肌丝排列较规则,炎性细胞浸润和水肿减少。Masson染色结果显示:假手术组心肌细胞排列整齐,极少纤维组织沉积;模型组病变最为严重,染色显示在心肌梗死边缘区心肌细胞肥大,纤维组织沉积严重,排列紊乱,可见大面积蓝色纤维化;与模型组比较,各给药组显示胶原纤维沉积减少,心肌排列整齐。2、AMI大鼠造模后隔天经尾静脉移植BMSCs,荧光显微镜下观察其迁移情况,可见心肌组织中橙红色荧光,BMSCs向心肌梗死部位富集。免疫组化结果显示:与骨髓间充质干细胞组相比,益气活血方联合骨髓间充质干细胞组SDF-1蛋白表达增加（P<0.05）,CXCR4表达无统计学差异。3、TUNEL染色显示假手术组未见明显阳性细胞核染色,阳性细胞核染色多见于模型组。与模型组相比,给药组阳性细胞核染色数量明显减少。凋亡相关蛋白WB检测显示:与假手术组比较,模型组大鼠心肌Bax蛋白表达上调（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达下调（P<0.01）,Caspase-3表达上调（P<0.01）,提示凋亡激活;与模型组比较,各给药组可下调Bax蛋白表达（P<0.01）,益气活血方组和益气活血方联合骨髓间充质干细胞组可下调Caspase-3蛋白表达（P<0.01）,上调Bcl-2蛋白表达（P<0.05）,骨髓间充质干细胞组Bcl-2蛋白表达有上调趋势,Caspase-3蛋白表达有下降趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;与益气活血方联合骨髓间充质干细胞组相比,益气活血方组和骨髓间充质干细胞组Bax、Caspase-3蛋白表达上调,（P<0.01 or P<0.05）,Bcl-2表达下调（P>0.05）,提示益气活血方联合骨髓间充质干细胞组抑制凋亡效应最显着。自噬相关蛋白WB检测显示:与假手术组比较,模型组大鼠心肌P62蛋白表达上调（P<0.05）,LC3B、Beclin-1蛋白表达下调,（P<0.01 or P<0.05）提示自噬激活;与模型组比较,各给药组可下调P62蛋白表达（P<0.01）,上调Beclin-1蛋白表达（P<0.01）,益气活血方组和益气活血方联合骨髓间充质干细胞组可上调LC3B蛋白表达（P<0.01 or P<0.05）,骨髓间充质干细胞组LC3B蛋白表达有上调趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）;与益气活血方联合骨髓间充质干细胞组相比,益气活血方组和骨髓间充质干细胞组P62蛋白表达上调（P<0.01 or P<0.05）,LC3B、Beclin-1表达下调（P<0.01 or P<0.05）,提示益气活血方联合骨髓间充质干细胞组诱导自噬效应最显着。BNIP3蛋白WB检测显示:与假手术组比较,模型组大鼠心肌BNIP3蛋白表达上调（P<0.01）;与模型组比较,各给药组可下调BNIP3蛋白表达（P<0.01 or P<0.05）;与益气活血方联合骨髓间充质干细胞组相比,益气活血方组和骨髓间充质干细胞组BNIP3蛋白表达上调（P<0.01）。mi R-210与BNIP3 Mrna PCR检测结果显示,与假手术组比较:模型组大鼠心肌mi R-210表达下调（P<0.01）,BNIP3 mRNA表达水平上调（P<0.01）;与模型组比较:益气活血方组和益气活血方联合骨髓间充质干细胞组可上调mi R-210表达（P<0.01 or P<0.05）,骨髓间充质干细胞组mi R-210表达有下降趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）,各给药组可下调BNIP3 mRNA表达情况（P<0.01）;与益气活血方联合骨髓间充质干细胞组相比:益气活血方组和骨髓间充质干细胞组mi R-210表达下降,（P<0.01）,骨髓间充质干细胞组BNIP3 mRNA表达水平上升（P>0.01）,益气活血方组BNIP3 mRNA有上升趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）。提示益气活血方可能通过mi R-210/BNIP3通路发挥作用,且益气活血方联合骨髓间充质干细胞效用最为显着。结论:1、益气活血方联合骨髓间充质干细胞能够提高心梗后射血分数,改善大鼠的心脏结构,减轻心脏损伤。2、益气活血方通过干预SDF-1/CXCR4轴增加BMSCs向梗死区富集效率。3、益气活血方联合骨髓间充质干细胞可能通过调控mi RNA-210/BNIP3轴,影响心肌细胞自噬-凋亡,发挥抑制VR机制。
刘晓云[7]（2021）在《3D打印技术构建干细胞仿生支架用于软骨及脊髓损伤修复的研究》文中研究说明3D打印技术以生物材料、细胞等生物活性分子为单元,能够精确、高效地构建复杂、个性化的仿生功能性支架。近些年来已经成为组织工程以及再生医学领域的研究热点。但是目前利用3D技术进行组织工程修复还存在一定局限性,例如生物材料缺乏良好的打印性、力学性能与天然组织器官不匹配以及诱导细胞发挥作用的生物功能有限等。针对目前软骨及脊髓损伤修复存在的难题,本博士论文利用3D打印技术通过构建个性化仿生三维支架来模拟不同组织的微环境,有效诱导干细胞的增殖与分化,从而在体内外环境下,研究其在软骨以及脊髓损伤修复中的潜在应用价值。本论文主要研究可分为三部分:1、为了构建生物功能、力学性能双重仿生支架用于关节软骨修复,通过3D打印技术构建聚己内酯（PCL）加固的具有微孔道结构的羟丁基壳聚糖-纳米短纤维（HBC-NF）复合水凝胶模拟关节软骨微环境以及力学强度,调控人间充质干细胞（hMSCs）存活和分化,从而实现对软骨组织损伤的修复。实验结果表明,HBC-NF具有良好的生物相容性,在体外培养环境下能够有效促进hMSCs的增殖。更重要的是,所制备的HBC-NF水凝胶内部拓扑结构可以促进细胞间的相互作用,增强软骨分化早期的“聚合作用”,从而显着提高hMSCs的软骨分化能力。与此同时,利用3D打印技术构建PCL网格骨架以及支架内部的微孔道,提高整个支架的力学性能以及物质交换能力。实验证明该复合支架具有与软骨相似的力学性能,同时能在体内很好地诱导软骨的形成,有望在未来实现对关节软骨的有效修复。2、脊髓损伤是一种严重的致残性损伤。利用生物3D打印技术,将生物材料与神经干细胞（NSCs）相结合,精确控制细胞的密度与分布,构建具有生物活性的支架,模仿天然脊髓的结构与功能,可以有效修复脊髓损伤。基于上一研究的发现,HBC具有良好的可打印性能,本研究利用HBC、透明质酸以及基质胶组合的新型生物墨水。该生物墨水可实现20 s快速成胶以及自动二次交联,从而实现“一步法”生物3D打印,构建NSCs脊髓仿生支架,从而解决目前NSCs生物3D打印中打印过程繁琐、细胞存活率低、细胞-支架相互作用弱等问题。实验表明,打印后的NSCs存活率高（>95%）,优化的支架微环境能够加强细胞-支架相互作用,诱导NSCs向神经元分化,形成神经网络。利用生物3D打印技术构建脊髓样支架,移植到全横断脊髓损伤大鼠模型中,在脊髓损伤处实现神经元再生,降低胶质瘢痕沉积,从而明显改善了大鼠的后肢运动能力。该工作有望用于脊髓损伤以及神经相关疾病的治疗和再生修复。3、在NSCs生物3D打印仿生支架的基础上,第三部分的研究进一步探究药物小分子对NSCs分化的作用,通过构建功能性神经支架,负载并缓释诱导小分子更好地促进NSCs的神经元分化。本章研究首次探讨了 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制剂OSMI-4小分子对NSCs分化的影响及其分子机制。实验结果表明,OSMI-4能够通过抑制NSCs的Notch通路,促进细胞向神经元分化。利用甲基丙烯酰化明胶与丙烯酰环糊精构建超分子水凝胶,制备可生物3D打印的生物墨水,该墨水具有良好可打印性,打印后的支架能够提高细胞-支架相互作用,有利于NSCs在支架内部的粘附以及增殖。更重要的是该水凝胶能够负载并缓释疏水性OSMI-4小分子,诱导NSCs向神经元分化。动物实验表明,该功能支架能够促进脊髓损伤处神经元再生以及轴突生长,从而明显改善脊髓损伤大鼠的后肢运动能力,为脊髓损伤治疗提供新的治疗策略。
昝君[8]（2021）在《左旋聚乳酸骨支架的力学强化及降解调控机理研究》文中进行了进一步梳理左旋聚乳酸（Poly（L-lacti acid）,PLLA）因具有天然的可降解性和良好的生物相容性等优势,在骨组织修复领域展现了极大的应用潜力。然而,PLLA力学强度不足,无法满足骨组织修复要求,同时其降解产物呈酸性,容易在体内形成局部酸性环境,造成炎症反应。此外,PLLA降解速率较为缓慢,不利于新骨组织的生长。本文采用选择性激光烧结技术制备PLLA骨支架,通过氧化镁纳米粒子（nMgO）水解形成的碱性物质来中和PLLA的酸性降解产物,利用聚乳酸-苹果酸（PLMA）表面修饰nMgO提高PLLA与nMgO之间的界面结合并促进nMgO的分散,提高复合骨支架的力学性能,最后利用沸石咪唑啉骨架-8（ZIF-8）独特的p H响应溶解特性加快PLLA骨支架的降解速度。论文的主要工作及创新点如下:1、针对PLLA降解呈酸性的问题,利用nMgO水解形成含碱性的氢氧化镁中和PLLA的降解产物,提高浸泡液p H值,从而避免炎症反应。同时nMgO水解会释放营养元素Mg离子,这对细胞的粘附和增殖有促进作用。此外nMgO可通过异质形核效应提高PLLA的结晶速率和结晶度,改善骨支架结构稳定性。2、针对PLLA力学强度不足的问题,利用PLMA表面修饰nMgO来改善PLLA与nMgO之间的界面结合。一方面PLMA亲水端的羧基可以与nMgO的羟基形成氢键作用,另一方面PLMA具有与PLLA相同结构的L-乳酸（LA）链,可以与PLLA基体形成化学键结合,进而作为连接nMgO和PLLA的界面桥来提高两者的界面结合。此外,PLMA包裹nMgO会降低nMgO之间的亲和力,阻碍氧桥键形成,从而促进nMgO在基体中的分散。此时,均匀分布的nMgO能够有效地提高PLLA支架的力学强度,结果表明在引入PLMA表面修饰的nMgO后,骨支架压缩强度和压缩模量分别提高了47.1%和237.7%。3、针对PLLA降解的问题,利用ZIF-8独特的p H响应溶解特性来加速PLLA降解。降解实验表明引入ZIF-8至PLLA骨支架后,骨支架表面的ZIF-8会自发降解并引发大量空腔,促进浸泡液侵入骨支架,同时PLLA降解会降低溶液p H,反过来会加快ZIF-8降解,从而协同地提高了骨支架的降解速率。此外ZIF-8的有机配体可以与PLLA形成良好的界面结合,以及ZIF-8可以通过异质形核效应提高PLLA支架的力学强度。
王芳[9]（2021）在《利用单碱基编辑系统构建早衰症非人灵长类模型》文中进行了进一步梳理如何做到抵抗衰老,延年益寿是人类发展历史上经久不衰的话题。机体的衰老可分为正常衰老和病理性衰老。在病理性衰老中,属于单碱基突变的罕见遗传病的早衰症（HGPS,Hutchinson-Gilford progeria syndrome）一直受到研究者的重点关注。早衰症的致病原因是位于人类一号染色体上负责编码细胞核核纤层蛋白的LMNA基因的编码区域的第1824位胞嘧啶突变为胸腺嘧啶。核纤层蛋白在维持细胞结构,有丝分裂,染色体凝集等方面发挥重要作用。LMNA（c.1824C>T）的突变会导致lamin A/C的m RNA发生错误剪切,引起毒性蛋白progerin的积累,最终诱发早衰症。另外,LMNA（c.357-2A>G）的突变会引起LMNA基因2号外显子缺失诱发扩张型心肌病（DCM,Dilated cardiomyopathy）。因为非人灵长动物与人类在遗传背景上具有高度的相似性,所以成功构建出非人灵长类动物疾病模型可以极大地推动人们对于遗传疾病致病机理与基因治疗的研究进程。作为CRISPR/Cas9（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9）系统的衍生物,单碱基编辑器由单切Cas9酶（nick Cas9,n Cas9）和脱氨酶组成。目前单碱基编辑器可分为两个大类,诱导胞嘧啶突变为胸腺嘧啶的胞嘧啶单碱基编辑器和诱导腺嘌呤突变为鸟嘌呤的腺嘌呤单碱基编辑器。与传统的利用同源重组引入碱基突变相比,单碱基编辑器具有易操作,效率高的优势。本研究前期通过显微注射的手段分别将胞嘧啶单碱基编辑系统和腺嘌呤单碱基编辑系统注射到食蟹猴胚胎,获得LMNA（c.1824C>T）的HGPS食蟹猴胚胎模型和LMNA（c.357-2A>G）的DCM食蟹猴胚胎模型,成功建立了非人灵长类胚胎靶向基因位点的单碱基编辑方法学。后期,通过移植经过BE4max编辑的食蟹猴胚胎,本研究成功获得了5只存在LMNA（c.1824C>T）突变的新生小猴。通过蛋白检测相关实验,本研究证实HGPS模型猴全身多组织表达早衰progerin蛋白。临床表型观察证实HGPS模型猴在刚出生时和临床早衰患儿一样并无异常,但随着时间推移,早衰症小猴逐渐表现出脱发,骨骼发育异常,生长发育滞后等临床病症。组织病理学分析证实了HGPS模型猴出现皮肤老化,脂肪代谢异常和动脉粥样硬化早期症状。转录组分析数据显示HGPS模型猴的上调差异基因主要集中在免疫应答及细胞因子与细胞因子受体相互作用通路。相较于已有的HGPS动物模型,本研究构建的HGPS模型猴更全面且较高水平地模拟了临床早衰症患儿。综上所述,本论文研究证实了单碱基编辑器在构建非人灵长类动物疾病模型上的可行性和安全性。并且,本研究构建出的HGPS模型猴将为后续早衰症的机制研究和治疗,以及正常衰老的机制研究提供强有力的平台。
冯雨菲,何贵新,胡梦弦,郑国坤,肖婷,玉黎燕,申永艳,陈天宇,秦伟彬[10]（2021）在《干细胞移植及中医药干预治疗心肌梗死的研究新进展》文中研究指明随着经济社会的快速发展,生活方式的改变以及人口老龄化的愈加严重,心肌梗死的发病率和病死率呈现明显的上升趋势,已然成为全世界范围内重大公共卫生问题。相较于其他治疗手段,干细胞移植作为修复梗死心肌的治疗思路越来越受到重视,其主要通过分化心肌细胞、促进血管新生和旁分泌功能三个方面来发挥修复作用,进而达到治疗效果。而中医药具有疗效确切、毒副作用小、多靶点、多环节、多通路的特点,在干细胞的增殖分化、迁移归巢等方面均起到积极作用。通过对干细胞移植治疗心肌梗死种类、机制、输注方式以及中医药干预等方面进行阐述,为相关研究提供参考。
二、细胞移植修复心脏的现状与展望（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、细胞移植修复心脏的现状与展望（论文提纲范文）
（1）活血温通方联合BMSCs移植改善心梗后缺血缺氧微环境的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 综述一 活血温阳类药物治疗冠心病的文献研究 |
| 参考文献 |
| 综述二 中药联合MSCs移植治疗心肌梗死的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 姚魁武教授论治冠心病阳虚证的经验以及发掘 |
| 导师姚魁武活血温通法治疗冠心病的经验总结 |
| 基于中医传承计算平台分析姚魁武教授治疗冠心病阳虚证用药特点 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 活血温通方联合BMSCs移植治疗大鼠急性心梗的疗效评价 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 活血温通方联合BMSCs移植改善大鼠心梗区缺血缺氧微环境的机制研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 小结 |
| 创新点与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 查新报告 |
（2）养心通脉有效部位方干预AMI大鼠BMSCs分化microRNA机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第1章 中医药干预干细胞治疗缺血性心脏病的文献计量学研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料及方法 |
| 2.1 数据库及软件 |
| 2.2 文献选取标准及分析方法 |
| 2.3 检索策略 |
| 2.4 文献处理方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 文献检索结果 |
| 3.2 文献发表年代趋势 |
| 3.3 Pubmed数据库文献发表期刊来源国家分布 |
| 3.4 文献期刊分布 |
| 3.5 作者与发文机构统计 |
| 3.6 各数据库高频词统计 |
| 3.7 高频词聚类分析结果 |
| 3.8 高频词共现分析结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 文献发表年代趋势 |
| 4.2 团队研究特点以及分布机构 |
| 4.3 高频词聚类及共现分析 |
| 4.4 总结与展望 |
| 5 小结 |
| 第2章 基于microRNA探究apr-YTF干预AMI大鼠BMSCs作用机制 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 主要方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 Total RNA质检结果 |
| 3.2 差异表达的microRNAs筛选结果 |
| 3.3 差异表达的microRNAs聚类结果 |
| 3.4 差异microRNAs的靶基因预测 |
| 3.5 microRNA-mRNA互作关系网络拓扑学分析 |
| 3.6 MicroRNA-mRNA生物信息学分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 差异microRNAs生物信息学分析 |
| 4.2 差异microRNAs调控的相关研究 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 综述 中医药联合干细胞在心肌修复中的进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 |
（3）缓激肽调控人心脏c-Kit+祖细胞增殖迁移及抗凋亡的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 心脏祖细胞 |
| 1.1.1 心脏祖细胞概述 |
| 1.1.2 心脏祖细胞的分类 |
| 1.1.3 心脏祖细胞的应用 |
| 1.2 细胞Ca~(2+)信号系统 |
| 1.2.1 细胞内Ca~(2+)信号简介 |
| 1.2.2 瞬时受体电位(TRP)通道与细胞功能 |
| 1.2.3 Ca~(2+)库操纵的Ca~(2+)内流(SOCE)通道与细胞功能 |
| 1.2.4 人心脏祖细胞的Ca~(2+)信号研究 |
| 1.3 缓激肽 |
| 1.3.1 缓激肽受体B1受体和B2受体 |
| 1.3.2 B1R和B2R信号转导调控的生理过程 |
| 1.3.3 缓激肽的心肌保护作用 |
| 1.3.4 缓激肽与钙信号系统 |
| 第二章 实验材料和实验方法 |
| 2.1 实验相关药品和试剂 |
| 2.2 实验主要仪器 |
| 2.3 主要试剂配制 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 RT-PCR方法 |
| 2.4.2 Western blotting方法 |
| 2.4.3 MTT法 |
| 2.4.4 BrdU细胞免疫荧光 |
| 2.4.5 流式细胞术检测细胞周期 |
| 2.4.6 细胞划痕实验 |
| 2.4.7 Transwell细胞迁移实验 |
| 2.4.8 siRNA细胞转染实验 |
| 2.4.9 流式细胞术检测细胞凋亡 |
| 2.4.10 流式细胞术检测细胞内活性氧 |
| 2.4.11 细胞内Ca~(2+)活动测定 |
| 2.5 统计学分析 |
| 第三章 BK对人心脏c-Kit~+祖细胞增殖和迁移的影响及相关机制研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料和实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 人心脏c-Kit~+祖细胞中BK受体的表达 |
| 3.3.2 BK促进人心脏c-Kit~+祖细胞增殖 |
| 3.3.3 BK促进人心脏c-Kit~+祖细胞迁移 |
| 3.3.4 B2R基因沉默效率 |
| 3.3.5 B2R基因沉默对BK细胞增殖的作用 |
| 3.3.6 B2R基因沉默后BK对人心脏c-Kit~+祖细胞迁移的作用 |
| 3.3.7 BK促进人心脏c-Kit~+祖细胞增殖和迁移的信号通路 |
| 3.3.8 B2R与BK调控人心脏c-Kit~+祖细胞增殖和迁移的信号通路 |
| 3.3.9 BK调控人心脏c-Kit~+祖细胞增殖和迁移的信号通路 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 BK对人心脏c-Kit~+祖细胞钙活动的影响以及相关钙通路分子研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料和实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 B2R/PLC/IP3R参与调控BK诱导的人心脏c-Kit~+祖细胞钙活动 |
| 4.3.2 细胞膜相关钙通路与BK诱导的人心脏c-Kit~+祖细胞Ca~(2+)活动 |
| 4.3.3 IP3Rs基因沉默效率 |
| 4.3.4 TRPC通道基因沉默效率 |
| 4.3.5 SOCE通道两个亚型基因沉默效率 |
| 4.3.6 IP3Rs和SOCE通道调控BK诱导的人心脏c-Kit~+祖细胞的钙活动 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 BK相关钙通路分子对人心脏c-Kit~+祖细胞增殖和迁移的调控作用研究 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料和实验方法 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 IP3R沉默对BK促进人心脏c-Kit~+祖细胞增殖的影响 |
| 5.3.2 TRPC沉默对BK诱导的人心脏c-Kit~+祖细胞增殖的影响 |
| 5.3.3 SOCE通道沉默对BK诱导的人心脏c-Kit~+祖细胞增殖的影响 |
| 5.3.4 IP3R/SOCE基因沉默对BK诱导的人心脏c-Kit~+祖细胞细胞周期的影响 |
| 5.3.5 IP3受体与BK诱导的人心脏c-Kit~+祖细胞迁移 |
| 5.3.6 TRPC通道与BK诱导的人心脏c-Kit~+祖细胞迁移 |
| 5.3.7 SOCE通道与BK诱导的人心脏c-Kit~+祖细胞迁移的作用 |
| 5.3.8 钙通道与BK调控的增殖和迁移相关相关信号分子 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 BK在人心脏c-Kit~+祖细胞抗氧化/抗凋亡作用研究 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 实验材料和实验方法 |
| 6.3 实验结果 |
| 6.3.1 H_2O_2剂量依赖性的诱导人心脏c-Kit~+祖细胞凋亡 |
| 6.3.2 BK抑制H_2O_2诱导的人心脏c-Kit~+祖细胞的细胞凋亡 |
| 6.3.3 BK抑制H_2O_2诱导的人心脏c-Kit~+祖细胞内活性氧 |
| 6.3.4 BK抑制H_2O_2诱导的人心脏c-Kit~+祖细胞的晚期凋亡 |
| 6.3.5 BK抑制H_2O_2诱导促进人心脏c-Kit~+祖细胞的凋亡机制 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 总结与展望 |
| 附录1 图标索引 |
| 附录2 缩略语及中英文对照 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的文章 |
| 致谢 |
| 附件 |
（4）《中国循环杂志》2015年第30卷关键词索引（论文提纲范文）
| A |
| 阿霉素 |
| 阿司匹林 |
| 阿托伐他汀 |
| Angio Light系统 |
| Apelin-APJ系统 |
| B |
| 白蛋白 |
| 白藜三醇 |
| 白细胞介素8 |
| 半乳糖凝集素3 |
| 比伐芦定 |
| 吡哆胺 |
| 臂踝脉搏波传导速度 |
| 标志和徽章 |
| 并发症 |
| 病理学,临床 |
| 病例报告 |
| 病例对照研究 |
| C |
| C反应蛋白质 |
| 侧支循环 |
| 超声检查,介入性 |
| 超声心动描记术 |
| 超声心动描记术,多普勒 |
| 超声心动描记术,压力 |
| 晨峰血压 |
| 成纤维细胞 |
| 程序性细胞死亡因子4 |
| 抽吸 |
| 除颤器,植入型 |
| 触发,活动 |
| 磁共振成像 |
| 雌激素 |
| 刺激 |
| 促红细胞生成素 |
| 促甲状腺素 |
| 催乳素 |
| 存活率 |
| D |
| 大动脉炎 |
| 代谢综合征 |
| 丹参酮 |
| 胆红素 |
| 蛋白激酶类 |
| 蛋白质二硫键异构酶 |
| 导管插入术 |
| 导管消融术 |
| 导管心室隔离成形术 |
| 登革热 |
| 低钠血症 |
| 低温 |
| 抵抗素 |
| 碘 |
| 电刺激 |
| 电极,植入 |
| 电生理学 |
| 动脉导管未闭 |
| 动脉僵硬度 |
| 动脉炎 |
| 动脉粥样硬化 |
| 动作电位 |
| 对比剂肾病 |
| 对比研究 |
| 多导睡眠监测仪,便携式 |
| 多柔比星 |
| 多态性,单核苷酸 |
| 多中心研究 |
| E |
| 二级预防 |
| 二甲双胍 |
| 二尖瓣狭窄 |
| F |
| 泛素蛋白连接酶类 |
| 方法 |
| 芳香烃受体核转位子 |
| 放射性核素显像 |
| 非对称性二甲基精氨酸 |
| 非离子型含碘对比剂 |
| 肺栓塞 |
| 肺炎 |
| 缝隙连接蛋白类 |
| 氟伐他汀 |
| 妇女 |
| 腹膜透析 |
| G |
| 钙化 |
| 肝素 |
| 感染 |
| 干扰素诱导剂 |
| 干细胞 |
| 高甘油三酯血症 |
| 高血压 |
| 高血压,肺性 |
| 高血压,妊娠性 |
| 高血压,足细胞 |
| 高血压性视网膜病变 |
| Gensini积分 |
| 骨桥蛋白 |
| GRACE评分 |
| 冠状动脉 |
| 冠状动脉斑块 |
| 冠状动脉闭塞 |
| 冠状动脉疾病 |
| 冠状动脉旁路移植术 |
| 冠状动脉旁路移植术,非体外循环 |
| 冠状动脉旁路移植术,体外循环 |
| 冠状血管 |
| 冠状血管痉挛 |
| 冠状血管造影术 |
| 灌注成像 |
| 光密度测定法 |
| 过敏反应 |
| H |
| 核纤层蛋白A型 |
| Hep G2细胞 |
| 红细胞 |
| 红细胞生成素 |
| 呼吸障碍 |
| 华法林 |
| 环匹阿尼酸 |
| 患病率 |
| 磺达肝癸钠 |
| J |
| 肌,平滑,血管 |
| 肌钙蛋白 |
| 肌联蛋白 |
| 肌细胞,心脏 |
| 基因 |
| 基因表达调控 |
| 基质金属蛋白酶3 |
| 激光 |
| 急性冠状动脉综合征 |
| 急诊 |
| 疾病特征 |
| 脊髓损伤 |
| 甲状旁腺功能亢进,原发性 |
| 甲状腺 |
| 甲状腺激素类 |
| 间隔封堵器 |
| 减阻剂 |
| 健康行为 |
| 降钙素 |
| 降血脂药 |
| 交感神经 |
| 交感神经切除术,化学 |
| 结缔组织生长因子 |
| 结果评价(卫生保健) |
| 颈动脉损伤 |
| 颈动脉狭窄 |
| 静脉血栓形成 |
| 局部血流 |
| 巨噬细胞 |
| K |
| 抗凝药 |
| 抗心律失常肽10 |
| 抗原,肿瘤相关,碳水化合物 |
| 可降解 |
| L |
| 老年人 |
| 雷米普利 |
| 雷帕霉素 |
| 类风湿性 |
| 冷 |
| 离子通道 |
| 利伐沙班 |
| 利拉鲁肽 |
| 利钠肽,脑 |
| 利钠肽,重组 |
| 利肽素 |
| 连接蛋白43 |
| 连接蛋白类 |
| 流行病学 |
| 硫化氢 |
| 螺杆菌,幽门 |
| 氯吡格雷 |
| 氯化钙 |
| M |
| 门控血池显像 |
| 免疫学 |
| N |
| 那屈肝素 |
| 脑啡肽酶 |
| 脑血管意外 |
| 内皮,血管 |
| 内皮缩血管肽1 |
| 内皮细胞 |
| 内向整流钾通道 |
| NF-k B |
| 尼古丁 |
| 尼加拉瀑布样T波 |
| 年度报告 |
| 年龄因素 |
| 尿微量白蛋白/肌酐 |
| 脓毒症 |
| P |
| 培哚普利 |
| 评论 |
| p38丝裂原活化蛋白激酶类 |
| 葡萄糖代谢障碍 |
| 葡萄糖耐量试验 |
| 普罗帕酮 |
| Q |
| 气候 |
| 气囊扩张术 |
| 憩室 |
| 前列地尔 |
| 前列腺素E2 |
| 前瞻性研究 |
| 青少年 |
| QT延长综合征 |
| 曲美他嗪 |
| 缺血 |
| 缺氧 |
| 缺氧诱导因子1 |
| R |
| 桡动脉 |
| 人参皂甙类 |
| RNA干扰 |
| S |
| 3D打印 |
| 肾动脉狭窄 |
| 肾疾病 |
| 肾素 |
| 肾素—血管紧张素系统 |
| 肾小球滤过率 |
| 肾脏 |
| 肾脏功能衰竭,慢性 |
| 生活质量 |
| 生物多样性 |
| 生长分化因子15 |
| 室间隔缺损 |
| 嗜铬细胞瘤 |
| 受体,血管紧张素 |
| 输血,预后 |
| 栓塞和血栓形成 |
| 睡眠呼吸暂停,阻塞性 |
| 睡眠呼吸暂停综合征 |
| 顺应性 |
| 死亡率 |
| 随访研究 |
| T |
| 糖尿病 |
| 糖尿病,2型 |
| 糖尿病血管病变 |
| 体层摄影术,X线计算机 |
| 体层摄影术,螺旋计算机 |
| 体外循环 |
| 体重 |
| 替米沙坦 |
| 天冬氨酸氨基转移酶类 |
| T淋巴细胞 |
| 同型半胱氨酸 |
| Turner综合征 |
| T细胞 |
| W |
| 外科手术,微创性 |
| 危险管理 |
| 危险性评估 |
| 危险因素 |
| 微RNAs |
| 微循环 |
| 围手术期并发症 |
| 维生素E |
| 维生素K |
| 尾加压素 |
| 胃肠出血 |
| 5-羟葵酸 |
| X |
| 西洛他唑 |
| 吸烟戒断 |
| 细胞保护 |
| 细胞凋亡 |
| 细胞结构 |
| 细胞生理过程 |
| 细胞外基质蛋白质类 |
| 细胞增殖 |
| 纤维蛋白原 |
| 氙气 |
| 腺苷三磷酸 |
| 腺嘌呤核苷酸类 |
| 相关血管 |
| 缬沙坦 |
| 心导管插入术 |
| 心电描记术 |
| 心动过速,室上性 |
| 心动过速,室性 |
| 心动过速,折返性 |
| 心房颤动 |
| 心房颤动,持续性 |
| 心房重构 |
| 心肺复苏术 |
| 心肌 |
| 心肌病 |
| 心肌病,肥大性,家族性 |
| 心肌病,肥厚性 |
| 心肌病,酒精性 |
| 心肌病,扩张型 |
| 心肌病,限制性 |
| 心肌肥厚 |
| 心肌梗死 |
| 心肌疾病 |
| 心肌缺血 |
| 心肌细胞 |
| 心肌纤维化 |
| 心肌消融术 |
| 心肌血管重建术 |
| 心肌炎 |
| 心肌营养素1 |
| 心肌再灌注损伤 |
| 心理学 |
| 心力衰竭 |
| 心律失常 |
| 心律失常,室性 |
| 心率变异性 |
| 心内膜炎 |
| 心肾综合征 |
| 心室电风暴 |
| 心室功能障碍,左 |
| 心室功能障碍、右 |
| 心室室壁瘤 |
| 心室重构 |
| 心血管畸形 |
| 心血管疾病 |
| 心血管事件 |
| 心血管造影术 |
| 休克,心原性 |
| 心脏瓣膜成形术 |
| 心脏瓣膜疾病 |
| 心脏瓣膜假体植入 |
| 心脏传导阻滞 |
| 心脏功能试验 |
| 心脏破裂,梗死后 |
| 心脏起搏器,人工 |
| 心脏缺损,先天性 |
| 心脏室壁瘤 |
| 心脏外科手术 |
| 心脏移植 |
| 心脏再同步化 |
| 信号传导 |
| 性别特性 |
| 性别因素 |
| 胸腺肽α1 |
| 血沉 |
| 血管 |
| 血管成形术,经腔,经皮冠状动脉 |
| 血管活性肽 |
| 血管疾病 |
| 血管内膜 |
| 血管舒张 |
| 血管再狭窄 |
| 血流储备分数,心肌 |
| 血流动力学 |
| 血栓 |
| 血栓栓塞 |
| 血栓形成 |
| 血小板计数/淋巴细胞比值 |
| 血小板减少 |
| 血小板聚集抑制剂 |
| 血小板增多 |
| 血压 |
| 血压变异性 |
| 血脂异常 |
| Y |
| 压力 |
| 烟草 |
| 盐酸小檗碱 |
| 氧化性应激 |
| 药物毒性 |
| 药物疗法 |
| 药物洗脱球囊 |
| 夜间 |
| 伊伐布雷定 |
| 胰岛素抗药性 |
| 遗传变异 |
| 遗传学 |
| 乙酰半胱氨酸 |
| 婴儿 |
| 婴儿,新生 |
| 应激 |
| 有机磷化合物 |
| 右美托咪定 |
| 右心室 |
| 预测 |
| 预后 |
| 预激综合征 |
| 鸢尾素 |
| 晕厥,血管迷走性 |
| 炎症 |
| Z |
| 载脂蛋白类 |
| 再灌注损伤 |
| 再同步化治疗 |
| 藏红花苦素 |
| 造血细胞生长因子 |
| 扎考比利 |
| 诊断 |
| 诊断,鉴别 |
| 震波治疗 |
| 正电子发射断层显像术 |
| 正压呼吸 |
| 支架 |
| 支架内再狭窄 |
| 脂蛋白类,HDL |
| 脂肪酸合成酶复合物 |
| 脂联素 |
| 治疗结果 |
| 肿瘤坏死因子类 |
| 昼夜节律 |
| 主动脉 |
| 主动脉,胸 |
| 主动脉瓣狭窄 |
| 主动脉弓 |
| 主动脉瘤 |
| 主动脉瘤,胸 |
| 主动脉内气囊泵 |
| 主动脉狭窄,瓣膜上 |
| 转化生长因子α |
| 转化生长因子β1 |
| 装置取出 |
| 子痫 |
| 自主神经系统 |
| 综述 |
| 总结性报告 |
| 组蛋白酰基转移酶 |
| 左卡尼汀 |
| 左室舒张末期压力 |
| 左西孟旦 |
| 左心耳封堵术 |
| 左心室重构 |
（5）缺血性心衰心脏m1A甲基化谱（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 缺血性心衰心脏中m1A甲基化修饰图谱改变 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 ALKBH3对心肌梗死心脏的修复作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 间充质干细胞移植治疗心肌梗死:问题、症结及新突破 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者介绍 |
（6）益气活血方联合骨髓间充质干细胞干预心肌梗死后心室重构的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一 益气活血方联合骨髓间充质干细胞对大鼠心肌梗死心功能的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 实验二 益气活血方对骨髓间充质干细胞缺血心肌归巢影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 实验三:益气活血方联合骨髓间充质干细胞通过miRNA-210/BNIP3 通路影响自噬-凋亡机制 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述一 microRNA在心肌梗死后心室重构中的研究现状 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药治疗心肌梗死后心室重构的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（7）3D打印技术构建干细胞仿生支架用于软骨及脊髓损伤修复的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 关节软骨损伤及治疗 |
| 1.1.1 关节软骨及其损伤 |
| 1.1.2 关节软骨损伤修复 |
| 1.2 脊髓损伤及治疗 |
| 1.2.1 脊髓结构与损伤 |
| 1.2.2 脊髓损伤修复治疗 |
| 1.3 生物3D打印技术 |
| 1.3.1 3D打印技术在再生医学领域的发展以及分类 |
| 1.3.2 3D打印技术在关节软骨修复中的应用 |
| 1.3.3 3D打印技术在脊髓修复中的应用 |
| 1.4 本论文的研究意义与内容 |
| 1.4.1 本论文的研究意义 |
| 1.4.2 本论文的主要研究内容 |
| 第2章 3D打印构建具有微孔道结构的纤维水凝胶支架促进间充质干细胞软骨分化 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验部分 |
| 2.2.1 实验试剂与仪器设备 |
| 2.2.2 hMSCs的分离、培养以及鉴定 |
| 2.2.3 HBC制备与表征 |
| 2.2.4 PLGA静电纺丝以及NF的制备与表征 |
| 2.2.5 水凝胶的制备与表征 |
| 2.2.6 HBC-NF水凝胶细胞毒性测定 |
| 2.2.7 hMSCs在水凝胶中的增殖 |
| 2.2.8 hMSCs在水凝胶中的软骨分化诱导及表征 |
| 2.2.9 3D打印具有微孔道结构的PCL-HBC-NF支架及其表征 |
| 2.2.10 体内软骨形成检测 |
| 2.2.11 统计学分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 hMSC的鉴定 |
| 2.3.2 PLGA短纤维的制备与表征 |
| 2.3.3 HBC水凝胶的制备与表征 |
| 2.3.4 HBC-NF水凝胶的表征 |
| 2.3.5 hMSCs细胞毒性与增殖 |
| 2.3.6 体外软骨分化 |
| 2.3.7 具有微孔道结构的PCL-水凝胶的制备与表征 |
| 2.3.8 hMSCs的体内软骨分化 |
| 2.4 实验讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第3章 生物3D打印神经干细胞支架用于脊髓损伤修复 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验试剂与仪器设备 |
| 3.2.2 HBC/HA/MA生物墨水的制备 |
| 3.2.3 HBC/HA/MA水凝胶的表征 |
| 3.2.4 NSCs提取 |
| 3.2.5 NSCs的生物3D打印 |
| 3.2.6 生物3D打印支架内NSCs的存活与增殖 |
| 3.2.7 生物3D打印支架内NSCs分化 |
| 3.2.8 支架移植入SD大鼠脊髓损伤模型 |
| 3.2.9 SD大鼠行为学表征 |
| 3.2.10 大鼠脊髓切片免疫荧光染色 |
| 3.2.11 统计学分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 HBC、HA-SH以及HA-VS的表征 |
| 3.3.2 HBC/HA/MA生物墨水的表征 |
| 3.3.3 生物3D打印NSCs负载的HBC/HA/MA支架 |
| 3.3.4 生物打印支架中NSCs的分化行为 |
| 3.3.5 SCI大鼠移植支架后运动功能恢复情况 |
| 3.3.6 组织学分析脊髓损伤修复情况 |
| 3.3.7 外源NSCs在体内的存活与分化 |
| 3.4 实验讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第4章 缓释OSMI-4小分子的神经干细胞生物打印支架用于脊髓损伤修复 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.2.1 实验试剂与仪器设备 |
| 4.2.2 材料制备 |
| 4.2.3 SM水凝胶的表征 |
| 4.2.4 NSCs的提取以及培养 |
| 4.2.5 SM水凝胶的细胞毒性测定 |
| 4.2.6 NSCs在水凝胶中的粘附以及增殖 |
| 4.2.7 OSMI-4诱导NSCs神经元分化 |
| 4.2.8 SM水凝胶中OSMI-4缓释 |
| 4.2.9 NSCs的生物3D打印 |
| 4.2.10 生物3D打印支架内NSCs的存活与增殖 |
| 4.2.11 生物3D打印支架内NSCs的分化 |
| 4.2.12 OSMI-4诱导NSCs神经元分化细胞通路检测 |
| 4.2.13 支架移植入SD大鼠脊髓损伤模型 |
| 4.2.14 BBB评分 |
| 4.2.15 大鼠脊髓切片免疫荧光染色 |
| 4.2.16 统计学分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 GelMA以及Ac-β-CD结构表征 |
| 4.3.2 SM水凝胶表征 |
| 4.3.3 NSCs细胞毒性、粘附与增殖 |
| 4.3.4 OSMI-4对NSCs分化的影响 |
| 4.3.5 生物3D打印NSCs负载的SM支架 |
| 4.3.6 SM-OSMI-4打印支架诱导NSCs神经元分化 |
| 4.3.7 OSNI-4调节NSCs分化的作用机理 |
| 4.3.8 生物打印支架对大鼠脊髓损伤的修复 |
| 4.4 实验讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间发表的学术论文以及所取得的奖励 |
（8）左旋聚乳酸骨支架的力学强化及降解调控机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 骨支架的巨大需求和发展现状 |
| 1.1.1 骨移植市场需求 |
| 1.1.2 骨移植治疗手段 |
| 1.1.3 国内外发展现状 |
| 1.2 可降解聚合物人工骨 |
| 1.2.1 可降解聚合物骨支架的分类 |
| 1.2.2 左旋聚乳酸骨支架 |
| 1.2.3 增强左旋聚乳酸骨支架的方法 |
| 1.3 纳米粒子在人工骨支架中的应用现状 |
| 1.3.1 优异的力学性能 |
| 1.3.2 强烈的表面效应 |
| 1.3.3 丰富的生物功能 |
| 1.4 骨支架制备工艺 |
| 1.5 本文研究思路及内容 |
| 1.5.1 研究思路 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 第二章 氧化镁纳米颗粒增强PLLA综合性能的研究 |
| 2.1 原材料来源与骨支架制备 |
| 2.2 骨支架微观结构 |
| 2.3 降解行为 |
| 2.4 力学性能 |
| 2.5 细胞行为 |
| 2.6 本章小结 |
| 第三章 表面修饰改善PLLA/氧化镁颗粒的界面结合 |
| 3.1 骨支架制备 |
| 3.2 mMgO粉末微观性能测试 |
| 3.3 人工骨支架的微观结构 |
| 3.4 人工骨支架的力学性能 |
| 3.5 润湿性和降解行为 |
| 3.6 人工骨支架的生物学行为 |
| 3.7 本章小结 |
| 第四章 金属有机框架材料增强PLLA支架综合性能 |
| 4.1 骨支架制备 |
| 4.2 微观性能表征 |
| 4.3 人工骨支架的力学性能 |
| 4.4 人工骨支架的降解行为 |
| 4.5 人工骨支架的细胞反应 |
| 4.6 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 全文结论 |
| 5.2 研究展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
（9）利用单碱基编辑系统构建早衰症非人灵长类模型（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 第一章 绪论 |
| 1.基于CRISPR/Cas系统的靶向基因编辑 |
| 1.1 CRISPR/Cas9系统 |
| 1.1.1 CRISPR/Cas9系统的发现 |
| 1.1.2 CRISPR/Cas9系统的作用原理 |
| 1.1.3 CRISPR/Cas9系统的发展 |
| 1.2 CRISPR/Cas13系统 |
| 1.3 单碱基编辑系统 |
| 1.3.1 单碱基编辑系统的发展 |
| 1.3.2 单碱基编辑系统的应用 |
| 1.3.3 单碱基编辑系统的脱靶效应 |
| 2.衰老 |
| 2.1 衰老的概述 |
| 2.2 衰老的研究进展 |
| 3.基于LMNA突变引起的衰老相关疾病 |
| 3.1 衰老相关疾病 |
| 3.1.1 核纤层的概述 |
| 3.1.2 核纤层疾病的概况 |
| 3.2 Hutchinson-Gilford progeria syndrome |
| 3.2.1 HGPS的分子机制 |
| 3.2.2 HGPS的机理研究现状 |
| 3.2.3 HGPS的病理表型 |
| 3.2.4 HGPS的临床治疗 |
| 3.3 扩张性心肌病 |
| 3.3.1 DCM的分子机制 |
| 3.3.2 DCM机理研究现状 |
| 3.3.3 DCM的病理表型 |
| 3.3.4 DCM的临床治疗 |
| 第二章 材料与方法 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验主要试剂 |
| 1.2 实验主要仪器 |
| 2.主要实验方法 |
| 2.1 实验动物管理 |
| 2.2 细胞水平实验 |
| 2.2.1 gRNA的设计 |
| 2.2.2 gRNA质粒构建 |
| 2.2.3 原代成纤维细胞的建系和培养 |
| 2.2.4 胚胎干细胞的获取 |
| 2.2.5 细胞克隆扩增检测 |
| 2.2.6 SA-β-Gal染色 |
| 2.2.7 免疫荧光(Immunofluorescence,IF) |
| 2.3 胚胎水平实验 |
| 2.3.1 sgRNA的体外转录 |
| 2.3.2 单碱基编辑器的的体外转录 |
| 2.3.3 猴子受精卵的获取 |
| 2.3.4 受精卵的编辑、培养及移植 |
| 2.3.5 BstXI限制性内切酶酶切实验 |
| 2.3.6 胚胎RNA的提取及测序 |
| 2.4 个体水平实验 |
| 2.4.1 基因组的提取及普通测序 |
| 2.4.2 全基因组的测序及生物信息学分析拷贝数变异,重复序列和单核苷酸变异 |
| 2.4.3 差异基因分析 |
| 2.4.4 行为学分析 |
| 2.4.5 血液检测 |
| 2.4.6 蛋白免疫印迹(Western blot,WB) |
| 2.4.7 qPCR |
| 2.4.8 X射线检测 |
| 2.4.9 组织学染色 |
| 第三章 非人灵长类胚胎靶向基因位点的单碱基编辑方法学的建立 |
| T的单碱基突变'>1.Cytidine base editor(CBE)介导DNA上C>T的单碱基突变 |
| T)突变'>1.1 CBE介导HEK293T LMNA(c.1824C>T)突变 |
| T)突变'>1.2 CBE介导的食蟹猴胚胎LMNA(c.1824C>T)突变 |
| T)突变'>1.2.1 CBE可诱导食蟹猴胚胎LMNA(c.1824C>T)突变 |
| T)突变导致胚胎细胞核结构异常'>1.2.2 LMNA(c.1824C>T)突变导致胚胎细胞核结构异常 |
| 1.2.3 BE3可导致胚胎发育异常 |
| G的单碱基突变'>2.Adenine base editor(ABE)介导DNA上A>G的单碱基突变 |
| G)突变'>2.1 ABE可诱导食蟹猴胚胎LMNA(c.357-2A>G)突变 |
| G)突变'>2.1.1 ABE可诱导食蟹猴胚胎LMNA(c.357-2A>G)突变 |
| G)突变可引起LMNA2 外显子的剪切'>2.1.2 LMNA(c.357-2A>G)突变可引起LMNA2 外显子的剪切 |
| 2.1.3 ABE7.10和ABEmax均不会导致胚胎发育异常 |
| C)突变'>2.2 ABE介导的食蟹猴胚胎EGFP(c.199T>C)突变 |
| C)突变'>2.2.1 ABE介导的核移植胚胎EGFP(c.199T>C)突变 |
| 2.2.2 ABE可同时编辑多个位点 |
| 3.脱靶分析 |
| 3.1 BE3可导致大量新生突变 |
| 3.2 ABE很少引起新生突变 |
| 4.讨论与小结 |
| 第四章 单碱基编辑器构建非人灵长类早衰模型 |
| 1.构建早衰猴模型 |
| 1.1 HGPS模型猴的获取 |
| 1.2 HGPS模型猴全身多组织表达早衰蛋白 |
| 1.3 HGPS模型猴脱靶分析 |
| 1.3.1 HGPS模型猴的染色质稳定 |
| 1.3.2 HGPS模型猴SNV与野生猴无差异 |
| 1.4 HGPS模型猴模拟临床早衰症病症 |
| 1.4.1 细胞增殖能力减弱 |
| 1.4.2 HGPS模型猴生长受阻 |
| 1.4.3 HGPS模型猴的行动能力受限 |
| 1.4.4 HGPS模型猴的心血管异常 |
| 1.4.5 HGPS猴心脏功能受损 |
| 1.4.6 HGPS模型猴的皮肤异常 |
| 1.4.7 HGPS模型猴生理指标未见异常 |
| 2.HGPS早衰症机制初探 |
| 3.讨论与小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录A 攻读博士期间发表论文目录 |
| 附录B 实验动物伦理审批表 |
（10）干细胞移植及中医药干预治疗心肌梗死的研究新进展（论文提纲范文）
| 1 干细胞的分类及在心肌梗死中的应用 |
| 1.1 胚胎干细胞(ESCs) |
| 1.2 诱导多能干细胞(IPSs) |
| 1.3 间充质干细胞(MSCs) |
| 1.4 心脏干细胞(CSCs) |
| 2 干细胞移植的疗效机制 |
| 2.1 干细胞移植分化心肌细胞 |
| 2.2 干细胞移植促进心肌血管新生 |
| 2.3 干细胞移植的旁分泌功能 |
| 3 干细胞的移植途径 |
| 4 中医药对干细胞治疗心肌梗死的影响 |
| 4.1 中医药动员干细胞迁移、归巢 |
| 4.2 中医药促进干细胞增殖、分化 |
| 4.3 其他 |
| 5 小结 |
四、细胞移植修复心脏的现状与展望（论文参考文献）
- [1]活血温通方联合BMSCs移植改善心梗后缺血缺氧微环境的机制研究[D]. 王擎擎. 中国中医科学院, 2021(02)
- [2]养心通脉有效部位方干预AMI大鼠BMSCs分化microRNA机制研究[D]. 朱梓铭. 广西中医药大学, 2019
- [3]缓激肽调控人心脏c-Kit+祖细胞增殖迁移及抗凋亡的机制研究[D]. 李刚. 厦门大学, 2017(01)
- [4]《中国循环杂志》2015年第30卷关键词索引[J]. 宁田海,佟金. 中国循环杂志, 2015(12)
- [5]缺血性心衰心脏m1A甲基化谱[D]. 孙维兴. 遵义医科大学, 2021(01)
- [6]益气活血方联合骨髓间充质干细胞干预心肌梗死后心室重构的实验研究[D]. 冀楠. 天津中医药大学, 2021(01)
- [7]3D打印技术构建干细胞仿生支架用于软骨及脊髓损伤修复的研究[D]. 刘晓云. 中国科学技术大学, 2021(09)
- [8]左旋聚乳酸骨支架的力学强化及降解调控机理研究[D]. 昝君. 江西理工大学, 2021(01)
- [9]利用单碱基编辑系统构建早衰症非人灵长类模型[D]. 王芳. 昆明理工大学, 2021(02)
- [10]干细胞移植及中医药干预治疗心肌梗死的研究新进展[J]. 冯雨菲,何贵新,胡梦弦,郑国坤,肖婷,玉黎燕,申永艳,陈天宇,秦伟彬. 中华中医药学刊, 2021(03)